413188

Ф 3188 Со оз Советских Социапистицеских Республиквисимое от авт. свидетельства М 1300 Заявлено 31,Х 11.1971 ( 1731964/28-13)с присоединением заявки-ПриоритетОпубликовано 30.1.1974. Б 1 оллетень МДата опубликования описания 28 Л.1974 ссударственный комитетСовета Министров СССРпе делам нзооретеннйи открытий ДК 663.18(088. Авторыизобретен и Э. Ансберга, А, М. Ирген, В. П. Каула и Р. Э. Страздь атвийский филиал Всесоюзного ордена Трудового КрасногоЗнамени научно-исследовательского института химическихреактивов и особо чистых химических веществ Заявитель ПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НУКЛЕОЗИДФОСФАТОВ И САХАРОФОСФАТОВИзобретение относится к способам получения нуклеозидфосфатов и сахарофосфатов и может быть использовано в различных областях биохимии и медицины.Известен способ получения нуклеозидфос фатов и сахарофосфатов путем биологического фосфорилирования фосфорилирующей смеси, состоящей из сахара, аденозина, нуклеозидов или нуклеозидмонофосфатов, неорганических фосфатов, хлористого калия, хлористого маг ния, воды при рН 6,5 - 7,0 в присутствии биологического катализатора, с последующей очисткой продукта.Целью изобретения является увеличение выхода и чистоты продукта, а также упрощение 15 процесса и сокращение времени ферментации.Достигается это тем, что в качестве биологического катализатора используют экстракт водорослей, который вводят в фосфорилирующую смесь в соотношении 1:1 или 1,2:1. 20Способ осуществляют следующим образом.В качестве источника ферментов используют экстракт водорослей, приготовленный размельчением водорослей (в соотношении сухие водоросли против воды как 1:3), и выдержи вают при температуре 4 С 3 час. Используются водоросли вегетативного периода (созревания).Экстракт водостве сырья для и рослей, используемый в качеолучепия нуклеозидфосфатов 30 н сахарофосфатов, прибавляют в фосфорилирующую смесь, которая состоит из сахара, аденозина, нуклеозидов или нуклеозидмонофосфатов, неорганических фосфатов, хлористого калия, хлористого магния, воды при температуре 37 С и рН 6,5 - 7,0,Соотношение экстракта водорослей и фосфорилирующей смеси 1: 1 илн 1,2: 1. Реакция продолжается 0,5 - 1,5 час. Для прекращения реакции фосфорилирования используют 10%- ный раствор трихлоруксусной кислоты при - 7 С, взятой в объеме 25 мл на 200 мг аденозина.Для осаждения нуклеозидфосфатов применяют метиловый спирт или этиловый спирт в 7 - 10-кратном объеме. Очистку нуклеозидов осуществляют путем ионообменной хроматографии.Применение экстракта водорослей взамен дрожжей как источника ферментов качественно и принципиально улучшает способ получения нуклеозидфосфатов и сахарофосфатов.П р и м ер 1. 200 мг аденозина растворяют в 7,6 мл воды. К раствору прибавляют Ха 2 НРО 4 12 Н 20 (натрий фосфорнокислый двухзамещенный) и КН,РО, (калий фосфорнокислый однозамещенный) в весовых соотношениях 3,5%:1%. Затем вносят 0,014 г КС 1, 0,14 г МоС 1, 6 Н,О и 9,5 мл экстракта зеленых водорослей.413188 Предмет изобретения Составитель М, Ларина Редактор Н, Спиридонова Техред 3. Тараненко Корректор Т. ХвороваЗаказ 1157/9 Изд.1205 Тираж 456 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва Ж, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 3Время ферментации 0,5 - 1,5 час при температуре 37 С и рН 6,5 - 7,0. Для прекращения реакции прибавляют 1 г трихлоруксусной кислоты при 0 С. Раствор центрифугируют. К фильтрату прибавляют 10-кратный объем метилового спирта, а осадок разделяют на ионообменной колонке.Выход: 0,176 г 96 о/о АТФ (аденинтрифосфорная кислота). П р и м е р 2. 200 мг аденозин-монофосфорной кислоты растворяют в 7,6 мл воды. К раствору прибавляют ХазНР 0412 НзО и КНзРО 4 в весовых соотношениях 2,5 о/о: 0,7%. Затем добавляют 0,014 г КС 1, 0,014 г МдС 1 з 6 НзО и 9,5 мл экстракта зеленых водорослей.Процесс далее ведется аналогично примеру 1,Выход: 0,18 г 95% АТФ.П р и м е р. 3 200 мг гуанозин-монофосфорной кислоты растворяют в 7,6 мл воды. К раствору прибавляют ИазНР 0412 НзО и КН,РО 4 в весовых соотношениях 2,5%:0,7%. Затем добавляют 0,014 г КС 1, 0,014 г МдС 1 з 6 НзО и 95 мл экстракта зеленых водорослей,Далее - аналогично примеру 1.Выход: 0,12 г 90 о/о ГТФ; 0,13 г 90% ГТФ.П р и м е р 4. К 54 г сахара прибавляют 16,5 г фосфорнокислых солей, 300 мл воды, 400 мл экстракта водорослей.Раствор перемешивают 2 - 3 мин, затем выдерживают в течение 15 мин при температуре 36 - 37 С. Время ферментации 0,5 - 1,5 час. Процесспрекращают прибавлением 25 мл 50%-ногораствора трихлоруксусной кислоты. Центрифугируют. К центрифугату добавляют 21 г 5 Ва(СНзСООН)з и насыщенный растворВа(ОН), до слабо-розового окрашивания по фенол-фталеину. Реакционную смесь центрифугируют.Бариевую соль дифосфата фруктозы промы вают один раз 50%-ным спиртом и один раз96%-ным спиртом. Сушат в вакуумном эксикаторе.Выход: 53 г бариевой соли 1,6-дифосфатафруктозы.15 1, Способ получения нуклеозидфосфатов исахарофосфатов путем биологического фосфо рилирования фосфорилирующей смеси, состоящей из сахара, аденозина, нуклеозидов или нуклеозидмонофосфатов, неорганических фосфатов, хлористого калия, хлористого магния, воды при рН 6,5 - 7,0 в присутствии биологи ческого катализатора, с последующей очисткой продукта, отлич ающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения процесса, а также увеличения выхода и чистоты продукта, в качестве биологического катализатора ис пользуют экстракт водорослей.2. Способ по п. 1, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что экстракт водорослей вводят в фосфорилируюгцую смесь в соотношении 1:1 или 1,2: 1.