Способ получения однозональной противодифтерийной сыворотки

О и и С."Н.Й ИЗОБРЕТЕНИ Союз СоветскихСоциалистическиРеспублик ельства М Зависимое от авт. сви М, Кл, А 611 23/1696889/31-1 аявлено 20.Ю 11.1971 и 1 е с присоединением заПриоритет Гасударственный камит Савета Министрав ССС аа делам изабретений и аткрытийДК 616.931-085.373 (088.8) Бюллетень Лесания 18.1.1974 публикова 1.Х.19 Дата опубликована Авторыизоб етец ия М, В. Далин, Л. В. Чарышкина и Т. аявитель Московский научно-исследовательский институт им. И, И. Мечниковаотов кцин и сывороток ПОСОБ ПОЛУЧЕНИЙ ОДНОЗОНАЛ ЬНОЙПРОТИВОДИФТЕРИЙНОЙ СЬ 1 ВОРОТКИ Изобретение относится к области медицины, точнее и спосооам получения дифтерииных сывороток:Извесген способ получения одцозоцальной про 1 иводнфтернйной сыворотки путем сорбционного удаления из нее антител корицсбактериальцой природы при помощи фильтрятд культуры коринсбактерий, выросших на срсчс с избытком железа.Цель изобретения - новы шснис спсцифичностн прспарата.Это достигается тем, что адсорбцию проводяг на ацтигснах коринебактериальцой природы, переведенных в нерастворимое состояние фиксацией их на аминопроизводцом целлюлозы.П р и и е р. Дифтерийные бактерии штамма РЖ 8 варианта Массачузетс выращивают глубинно в алюминиевом реакторе ца среде по типу Лицгуда, к которой для ингибирования продукции дифтерийного гистотоксина добавляют 11,25 7/.ил железа. Последнее готовят в виде раствора РеЯО., в цитратс натрия (44 г Ге.О на 400 мл 40%-ного раствора цитрата натрия), стерилизуют в автоклавс и добавляют в питательную среду в рсактор перед засевом маточной культуры. Через 30 - Зб час культивирования фильтрат культуры отделяют на сепараторе от микробной массы и онцснтрируют ультрафильтрацией в 100 ряз. В концсцтратс цс должно быть специфического ацтигсна, опредсляемого реакцией флокуляциц цо Рамону. Прц контрольной фильтрации через гель сефадекса Гв составе этого ультрафпльтрата должно быть две фракции, первая из которых выходит с колонки в свободном объеме, а вторая задерживается гелем ссфадекса Г.Фракция гцстотоксиня, которая обычно элюи.0 рустся с такой колонки в промежутке междудвумя указанными фракциями на границе свободного об 1,смя, в таком ультрафцльтратс должна отсутствовать. Концентрированный ультрафильтрат прц иммуно-лиффузионном 5 анализе цс должен формировать полос преципитации с моносцеццфцчсской сывороткой к дифтсрийном гистотоксишч.В цсцтрцфужцыс стаканчики смкостьк30 ил заливают цо 10,0 лл сусцсцзии иммуцосорбсцтд ц 1,0 .л сыворотки, разведенной в отношении 1: 5=-1: 8. Смесь шутслируют в тсчсцис 45 лнн при комнатной температуре, после чего стаканы переносят в центрифугу и цецтрифугируют при 3000 оо;лан в тсчс цие 15 - 20,ишн. 11 алосалок отделяют и концентрируют при помощи ультрафильтрацпи чсрсз фарфоровые свечи, покрытыс 8%-цым раствором трцдцстилцсллюлозы в ледяной уксусной кислоте. Осадок иммуносорбснтя 30 промывают 1%-ным раствором хлористого400327 10 Предмет изооретения Составитель С. Щенева Редактор Л. Ксенофонтова Техред 3. Тараненко Корректор О. ТюринаЗаказ 36888 Изд. М 2008 Тираж 467 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр, Сапунова, 2 натрия, отделяют промывные воды на центрифуге, концентрируют их также, как и адсорбированную сыворотку, и добавляют к последней. При необходимости процсдуру повторяют несколько раз с использованием свежих порций иммуносорбснта. Иммуносорбент получают на основе аминоанизолцеллюлозы известным способом.Конечный препарат противодифтерийной сыворотки после адсорбции и концентрации ультрафильтрацией проверяют в тесте двойной диффузии, используя в качестве реагента дифтерийный гистотоксин с чистотой не ниже 2700 Ь/иг, нативный дифтерийный токсин с титром нс ниже 150 У,7/лл и препарат анти- генов коринсбактериальной природы, приготовленный путем культивирования дифтерийных бактерий на среде с избытком железа. В указанном тесте однозональная противодифтерийная сыворотка нс должна формировать полос преципитации с последним антигсном, а с первыми двумя должна образовать одну четкую полосу, Допускается, однако, образование дополнительной полосы преципитата со вторым тест-антигсном при условии, что она идентична полосе, формируемой сывороткой с высокоочигценным дифтерийным гистотоксином. Способ получения однозональной противодифтерийной сыворотки путем сорбционного удаления из нее антител к антигенам кори небактериальной природы, отличающийсятем, что, с целью увеличения специфичности препарата, адсорбцию проводят на антигенах коринебактериальной природы, переведенных в нерастворимое состояние фиксацией их на 20 аминопроизводном целлюлозы.