Способ определения сульфгидрильных соединений в содержащих их продуктах

(п 438682 Союз Советских Социалистицеских РеспубликК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 1) Зависимое от авт. свидетельства2) Заявлено 15.09.72 (21) 1828856/28-13 М, Кл. С 120 13 00 с присоединением заявкиасударственный комит Совета Министров ССС по делам изобретенийи открытий(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУЛЬФГИДРИЛЬНЪ СОЕДИНЕНИЙ В СОДЕРЖАЩИХ ИХ ПРОДУКТАХ Известен способ определения сульфгидрильных соединений в содержащих их продуктах путем отбора пробы исходного продукта и введения в нее реактива,Цель изобретения - упрощение процесса 5и определение водорастворимых, легкоокисляющихся сульфгидрильных соединений типавосстановленного глютатиона.Это достигается тем, что на пробу воздействуют 1 М раствором сульфосалициловой 10кислоты, выдерживают раствор, фильтруют,в фильтрат добавляют 5%-ный раствор сульфата кадмия и 1 н, раствор едкого натрия,затем центрифугируют, а в полученном центрифугате определяют легкоокисляющиеся 15сульфгидрильные соединения 4%-ным раствором сульфосалициловой кислоты и 5%-нымраствором иодистого калия с последующимрасчетом этих соединений.П р и м е р 1. 1) В мерную колбу на 100 мл 20отвешивают 10 г отобранного растительногоили животного материала (бражку, промывные воды дрожжевых заводов, послеспиртовую мелассную барду и т, п.). Постепенноприливают 80 мл дистиллированной воды и 25взбалтывают в течение 10 мин. В хорошо перемешанную смесь медленно при постоянномпомешивании добавляют 5 мл 1 М растворасульфосалициловой кислоты, еще раз перемешивают и оставляют на 5 мин. 30 Содержимое колбы доводят водой до метки и сильно встряхивают, Смесь фильтруют через складчатый бумажный фильтр или центрифугируют.2) 50 мл прозрачного фильтрата или центрифугата, то есть половину первоначальной навески - 5 г, помещают в мерную колбу на 100 мл, добавляют 40 мл 5%-ного раствора сульфата кадмия и 4 мл 1 н. раствора едкого натрия, взбалтывают и доводят водой до метки, отстаивают 30 мин., затем центрифугируют и осторожно декантируют чтобы не захватить осадка. 3) Пипеткой Мора отбирают 50 мл прозрачного центрифугата (2) в коническую колбу на 150 мл. Это количество отвечает 2,5 г первоначальной навески. В колбу добавляют при помешивании 2,5 мл 4%-ного раствора сульфосалициловой кислоты и 2,5 мл 5%-ного раствора иодистого калия. Иодистый калий приготовляют ежедневно и проверяют на отсутствие свободного иода (качественная реакция с крахмалом). К анализируемой пробе прибавляют 10 капель 1 % -ного раствора крахмала и титруют 0,001 н. раствором К 10 З до появления устойчивой синей окраски, В случае небольшого объема раствора, идущего на титрование, пользуются микробюреткой,438682 Предмет изобретения 35 40 45 50 Составитель Г. Субботина Техред Г. Васильева Корректор Н, Учакина Редактор В. Дибобес Заказ 3701/7 Изд.131 Тираж 456 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/бСапунова, 2 Типография, пр,В качестве контроля титруют 50 мл дистиллированной воды в условиях, идентичных с опытными. Это титрование производят для внесения поправки на чистоту реактивов, а поэтому при пользовании одними и теми же реактивами контрольное титрование можно производить только один раз; при получении новой партии реактивов, контрольное титрование следует повторить.4) В коническую колбу на 150 мл отмеривают пипеткой Мора 25 мл прозрачного центрифугата или фильтрата, полученного до осаждения восстановленного глютатиона сульфатом кадмия (что равно 2,5 г первоначальной навески), добавляют 25 мл дистиллированной воды и поступают аналогично пробе 3.В этом случае, как и в предыдущем, ставят контрольный опыт на чистоту реактивов,0,001 н, раствор К 10 з готовят перед определением из заранее приготовленного 0,005 н. К 10, стойкого при хранении. 50 мл 0,005 н, раствора К 10, смешивают с 22,8 мл 1 м раствора сульфосалициловой кислоты и доводят дистиллированной водой в мерной колбе на 250 мл до метки.0,005 н. раствор К 10, готовят путем растворения 0,1783 г К 10, в дистиллированной воде в мерной колбе емкостью на 1 л и доводят водой до метки.Формула расчета; Х=А - Б. где: Х - количество восстановленного глютатиона, в мг ,;А - суммарное количество высокореакционных, легкоокисляющихся5 Н-групп до осаждения сульфатом кадмия, в условном пересчете на восстановленный глютатион,в мг о/о,Б - остаточное количество легкоокисляющихся 5 Н-групп после осаждения сульфатом кадмия в условном пересчете на восстановленный глютатион, в мгА и Б вычисляют по отдельным формулам,где А= (г - г 1)12,28; Б= (в - в 1)12,28;г - количество мл 0,001 н. К 10 з, пошедшеена титрование пробы 4;г, - количество мл 0,001 н. К 10 з, пошедшее,на титрование контроля для пробы 4; 5 10 15 го 25 зо в - количество мл 0,001 н. К 10 пошедшее на титрование пробы 3;в, - количество мл 0,001 н. К 10 пошедшее на титрование контроля для пробы 3;12,28 - коэффициент пересчета на восстановленный глютатион,В процессе определения высокореакционные, легкоокисляющиеся 5 Н-группы мгновенно вступают во взаимодействие с ничтожно малыми количествами йода, не превышающими 6 мкг, то есть 6 10 в г, По окончании реакции незначительный избыток йода тотчас же обнаруживается индикатором, Другие редуцирующие вещества, кроме указанных 5 Н-соединений, то есть редуцирующие сахара, альдегиды и тому подобные в описанных условиях в реакцию не вступают.Биологическим активатором (катализатором) считается вещество, содержащее высокореакционные легкоокисляющиеся 5 Н- группы в суммарном пересчете на восстановленный глютатион от 100 до 600 мг % и выше и восстановленный глютатион от 50 до 300 мг о и выше.Каталитически активное вещество вводят в подлежащую активированию массу или в производственную смесь из расчета содержания в них 0,2 мг % восстановленного глютатиона при условном пересчете сульфгидрильных групп на последний. Способ определения сульфгидрильных соединений в содержащих их продуктах путем отбора пробы исходного продукта и введения в нее реактива, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса и возможности определения водорастворимых, легкоокисляющихся сульф гидр ильи ых соединений типа восстановленного глютатиона, на пробу воздействует 1 М раствором сульфосалициловой кислоты, выдерживают раствор, фильтруют, в фильтрат добавляют 5-ный раствор сульфата кадмия и 1 н. раствор едкого натрия, затем центрифугируют, а в полученном центр ифугате определяют легкоокисляющиеся сульфгидрильные соединения 4%-ным раствором сульфосалициловой кислоты и 5-ным раствором иодистого калия с последующим расчетом этих соединений.