Спооб культивирования микроорганизмов

с (,) с ) (.) ОПИСАНИЕ ИЗОБР ЕТЕ Н И Я К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ:".,(К 577.15,(:)Ь Государственнв)и иак)итет Совета Министров СССР 2,з) .1 рц,;:е)ц, (1 пковд э б э.0 .76 ,дтд (;и, б:1 козяс 1 П 51 ((О пам, изобретениии аткрв)тий Вк)ллстс.;ь . ццсяцця 3.07.76 1) Авторы изобретени орава, К, А. Калунянц, Л, И3. Г, Медведев и Р. Д. сойфе ОЛГЕР ый научно-исследовательский биотехнический институт 1) Заявитель ВСЕСОЮ(34) СПОСОБ КУЛЬТИ ИИКРООРГАН И РОВАНИЯОВ зц)31.3 - 103эфир ззолят ьси )а 6: 30культцвирозацисиз - 1 полцок3301 Ят 3 ВсЦЛЕ12, 2540 част: зцрова 1 ц шлиоксипроп)ленсрелу в зцлс 312, 24 ц 36 часа.Ппоцссс зеПП )Е"РЕВЫЗНОНОЙ 5 КЦЛКОСТН,полцоксц: виде 10"; Часс 1 К ро и штамма СЦПРОЦЦЛЕ 5 25/ -цо" в а рос 1 д кт тамма Ва гл цоколе вы Г Оо-ной золростса кул лут в ассц м перемеш ее дэпаО:,Сц,:)КО.) ЕПЫПНО 30 ЛОй ЭЛЬг ктль г эы,Бас 1 цз пезсп;егглцколезый э;11-)Одной эмугьс.)ц дльтуры. Пр.) ку,ьсцв зц)эт 11 з-ф цоэф:)р ззолят 3ной эммльс." цд 3,ьтуры.тцчсскпк "(:с 03 якизаниц культурдльциц 3 течение 2 - 3 1-я группа В чан зал фермезтироза 5 (1 с С ос:)ЗЫК ЛР 05 К В. Смесь ооъем лозоля Ц С. ЕРИ 5 ЦЗ Ю 11-я гт(ппдИзобретение относится к )икробиолог)чеСкой ПРОМЫШОЕсцостт, 3 ЧЯСТ:)ОСТ:1: СЛОСООям культ) вирозя:-1 ия икрооргя:.измов - прэлуцецтов ферме;)тоз.Известен способ кугьтцв,:)розднц 5 с:кроорганизмоз, например продуцентов фермен- ТОВ, Ца ПЦТЯТЕЛЬНОЙ СРЕЛС, СОЛЕРОКЯЩЕ);зтос- кики углерола, азота, минера.)ь:)ые соли и ) ОЛ:.)МЕРНЫЕ СОСЛИЦЕ:)5)Я З К;:ЧСС-.ЗЕ СТИМ;ЛЯ- торя роста.Ьл:ало ис ользовднце поли:( ер: ого соел:.1- чет):)я 3 зи 1 е;),1 ястип значите;ЬПО услоккняет ко:струкцию ферме:)тсра, его мойку .:тер:1- лизацию. Кроме того. 1 р;в)енецце полпформ- ДЛЬЛЕ.)Лсп .)С ООЕСтЕЧИВЯЕТ Логтс)ТОЧ:ОЦ ЯК- тцз .ости ферментов.С цег)ьо сокращения времени культивирования, повышения зыкода продукта и улучшения ф)льтрдции кульгуряльно ж)лкости 3 кяестзс:10 л имер:)ы.; соел:)нсЙ исполъзу- ОТ 510 ЛИОКСЦЦРО;1 И;ЕПГЛ)ОКОЛЕБЫ) "Л З, КОТО- рый вводят з среду порцио:)цо., Е,(ЕСООбПЯЗНО -О ;0(С - -ЮПЛЕ сг;р ЧЕ зыц э(рир ззолцть 3 свел( перел кольтцз:розанем . .)кпоо-.гнцзмоз 3 кол "Сс:)зе О 05 - О, д, 0 т 0 0 ъ е м с. к у;1 ь т у р я л ь: 1 О ц ок ц д к 0 " т.1:1 10 - 30",-ной золной эмульсии з колцчестзе 0,01 - 0,1 " От объема куг)ьтураль.ой .к:дкости. При культивировании штамма )сд"Пв 1. Культивирование Вдс 1)ць ЛЬ)О ПОЛ 1 сЧЕЦЦЯ ЯМЛад:).д)(це црозолят в иерее).:Терс 1) прн коэффлццете зап(. .-за 15 ".1 цтдтельнОЙ спелы рязкомпонентов.вают 7,4 л" 50",о-:)Ого . с.:,Онного сракмала с рН 2,5, 22 гСаС., 66 кг КС, 88 кгкей, 22 кг 100", ного:эапц:олдтщательно перемешцздот .) Сст золопроволной водой ло 5 л3 УНС прц темте-)дтпе 35 С.компонентов,1 О 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 б 5 В другой чац загружают 528 кг (МН 4)НР 04 и 352 кг 50%-ного кукурузного экстракта, доводят объем смеси до 15 лс, перемешивают до полного растворения соли и добавляют концентрированную фосфорную кислоту до рН 6,6 - 6,8. Этус группу коэгпонентов также стерилизуют в УНС при температуре 135 С.Затем з фсрментер через УНС подают во допроводцусо воду до объема 44 эссэ. Температуру среды доводят до 45= С, производят:осев, включают мешалку ц подают стерильный воздух, Температуру среды в ферментере постепенно снижают до 37 С. рН среды снижают до 6,3 - 6,4. В фермецтер вводят .сополнительное питание в вцде 50%-ного раствора :"-рмецтцрозанного крахмала. На 6 ц 30 часах роста в ферментер добавляют простернлцзо,ваннусо при температуре 135 С в течение 30 лссн 10%-цую эмульсию пропинола Бгсорцссями по 2,2 кг (0,005% к ооъему г,льтуральцой жидкости). Общий расход пропинола Б- 26,4 кг, общая продолжительность процесса 45 нас. В конце ферментации актз;юсть амилазы достигает 41 едмл (метод Клцмовского - Родзевич).Пои отсутствии пропинола Бобщая продолжительность процесса составляет 50 часов, активность амилазы 36 ед,лс.г. Коэфсэцццецт заполнения ферментера 0,5.сП р и м е р 2. Культивирование Вас 1 в сце.-: ц 1 егслсз, с целью получения щелочнои проте":сназы.Выращивают в фермецтере (его объем 63 л) цри коэффициенте заполнения 0,7, Стерилизация питательной среды раздельная.1-я группа компонентав.В чац загружают 3,52 лсз 50,с,-ного растзора ферментированного крахмала с рН 2,5, 4,4 кг Мд 504, 4,4 кг СаС 066 кг КС 1, 2.2 кг 100% - ного пропцнола Б. Смесь перемсшизают. доводят водопроводной водой до объема 15 лсз и стерилизуют в УНС пр:. тем-.е.эатупе 13 о С.11-я гоуппа компонентов.В другой чац загружают 396 кг (МНс)НРОс и 760 кг кукурузного экстракта " со.-,ержацием сухих вецеств в количестве 50", Объем смеси дозодят ,золспр"зодцой золой до ооъема 15 л, перемешивают Э стерилг:зуют в УНС при температуре 135 С, Простерилизованную з УНС пр температуре 135 С водопроводную воду добавляют в фер.".:.-.ер чо общего объема 44 лс. Температуру с"еды з ферментере доводят до 50 С, произ-.";,ят посев, включают мешалку и подают стоцльный воздух. Температуру среды в ферсе"тере постепенно снижают до 40 С. На 12, 25 . 40 часах роста культуры г, ферментер ;:.":ят стерилизованную при температуре 135 С в течение 30 лсан 25%-ную водную -мульсгцо пропинола Бпорциями по ",2 кг (по 0,005% к объему культуральной ." зстц). Общий расход пропцнола Б8,8 кг, общая продолжцтельцость процесса 48 час. Активность протеиназы 5700 едлл (метод ФОЛП). При отсутствии пропинола Боощая продолжительность процесса 55 час, активность протеиназы 5000 едслл. Коэффициент заполнения ферментера 0,5.П р и м е р 3, Культивирование Васцз зиЬ 1 св-Ф, с целью получения нейтральной протеицазы.Выращивание прозодят в фермецтере (его объем 63 сссд) сс;эц коэффициенте заполнения 0,7, Раздельная стерн,чссзацця пцтательсой "1 э еды.1-я группа коэспоцецтов.В чан заливают 70,4 лгг 50%-чого раствора сэерссецти;.эованссого крахмала с рН 2,5, 145,2 кг лактозы, 6,86 кг МАМБО 145,2 кг К 2504, 110 кг Хп 504,4,5 кг МаС 1, 132 кг сухих пивных дрожжей, 44 кг Мд 504 и 2,2 кг 100%-ного процинола Б. Смесь персмешссзают, ее обэъеэ доводят водопроводной водой до 20 лсз и стерил,изуют в УНС прц тем-.се эатмре 135 С.11-я группа компонентов.В другой чац загруэкают 1320 с;г кукурузного экстракта и 264 кг (ХН;);НР 04. Оо.ьем смеси доводят до 15 лз и сте 1 эцлизуют в УНС при температуре 135 С. Водопроводнусо воду, простерилцзовацную в УНС прц температуре 135 С добавляют в фермецтео до общего объема 44 лсг. Температуру среды в ферментере доводят,чо 45 С. Прои.", - водят посев, включают мешалку ц подают стерильный воздух, Температуру среды постесгец:о снижают чо 37"С. На 8, 12, 24 и 36 часах роста культуры в ферментер из отдельной емкости дооавляют простерилизоваццусо .чрц 135 С в тесенце 30 лсссн 30%-ную водную эхгульссю пропцнола Бпорциями по 11 кг (0,025% к осэъем культуральной жидкости). Обсццй расход процццола Б46,2 кг, оощая поодолжительцость процесса 47 час. Активность нейтральной протеиназы культуоаль:сой жидкости 120 едлс,г (эсетод Бабах;ой. Прц отсутствии проппиола Боощая поодолжительность процесса 52 час, г.ктцвность протегназы 103 едлс,г. Коэффиц.сент запо.чнения ферме:-пера 0,5. Формул а из об рете: и я 1. Способ х с льтизц роза ниц эцкроор бац.сзмсз, например продуце:стоз ферментов, ца питательной среде, содержащей источники уг,черода, азота, минеральные соли и полимернь.е соединения в качестве стимулятора роста, отлцч ающи йс я тем, что. с целью сокоащения времени культивирования, позышения выхода продукта и улучшения фильт эацсси культуральной жидкости, из полимерцьх соединений используют полиоксцпропсленгликолевый эфир, причем его вводят в среду порционно.2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что вводят в среду полиоксипропцлецгликолевый эфи э перед культцвцровацием502 О 23 10 Составитель Г, федорова Редактор Е, Яеиьшсга Теред Е, Подуруш; иа 1",орректор 11. Симкпиа Заказ 715 ЮЯ 11 зд. М 300 Тираж 551 Ц 1.111111 И Государствениото коыитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, УК, Раушская иаб., д. 4/5Тип. Харьк. фил. пред. Г 1 атеит микроорганизмов в количестве 0,005 - 0,5% от обьема 1;ультуральной жидкости и в процессе .ультивирозания - в виде 1 О - .30% -ной годной эмульсии в количестве 0,01 - 0,1% ст обьсм а культуральной кидкост.3. Способ по пп. 1 - 3, о т л и ч а ю щ и й 1 с я тек. что при культивировании штамма Вас 11- 1 цв воЫ 111 впол иоксипропилен гли кол евый эфио вводят в виде 10%-ной водной эмульоия на Ь и 30 часах рост 2 кулътмры.4. Способ по;пп. 1 - 3, О т л и ч 2 О щ и й с Я тем, что три культивировании штамма Вас 1- ив гпевеп 1 ег 1 савполноксипропиленгликолевый эфир вводят в впле 25%-ной волной эммльсии на 12, 25 и 40 часах роста куль мгы5. Способ по пп. 1 - 3, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что при кчльтквлрован 11 и штамма Вас 11- 1 пв впЫ 112-Ф полносипропиленгликолевый эфир взодят в среду в виде 30%-ной волной эмульсии на 8, 12, 24 и 35 часах роста культу р ь.