413189

4) 3189 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ИЯ Союз советских Социалистицеских РеспубпикАВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Зависимое от авт, свидетельстваКл. С 12 д 13/10 Заявлен1785769/28972 исоединением заявк Гасударственный комитет Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий. Бюллетень4 Дата опубликования описания 28 Х 197 Авторыизобретения, Тиунова, Д. А. Пириева и ецо ениксова Заявите на Ленина институт биохимии им. А, Н. Бах СОБ ПОЛУЧЕНИЯ ХИТИНАЗЫ 2 в в ериал 150 - 28 С. коли- одерДля культивферментерах вв колбах емко200 об/мин) вПосевной мачестве 1 - 4%жащей следуюДеминералкрабовПептонК,НР 04маь 04 чения хитиназы путем одуцентов на водной ержащей источник угвыделением хитиназы ости.позволяет увеличить Известен способ полу культивирования ее пр питательной среде, сод лерода с последующим из культуральной жидк Предлагаемый спасо выход хитиназы.Для это зуют вид А Из вида ют штамм В качес пользовать бов.льзу,5. Среду для культивирования актиномицета 15 стерилизуют при 1 атм в течение 1 час, приэтом рН после стерилизации равен 7,0 - 7,5.Температура культивирования 27 - 28 С.Аэрация при выращивании в ферментерах 0,5 - 2 объема воздуха на 1 объем среды в 20 1 мин. Скорость вращения мешалки 200 -400 об/мин. Длительность культивирования2,5 - 4,0 суток.Сухой препарат хитиназы получают путемосаждения фермента из культуральной жид кости четырьмя объемами этилового спирта,тремя объемами ацетона или сернокислым аммонисм при полном насыщении.Менее очищенный технический препаратможно получить высушиванием фильтрата 30 культуры на распылительной сушке. го в качестве продуцентов исЫпотусез Киззапоий.АсГтотусез Кшззапоой исп93.ве источидеминера ика углерода можно ислизованный панцирь краВыращивание указанного штамма можноосуществлять на водной питательной среде, содержащей 1 - 3% деминерализованного панциря крабов, 0,1 - 0,5% пептона или казеинового гидролизата, 2 - 5% однозамещенного фофсфата калия и 0,5% сернокислого магния.П р и м е р. Панцирь заливают 4 - 5%-нымраствором соляной кислоты в соотношении 1: 4, Смесь оставляют на 24 час при 4 - 25 С. Деминерализованный панцирь промывают водой до нейтральной реакции и в измельченном виде используют в качестве источника углерода прп культивировании продуцента хитиназы,ирования микроорганизм ыращивают посевной мат стью 750 мл на качалке течение 3 суток при 27 - териал вносят в среду в т общего объема среды, щие компоненты, %:изованный панцирьЗаказ 1157/10 Изд.1205 Тираж 456 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 Культуральная жидкость, полученная после отделения мицелия, способна расщеплять неизмененный нативный хитин, выделенный в виде очищенного соединения из животных объектов и грибов, атакже хитин, содержащийся непосредственно в панцирях ракообразных и скелетах насекомых (расщепление коллоидного хитина, регинированного из растворов в концентрированных кислотах, тем более не представляет больших трудностей и протекает значительно быстрее). При этом преобладающим продуктом ферментативного гидролиза является И-ацетилглюкозамин, Активность 1 мл фильтрата культуральной жидкости предлагаемого штамма (продуцента хитиназы) 18 - 22 ед.Деминерализованный панцирь крабов, предварительно измельченный в шаровой мельнице, можно расщепить на 32 до И-ацетилглюкозамина за 3 суток при 40 С под действием культуральной жидкости актиномицета А.Концентрация панциря составляет 5 , следовательно, 56 Я, хитина, содержащегося в деминерализованном панцире, превращается в Я-ацетилглюкозамин,Вместо культуральной жидкости в качестве фермента может быть применен раствор сухого препарата хитиназы.Культурально-морфологическая характеристика Ас 11 цоп 1 усез Кцгззапои 1 93,На синтетических средах (Чапек-агар, сахарозо-нитратный агар) колонии темно-оранжевые, среды окрашиваются в желтый цвет. Воздушный мицелий темно-серый. На картофельных пластинах колонии оранжевые, буро-оранжевые, бурые. Среда не окрашена. Воздушный мицелий розовато-серый.На синтетической среде СР 1 с глюкозой воздушный мицелий телесно-розовый (05) (обозначения окраски даны по шкале цветов Бондарцева, 1954) мучнистый, субстратный ржавый (Ж 1), пигмент буланый (Ж 1),На среде Ваксмана воздушный мицелий мучнистый, темно-инкарнатный (В 5), субстратный буланый (К 1), пигмента нет,На овсяной среде воздушный мицелий мучнистый, бледно-сероватый (А 6), субстратный рыжеватый (Ж 2), пигмент кожано-бурый (Ж 2). На гороховом агаре воздушный мицелий белый (Д 3), мучнистый, субстратный бистровый (К 7), пигмент темно-коричневый (Л 5).На среде Гаузе 2 воздушный мицелий не образуется. Субстратный мицелий темно.коричневый (Л 5), пигмент темно-коричневый (Л 5),На кукурузной среде Ма 2 воздушный мицелий не образуется, субстратный мицелий бистровый (К 7), пигмент сигарный (Д 7),Спороносцы короткие образуют петли и крючки. Споры цилиндрические с гладкой оболочкой.Физиолого-биохимические свойства штамма 75. Штамм гидролизует крахмал, образует меланоидный пигмент. Использует в качестве единственных источников углерода глюкозу, сахарозу, ксилозу, фруктозу, Не использует арабинозу, рамнозу, инозит, маннит. Желатину окрашивает в светло-оливковый цвет, разжижает ее. Молоко пептонизирует без коагуляции. На клетчатке растет слабо. Нитраты восстанавливает слабо. 1. Способ получения хитиназы путем культивирования ее продуцентов на водной питательной среде, содержащей источник углерода, с последующим выделением хитиназы из культуральной жидкости, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода хитиназы, в качестве продуцентов используют вид Ас(1 погпусез Кцгззапоч 11,2. Способ по п, 1, отличающийся тем, что из вида Ас 11 погпусез Кцгззапоч 11 используют штамм 93.3. Способ по пп, 1 - 2, отличающийся тем, что в качестве источника углерода используют деминерализованный панцирь крабов.4. Способ по пп. 1 - 3, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что выращивание указанного штамма осуществляют на водной питательной среде, содержащей 1 - 3% деминерализованного панциря крабов, 0,1 - 0,5% пептона или казеинового гидролизата, 2 - 5 о/о однозамещенного фосфата калия и 0,5% сернокислого магния.