Способ электрофоретического разделения нуклеиновых кислот растений

(51)5 С 12 й 15/ ИЯ 2 следовательский я н, Н.Г.Туман ья н Пор ЯоЬгпапп Ьогатогу Мапца ЕТИЧ ЕСКОГО ЫХ КИСЛОТ лизкам4О яв- Сф,) зде- (,л(5)О ОСУДАРСТВЕННЫИ КОМИТЕТ0 ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(54) СПОСОБ ЭЛЕКТРОФРАЗДЕЛЕНИЯ НУКЛЕИРАСТЕНИЙ Изобретение относится к области биохимии и молекуляоной биологии растений и может быть использовано в оценке исходного материала при селекции риса; в решении генно-инженерных задач; в лабораторной и рактике молекул я рно-биологических исследований.Известен способ электрофореза биологических макромолекул на бумаге, в крахмальных гелях (1), в полиакриламидных гелях (2),Эти способы мало пригодны для электрофореза нуклеиновых кислот (НК), так как не позволяют эффективно разделять макромолекулы последних; в случае их использования затруднено выделение очищенных фрагментов нуклеиновых кислот из самого геля.Известны также способы электрофоретического разделения нуклеиновых кислот с использованием полиакриламидно-агарозных, агаровых гелей ,3), а также агарозных гелей (4), Ы 1220358 А 1(57) Использование; биохимия и молекулярная биология. Сущность: с целью регулирования скорости движения фрагментов нуклеиновых кислот в электрофоретической системе, препарат перед внесением в гель обрабатывают соединением кремния, например метасиликатом натрия в концентрации 10 - 10 М. Следствием этого является уменьшение скорости движения фрагментов нуклеиновых кислот в электромагнитном поле на 20% по сравнению с контролем. 1 табл. Недостатками шеуказанных способов являются:- невозможность направленно регулировать скорость движения фрагментов нуклеиновых кислот в электрофоретической системе, которая вызвана низкой разрешающей способностью способа;- дополнительные затраты времени и средств, связанные с повторными и последующими операциями по разделению б ких по молекулярным характеристи фрагментов нуклеиновых кислот.Наиболее близким к предлагаемому ляется способ электрофоретического ра ления нуклеиновых кислот заключающийся в том, что исследуемый препарат НК вносят в лунку горизонтального подводного (затопленного трис-боратным буфером рН 8,0) агаризованного геля (концентрация агарозы 0,9%, толщина геля 2 мм, длина 20 см), после чего на электрофоретическую систему при помощи источника питания воздействуют в течение 5 часов1770358 Формула изобретения Сравнительная характеристика результатов электрофореза (5 час) нуклеиновых кислот,проводимого по способу - прототипу и предлагаемому способу азат Пройденный путь, % Замедление, Скорость зам ления, %/ча РР 001 электромагнитными полем с параметрами: сила тока - 194 мА, напряжение - 82 мВ. Затем процесс прекращают и изучают результаты на трансиллюминаторе,Недостатками способа являются: - низкая разрешающая способность относительно фрагментов, близких по молекулярной массе;- невозможность направленного регулирования фрагментов Н К в электромагнитном поле;- дополнительные затраты времени и средств, связанных с повторными и последующими операциями по разделению близких по молекулярным характеристикам фрагментов НК.Целью изобретения является увеличение разрешающей способности способа за счет снижения скорости движения фрагментов нуклеиновых кислот в электромагнитном поле,Поставленная цель достигается тем, что в известном способе электрофоретического разделения нуклеиновых кислот, заключающемся в помещении препарата НК в затопляемый буфером агарозный гель и воздействии на указанный преперат электромагнитным полем, перед внесением в гель препарат обрабатывают метасиликатом натрия в концентрации 10 - 10М.Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.Исследуемый препарат дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) из 12-дневных проростков риса сорта Краснодарский 424 выдеркивали врастворе 10 М, 10 М, 10 М, 10 М, 10 М метасиликата натрия, в зависимости от варианта опыта, в течение 24 часов, затем растворяли в 8% растворе сахарозы, содеркащей 0,1% бромфенологового синего, вносили в лунку горизонтального подводного агарозного геля, Гель затоплен слоем трис-боратного буфера, рН 8,0. Концентрация агарозы в геле 0,9%, толщина геля 2 мм, длина 20 см. Затем в электрофоретическую систему при помощи 5 источника питания воздействовали в течение 5 часов электромагнитным полем с параметрами; сила тока 194 мА, напряжение 82 мВ, За ходом электрофореза следили по движению бромфенолового синего, По 10 окончании процесса гель прокрашивали врастворе этидиум бромида и просматривали на трансиллюминаторе. Результаты электрол и за и редста вл ен ы в та бл ице. Ка к следует из привеуенных данных, обработка 15 НК 10,10, 10 М раствором метасиликата натрия приводит к изменению электрофоретических показателей: уменьшению пройденного пути и снижению скорости движения фрагментов НК. Это, в свою оче редь, позволяет разделять фрагменты НК,близкие по электрофоретическим свойствам масса, заряд и т.д,); выделять из совокупности фрагментов тот, который необходим для биохимических и генноин женерных целей,Способ электрофоретического разделе ния нуклеиновых кислот растений, включающий внесение препарата нуклеиновых кислот в агарозный гель и воздействие на препарат электромагнитным полем, о т л и - ч а ю щ и й с я тем, что, с целью увеличения 35 разрешающей способности способа засчет снижения скорости движения фрагментов нуклеиновых кислот в электромагнитном поле, перед внесением в гель препарат нуклеиновых кислот обрабаты вается метасиликатом натрия в концентрации 10 - 10М,