Способ определения эндогенной интоксикации

)5 6 01 й 33/4 ОБР И Т АВ повышение точрение способа, осле осаждения сной кислотой, рнатанту добавдиктэ и через 15 скую плотность начениях более т наличие эндоожительный эфоба позволит на ность способа иееей им обраом ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОВЕДОМСТВО СССР(71) Челябинский государственный медицинский институт(72) А.К.Однопозов, И.А.Волчегорский, А.С.Пужевский и Р.И.Лифшиц (56) Авторское свидетельство СССР М 1255933; кл. 6 01 М 33/68, 1986. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЭНДОГЕННОЙ ИНТОКСИКАЦИИ(57) Способ определения эндогенной интоксикации, Использование: в медицине, в лаФ Изобретение относится к медицине и предназначено для диагностики эндогенных интоксикаций любого происхождения.Известен способ диагностики эндогенной интоксикации при почечной недостаточности путем определения в сыворотке крови субстратов эндогенной интоксикации средней молекулярной массы с помощью обработки сыворотки крови 20-250 трихлоруксусной кислотой с последующим центрифугированием и определением в супернатанте белково-пептидн ых компонентов методом Лоури,К недостаткам известного способа относятся недостаточно высокая точность. определенная техническая сложность, что связано с использованием метода Лоури. На осуществление аналитического этапа способа затрачивается не менее 40 минут.Целью изобретения является повышение точности, упрощение и ускорение способа диагностики эндогенной интоксикации.Цель достигается тем, что сыворотку или плазму крови депротеинируют трихлобораторной практике, Цель ности, упрощение и уско Сущность изобретения; и белка крови трихлоруксу центрифугирования, к супе ляют щелочь и реактив Бене мин устанавливают оптице пробы при 330 нм и при з 0,25 опт.ед./мл определяю генной интоксикации. Пол фект; использование спос 200 и более повысить точ почти в 1,5 раза ускорить е руксусной кислотой в конечной концентрации не менее 80, отделяют осадок белка .центрифугированием, в супернатанте проводят биуретовую реакцию с реактивом Бенедикта и через 15 мин (после добавления реактива Бенедикта) проводят спектрофотометрическое определение в супернатанте субстрэтов эндогенной интоксикации - определяют оптическую плотность пробы при 330 нм, и при значениях более 0,25 опт.ед./мл диагностируют эндогенную интоксикацию.Способ осуществляют следующ Образцы биологической жидкости (сыворотки или плазмы крови) в количестве 1,0 мл депротеинируют добавлением 0,2 мл трихлоруксусной кислоты в конечной концентрации не менее 80;- через 5 мин осадок белка отделяют центрифугированием: центрифугировэние осуществляют в течение 5-15 мин при 3000 об/мин;1797059 10- после осаждения белка проводят в супернатанте биуретовую реакцию с реактивом Бенедикта: 0,5 мл супернатанта переносят в пробирки, содержащие 1,5 мл Н 20 и 2,0 мл ба-ного раствора МаОН, добавляют 0,2 мл реактива Бенедикта (опыт); в контрольные пробирки вместо супернатанта вносят дистиллированную воду;- не менее чем через 15 минут измеряют оптическую плотность пробы при 330 нм в опыте и контроле в кюветах с длиной оптического пути 10 мм;- количество субстратов эндогенной интоксикации (биуретположительных веществ) выражают в единицах оптической плотности при 330 нм на 1 мл биологической жидкости, Для расчета величину оптической плотности Еззо умножают на 2 (для приведения к 1 мл) и на разведение, которое складывается из разведения биологической жидкости при депротеинировании в 1,2 раза и исходного разделения биологического материала (если таковое имеется);- при величине оптической плотности, превышающей 0,25 опт.ед,/мл диагностируют эндогенную интоксикацию.Осуществление заявляемого способа при обследовании 14 здоровых доноров показало, что среднее значение содержания субстратов эндогенной интоксикации в норме составляет 0,22 + 0,01 опт,ед,/мл, а предельное значение (верхняя граница нормы) для содержания биуретположительных веществ. 0,25 ед./мл,П р и м е р 1, Больной Д-н поступил с проникающим ранением толстого кишечника, На второй день после оперативного вмеш ател ьства состояние ухуодшилось, развился разлитой перитонит,= 39,5 . У больного взято 4 мл крови, которую центрифугировали в течение 10 минут при 3000 об/мин. К 1,0 мл полученной сыворотки доФормула изобретения Способ определения эндогенной интоксикации, включающий забор крови, добавление трихлоруксусной кислоты в конечной концентрации не менее 8, отделение осадка белка центрифугированием и спектрофотометрическое определение в супернатанте субстратов эндогенной интоксикации,бавляли 0,2 мл 60 ТХУ, центрифугировали в течение 30 минут при 3000 об/мин, Полученный супернатант - 0,5 мл - перенесли в пробирку; добавили 1,5 мл дистиллированной воды и 2,0 мл бои йаОН и 0,2 мл реактива Бенедикта. Через 15 минут замеряли оптическую плотность при 330 нм против контроля (в контроле заменяли сыворотку крови на 0,9 О йаО). Величина оптической плотности - 0,434 ед., т,е, содержание субстратов эндогенной интоксикации составило 1,042 опт. ед/мл, что превышает верхнюю границу нормы в 4,17 раза, В соответствии с предложенным способом постав лен диагноз: синдром эндогенной интоксикации. Диагноз подтвержден клинически,П р и м е р 2. Больной Ч-в, 29 лет,Поступил с жалобами на боли в правой под вздошной области, слабость, головнуюболь, диспептические явления, т = 39,7 С,оПри физикальном обследовании заподозрен острый аппендицит, При оперативном вмешательстве был удален гангренозноиз мененный аппендикулярный отросток, обнаружен местный перитонит, В соответствии с предложенным способом определено содержание субстратое эндогенной интоксикации в сыворотке крови больного: Еззо =0,25230 ед., содержание биуретположительных субстратов эндогенной интоксикации - 0,605опт,ед,/мл, что превысило верхнюю границу нормы в 2,42 раза. Диагноз: эндогеннаяинтоксикация, что соответствует клиниче 35 скому состоянию больного.По сравнению со способом-прототипомповысилась точность диагностики, Способболее прост в техническом осуществлении,так как содержит меньше технологических40 операций. Продолжительность аналитического этапа предложенного способа составляет 15 мин,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности, упрощения и ускорения способа, к супернатанту добавляют щелочь и реактив Бенедикта, проводят биуретовую реакцию и через 15 минут определяют оптическую плотность пробы при 330 нм и при значениях более 0,25 опт,ед/мл определяют наличие эндогенной интоксикации,