Питательная среда для выращивания шродуцентов литических ферментов

ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Советских Социалистических РеспубликК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Зависимое от авт. свидетельства чеЗаявлено 23.Х.1971 ( 1718213/28-13с присоединением заявки МПриоритетОпубликовано 23.Ч.1973. Бюллетень зч"Дата опубликования описания 8,Ч 111..Ч, Кл, С 12 Ь ЗЖОС 12 с 13 О комитет па дслзм зобретеиий и открыт при Совете Министра СССРК 577.15.07(088,8) АвторыизобретениЗаявитель О, В. Кислухина и К. А. Калунянц есоюзный научно-исследовательский институт биосинтеза белковых веществИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЬ 1 РАЩИВАН РОДУЦЕНТОВ ЛИТИт 1 ЕСКИХ ФЕРМЕНТ 4,0.+-0,10,6-1-0,06 0,10,020,1-(-0,02Остальное итатело. т ца качалке со ско/мин прц температуИзобретение относится к производству ферментов.Известна питательная среда для выращивания продуцецтов литических ферментов, например Вас 1 цз вцЫ 1 з, Вас 11 цз тпезеп 1 ег 1 сцз,содержащая источник углерода - крахмал, органические соединения азота, семиводньшсульфат магния и воду.Целью изобретения является повышение активности продуцируемых ферментов,Достигается это тем, что предлагаемая питательная среда дополнительно содержит двузамещенный фосфорнокислый аммоний, хлористый калий и хлористый кальций.В качестве органических соединений азотатательная среда содержит экстракт соевыхбов, а также казеин,и сухие дрожжи.Компоненты питательной среды взяты в следующих количествах (г/л):Двузамещенный фосфорнокислый аммонийХлористый калийСемиводный сульфатмагнияХлористый кальцийВодаДополнительно п ьная среда содержитподсолнечное масл Пример 1. 40 г соевых бобов помещаютв колбу, приливают 200 льг 0,1%-ного 1 маОН, кипятят в течение 1 час, затем отделяют экстракт путем фильтрации на воронке Бюхнера.5 10 г растворимого картофельного крахмаласуспендируют в 200 лл воды ц клейстеруют путем подогреванця суспецзиц до 85 С прц постоянном перемешцванцц ца водяной бане.Экстракт соевых бооов ц раствор клецстерц зованного крахмала сливают вместе, охлаждают до комнатной температуры ц добавляют: 40 мл 10%-ного (чН)2 НРО; 6 лиг 10%-цого КС 1; 1 л,г 10%-ного Мф 047 НзО; 1 лт.г 10%.ного СаСз и водопроводную воду до объе ма 1 л.В среде устанавливают рН 7,0 прп помощиконцентрированного раствора СНзСООН, а затем разливают ее в колбы Эрлецмейера емкостью 300 лтл (по 100 лл в колбу) ц стерц лизуют в течение 1 час прц 0,5 ати.Охлажденную до 35 С стерильную питательную среду засевают водной суспецзцей культуры Вас, зцЬ 11 в ч, выращенной на скошенном сусло-пептонном агаре. При прцго товлении суспензиц в пробирку 18 К 180 льи скультурой вливают 20 л 1.г стерильной водопроводной воды, ц в колбы со средой вносят по 1 мл такой суспензии.Выращивание проводя30 ростью вращения 160 обКорректор Е. Талалаева Редактор Н. Спиридонова Заказ 2140/6 Изд. Ы 1587 Тирагк 467 ПодписноеЦНИИПИ Когиитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР Москвд, Ж.35, Рдушскдя иаб., д. 4/5 Типография, пр, Сапуповд, 2 ре 37+.1 С в течение 16 час. Активность литических ферментов в фильтрате культуры составляет 2720 ед.ЛА/мл.П р и м е р 2. Способ приготовления питательной среды и посевного материала, а также режим выращивания культуры те же, что и в примере 1,В качестве продуцента литических ферментов используют штамм Вас. эциоз 402, Активность лнтических ферментов в фильтрате культуральной жидкости составляет 5000 ед. ЛА/мл.П р и м е р 3. 20 кг соевых бобов помещают в аппарат, имегощий рубашку для подогрева паром и нижний сливной штуцер. В аппарат вливают 100 л воды и добавляют 10 г хаОН. Зкстракцию соевых бобов проводят в течение 1 час с момента закипания, а затем экстракт переводят в ферментер емкостью 1000 л и добавляют: 2 кг (хН)НРО, 0,3 кг КС 1;0,05 кг МфО 7 НО; 0,05 кг Са С 1, воду ло объема 500 л и затем 5 кг растворимого картофельного крахмала. Среду перемешивают 15 мин, устанавливают в ней при помощи концентрированной уксусной кислоты рН 7,2, приливают 0,5 л подсолнечного масла и стерилизуют при перемешивании в течение 1 час при температуре 116 - 120 С.Охлажденную до 40 С стерильную питательную среду засевают водной суспепзией культуры Вас. зцЫ 1 з 402, выращенной в колбах Эрленмейера емкостью 750 мл на пшеничных отрубях 71%-но 11 влажности (по 20 г воздушно-сухих или 60 г увлажненных отрубей в колбе) в течение 2 суток при температуре 37 С.Ферментацию ведут 12 час при режиме; температура 36-1-1 С, давление в аппарате 0,3 - 0,5 ати, расход воздуха - 0,5 объемов в 1 мин, перемешивание постоянное (180 об/лгггвг).Активность литических ферментов г, фильтрате культуральной жидкости составляет 1870 ед,ЛА/мл.П р и м е р 4. В ферментер емкостью 1000 л наливают 500 л воды и вносят (кг): растворимый крахмал - 5; (ХН) НРО - 2; КС - 0,3; МАЗО 7 Н,О - 0,05; СаСз - 0,05; техническийй казеин - 1; сухие медицинские дрожжи - 0,25. Среду перемешивают 15 мин, а затем при помощи концентрированной СН,СООН устанавливают в ней рН 7,2, добавляют 0,5 л подсолнечного масла и стерилизуют при постоянном перемешивании и температуре 116 в 1 С в течение 1 час.Посевной материал приготавливают так же,как и в примере 1, в качестве продуцента литических ферментов используют культурубас, зиИИз Лг.Режим ферментации: температура 36 - 37 С,10 расход воздуха - 0,5 объемов в 1 мин, давление в аппарате 0,3 - 0,5 ати, постоянное перемешивание (180 об/лгин), Продолжительностьвыращивания 12 час, активность литическихферментов в фильтрате культуральной жид 15 кости 1200 ед. ЛА/мл,Предмет изобретения1. Питательная среда для выращиванияпролуцентов литических ферментов, например 20 Васиз вцЫ 1 з, Вас 1 цз гпезеп 1 егсцз содержащая источник ууглерода - крахмал, органические соединения азота, семиводный сульфат магния и воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения активности продуцируемых 25 ферментов, среда дополнительно содержитдвузамещенный фосфорнокислый аммоний, хлористый калий и хлористый кальций,2. Питательная среда по п, 1, отличающаяся тем, что в качестве органических соедине ний азота она содержит экстракт соевых бобов.3. Питательная среда по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве органического соединения азота она содержит казеин и сухие 35 дрожжи.4. Питательная среда по пп. 1 - 3, отличающаяся тем, что ее компоненты взяты в следующих количествах (г/л):40 Лвузамещепный фосфорнокислый аммоцийХлористый калийСемиволный сульфатмагния 0,1+0,02Хлорнстый кальций 0,1+.0,02 Вола Остальное 5. Питательная среда по пп. 1 - 4, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит 50 подсолнечное масло.