Способ определения содержания белков в продуктах

(11, 449298 Своз Советсиии Социаиистицескиз Рескублик(22) Заявлен 6-01 и 33/Оа ф,01 И 31/20 присоединением з Государственный намнтет Саввтв Министров СССР аа делам изааретеннй и.аткрытнй(72) Авторы изобретени аснодарский политехгический институт(71) Заяви ПРОДУКТ 54)СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ 32) Приоритет -ОпубликованЮ 117 ф Б Изобретение относится к способам определения содержания белков в проектах и предназначено для использования при технологичес .ом контроле в производстве и переработке растительных и животных жиров.Известен способ определения содержания белков путем их экстрак.о ции водноспиртовощелочным раствором, проведения в экстракте биуретовой реакции и последующих колориметрирования полученного окрашенного раствора и определения иско мого количества белка.Однако такой способ не может быть использован для определения белка в жирах, так как при смешивании экстрагента с жиром образуется практически неразрушимая эмульсия и не обеспечивается полное извлечение белков, вследствие чего анализ не может бить признан точным. Кроме того, известныи способ сложен, так как предусматривает использование эталонного раствора, представляющего собой ркстракт, полученный из продукта с содержанием белка, определяемым способом Кьельдаля.С целью повышения точности определения при использовании способа для анализа жиров и упрощения его жир перед экстракцией белков растворяют, например, в петролейном эфире, в качестве эталонного раствора йспользуют смесь, состоящую из водноспиртовощелочйого раствора и реактивов, участвующих в биуретовой реакции, а определение количества белка йроводят по инсулину,Способ состоит в следующем,Жир растворяют в петролейном эФире Фракции 40-60 оС с получением мйцеллф концентрацией 40-50 :, при этом под действием раствогйтеля разрушаются связи бнлков с дру гими веествами, находящимися в жире ( глицеридамй, жирными кислотами, фосфатидами, углеводами и т.п.) и уменьшаетсл вязкость среды. К по44 ученной мицелле добавляют 0,1-0,3 -ный раствор йаОН в 50 .-ном спирте в объемном отношении 2-1 2 соответственно. Смесь интенсивно перемешивают и настаивают 40-60 мин. периодически встряхивая и центри- . фугируют 8-15 мин. при, а 4000 об/мин до прозрачности фаз.Паоле центрифугирования выбирают водноспиртовощелочной нижний слой, фильтруют ега через смоченный экстрагениом бумажный фильтр для удаления следов жира, который может быть увлечен прй отборе. Из профильтрованного раствора берут про у, приливают к ней для пцоведения биуретавой реакции Зф- ный раствор йаОН и 50%-ный раствор Си 504 смесь встряхивают, центрифугируют 5-7 мин при а 4000 аб/ /мин, колариметрируют при Л 610 /м против смеси, состаящеи из экстрагента и реактивов.По полученной оптической плотности на калибровочной кривой построенной по инсулину, опреде ляют содержание белка в растворе. Количества белка в жире рассчитывают па формуле:= 0,0001 , вса фгде с - содержание белка в растворе, полученное при колориметрировании;.а- навеска жира, г;в- количество 0,1-0 3%-нога раствора аОН в50 М-ном спирте.Пример. Навеску жира 20,0012 грастворяют в 20 мл петролейнаго эфира фракции 40-60 оС кполчченноф мицелле приливают 25 мл0,2 П-нага раствора РаОН в 50%ном спирте, Смесь перемешивают,настаивают в течение 60 мин,пеиадйчески встряхивая, и центри- .угируют 10 мин при и.= 4000 об/мин,Воднаспиртовощелочнай экстракт фильтруют через предварительно смоченныи экстрагентам фильтр,к 7 мл 4 ильтрата добавляют 2 мл 92964 30-ного раствора" йаОН и 1 мл.5.-ного раствора СиЗОд . Полученную смесь после перемешиванияцецтрифугируют 5 мин при а=4000 5 об/мин, и прозрачный центрифугатколориметрируют на ФЭКе приЛ 610 нм против смеси, состоящейиз 7 мл экстрагента 2 мл ЗОЯ-ного раствора НаОН и 1 мл 5 Ф-ного о раствора Си 304 . По калибровочнойкривой, построенйой по инсулину,определяют содержание белка в 1 мластвора, В примере показание ФЭКа,366, содержание белка в растворе и ( с ) равно 170,1 мкг/мл. Количество белка, определенного в жире,равна170,1 .25 .100 0 020,0012 .1000000Предлагаемый способ позволяетпростым путем определять наличие иколичество белка в жире, так как ы белковые примеси оказывают существенное влияние на качество жиров,продуктов их переработки и на ходтехнологических процессов. С помощью этого показателя можно конзо тролировать процесс производства и переработки жиров. ПРЕДМЕТ ИЗОБРЕТЕНИЯСпособ определения содержания белков в продуктах путем ихэкстракции вадноспиртовощелочным.растворам, проведения в экстрактебиуретовой реакции и последующих 4, колариметрирования полученногоокрашенного раствора, сравненияега оптической плотности с оптической плотностью эталонного раствора и определения искомого коли чествабелка, отличающийс я тем,что, с целью повышенияточности определения при использовании способа для анализа жиров иупрощения его, жир перед экстракцией белков растворяют, например,в петролейном эфире, в качествеэталонного раствора используютсмесь, состоящую из водноспиртовощелочного раствора и реактивов,участвущих в биуретовой реакции,а определение количества белкапроводят по инсулину.