Способ получения ферментного препарата кислой протеазы

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских Социалистических Республик. 6 а,22 присоединением заявкиМПК С 12 Комитет по делом изобретений и открытий при Совете Министров СССРиоритет ДК 577.156.1(088.8 Опубликовано 05 Л 111,1969. БюллетеньДата опубликования описания 26.Х 11.1969 АвторыизобретенияЗаявитель Л, И. Орещенко и Н, Ф. Фроловаесоюзный научно-исследовательский институт ферментной и спиртовой промышленности ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА КИСЛОЙ ПРОТЕАЗЫ СПО Известен способ получения ферментного препарата кислой протеазы путем культивирования ее продуцента - плесневого гриба Аэр. авагпоп - на питательной среде, содержащей пшеничные отруби, с получением экстракта фермента из поверхностной культуры гриба, осаждением фермента этанолом из экстракта, отделением осадка от питательной среды одним из известных способов, например центрифугированием, растворением осадка с получением раствора ферментов и высаливанием из него кислой протеазы сульфатом аммония.Предлагаемый способ позволяет получать высокоочищенный препарат, не содержащий примеси других ферментов, а также повысить его активность. Для этого перед высаливанием из ферментного раствора удаляют амилолитические ферменты путем обработки данного раствора щавелевокислым аммонием, а после высаливания кислой протеазы получают осадок этого ферментного раствора в воде и обессаливают одним из известных способов, например с помощью ионообменных смол.Способ, получения ферментного препарата кислой,протеазы заключается в следующем.Выращивают поверхностным способом культуру гриба Азр. аъ агпоп, продуцирующую кислую протеазу, на питательной среде, содержащей пшеничные отруби. Из выращенной культуры водой экстрагируют ферменты методом противоточного выщелачивания.Полученный экстракт охлаждают до 5 С 5 и вносят охлажденный этанол до концентрации его в смеси, равной 75 - 76%, для осаждения ферментов и центрируют для отделения образовавшегося осадка. Последний растворяют в воде в состношении 1: 15 и вновь 10 центрифугируют для удаления из него нерастворимых балластных веществ.Доводят рН центрифугата до 4,5 и обрабатывают 0,1 н, щавелевокислым аммонием при 30 С в течение 24 час. В результате такой 15 обработки происходит почти полная инактивация амилолитических ферментов (а-амилазы, декстриназы).Затем добавляют сульфат аммония до 0,6насыщения от полного для высаливания кис лой протеазы. Полученный осадок выдерживают 11 - 12 час, отделяют и растворяют в воде, обессаливают на колонке с сефадексом 6 - 25 и хроматографируют на колонке с ДЕАЕ-целлюлозой (ацетатный буфер с рН 25 5,6 и ионной силой 0,05, элюция при возрастающей концентрации МаС 1 от 0,1 до 0,5 н.в том же буфере).Фракциисодержащие кислую протеазу,обессаливают на колонке с сефадексом Ст - 25 30 и осаждают холодным ацетоном в соотноше.3нии 1: 3,5. Активность кислой протеазы в высокоочищенном препарате составляет 1035 едг, Ферментный препарат кислой протеазы содержит 71,5/о белка и оптимум его действия при рН, равном 2,0 - 2,5 и температуре 37 - 40 С. Предмет изобретенияСпособ получения ферментного препарата кислой протеазы путем культивирования ее продуцента - плесневого гриба Азр. ажагпог 1 - на питателыной среде, содержащей пшеничные отруби, с получением экстракта фермента из поверхностной культуры гриба, осаждением фермента этанолом из экстракта,249329 отделением осадка от питательной среды одним из известных способов, например центрифугированием, растворением осадка с получением раствора ферментов и высаливанием 5 из него кислой протеазы сульфатом аммония,отличающийся тем, что, с целью получения высокоочищенного препарата, не содержащего примеси других ферментов, а также,повышения его активности, перед высаливанием 10 из ферментного раствора удаляют амилолитические ферменты путем обработки данного раствора щавелевокислым аммонием, а после высаливания кислой протеазы, .получают осадок этого ферменпного раствора в воде и 15 обессаливают одним из известных способов,например с помощью ионообменных смол.Составитель Т. ПолянскаяРедактор В, ф. Смирягина Техред Л, К. Малова Корректор В. И. ЖолудеваЗаказ 3346/6 Тираж 480 ПодписноеЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРМосква Ж, Раушская наб д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2