Способ получения уриказы

лйфф" ,1 Л6 н в 1фг,т:(в 9 ф П И С А Н И Е (1(1 42 И 62ЗОБРЕТЕНИЯ,Союз Советских Социалистических Республик 1К ПАТЕНТУ Зависимый от патента(088.8) осударственный ноиитет Совета Министров СССР по делам изобретений н открытий., Дата опубликования описания 26.07.7 72) Авторы изобретени Пьер Лабуро, Марсе(7 Ин сьете дЭтюд эдА Клен - Б(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕ И КАЗЬ и 28 С в склянках мкостью 1 л до поры смывают 2 л при концентрации в питательную сре остав (в кг):к области медиц ферментных преп с длиннымразования огического 1 на 1 л и ощую сле 9 днев и горлом Затем с раствора5 засевают дУ 101 ци Й Рукса спороо физио бг Иа,2 00 0,30 0,60 на 1000 л 0 С. Инку- и аэрации го составИзобретение относитсяины, точнее к производству аратов,Известен способ получения уриказы, заключающийся в том, что культуру С 1 оз 1 г 1(11 шп су 11 пс 1 гозрогцт Нс 1 выращивают на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли при 37 С в течение 5 - 7 дней, отделенные клетки промывают раствором хлористого калия и лиофильно высушивают, а затем экстрагируют фосфатным буфером рН - 7,0 при 35 С, выделяют целевой продукт из экстракта путем высаливания сульфатом аммония и последующего растворения в 0,1 М буфере, содержащем цистеин.Целью изобретения является разработка микробиологического способа получения уриказы, который позволяет повысить удельную активность фермента,Поставленная цель достигается тем, что в качестве продуцента используют культуру Азрегр 11 цз 11 ацз огухае624, которую выращивают при 20 - 35 С и рН среды 4,0 - 8,0 в течение 15 - 60 час, отделенный мицелий замор аживают при температуре от - 15 до - 30 С и измельчают, а экстракцию осуществляют при температуре не выше 30 С.П р и м е р. Посевной материал, хранящийся на зернах риса, помещают в термостат на ИностранцыДаниель, Пьер Брюно и Клод Лангл(Франция) Глюкоза (в куске) Азотнокислый натрий Калий фосфорнокислый Калий первичный кислыйфо сфор нокислый Магний серокислый (7 Н О)Кальций углекислый )Келезо сернокислоедвухвале 1(тное (7 Нз 0) Кобальт сернокислый (7 Н О)Экстракт дрожжевойку 1 ь" рыЭкстракт растворимыйкукурузыКислота мочевая рН средыСреду стерилизуют 30 мин при 1ацию проводят в течение 24 час итерильным воздухом, расход котор421162 Предмет изобретения Составитель С. ЩеневаТехред А, Камышникова Редактор Д. Пинчук Корректор В. Брыксина Заказ 1820/11 Изд Мо 687 Тираж 482 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раугпская наб., д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 3ляет О,З л на 1 л питательной среды в 1 мин, поддерживая температуру на уровне 28+1 С,После фильтрования культуральной жидкости получают 20 кг мицелия, концентрация которого равна 150 ед/г.Мицелий промывают 40 г дистиллированной воды, после чего быстро замораживают при температуре - 20 С, Замороженный мицелий измельчают и экстрагируют 40 л аммиачной воды, имеющей величину рН 9.После фильтрации производят концентрацию экстракта при пониженном давлении с уменьшением его объема в четыре раза. Затем концентрат обрабатывают двумя объемами ацетона и получают при этом 380 г неочищенного продукта, концентрация которого составляет 7000 ед/г.Полученный продукт обрабатывают 3,8 л водного раствора карбоната натрия концентрацией 0,002 М, центрифугируют и заливают равным объемом насыщенного водного раствора сернокислого аммония.Выпавший осадок центрифугируют, обрабатывают водным раствором углекислого натрия. Концентрация полученного продукта составляет 0,002 М.Нерастворившуюся часть осадка удаляют центрифугированием.Раствор после этого деминерализуют путем его пропускания через колонку Ьер 11 адех 6-25 с использованием в качестве буферного соединения раствора углекислого натрия концентрацией 0,002 М, после чего полученные таким образом активные элюаты стерилизуют пропусканием через мембрану Т 1111 роге 65 с последующей лиофильной сушкой.Выделяют 57 г готового продукта, концентрация которого соответствует 49000 ед/г.10 Способ получения уриказы путем выращивания культуры-продуцента в аэробных усло виях на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, экстракции культуры водой или буфером при нейтральном или слабощелочном рН и выделения и очистки целевого продукта из экстракта из вестными приемами, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью получения фермента с высокой удельной активностью, в качестве продуцента используют культуру Азрегр 11 цз Начцз огугае624, которую выращивают при 20 - 35 С и 25 рН среды 4,0 - 8,0 в течение 15 - 60 час, отделенный мицелий замораживают при температуре от - 15 до - 30 С и измельчают, а экстракцию осуществляют при температуре пе выше 30 С.