Способ выявления хроматина в лимфоцитах крови на мазках

(57) Изобретение относится к медицине, а именно к иммуноцитохимии.Цель - более полное выявление хртина за счет лучшего контраста хртиновых структур. Мазки крови дорашивания обрабатывают раствором л.минисцирующих антител к иммуноглобулинам, а для окрашивания используют10 М раствор бромистого этидия, приготовленного на 0,01 М .трис НС 1, приэтом окрашивание проводят в течение10-15 мин. Способ значительно повы-.шает точность и позволяет дифференцировать виды клеток.(56) А.Е, Океан 616-0.88,8 Колесников Использова мического и логия, 1979 СПОСОБ ВИЯВ ФОЦИТАХ КР ов и Л.Б. 1 Осупова(088,8)В.А., Сондоре 0.6ние этидия для цизучения хроматина.21,9,1029.ЛЕНИЯ ХРОМАТИНАВИ НА МАЗКАХ тохи Цито .,(54) В ЛИМ 1Мазки помещают во влажную камеру и оставляют в термостатируемом шкафу при 37 С на 30 мин, после чего отмы" вают дважды по 15 мин Физиологицес" ким раствором и проводят Флуорохро" мирование 10 М раствором бромистого. этидия на. Физиологическом растворе, забуференном 0,01 М трис НСХ (рН 8) в течение 10 мин и снова отмывают физиологическим раствором 1 мин, Для измерения интенсивности люминесцен" ции Флуорохромированных лимфоцитов препарат помещают на предметнйй столик микроскопацитофлуориметра с Фотометрической люминесцентной насадкой и цифровым вольтметром, Люми, несценцию возбуждают светом с длиной волны 436 нм. Интенсивностьлюминесценции измеряют. при длине волны 615 нм.Цитофлу вне сивность лю и Изобретение относится к медицине, а именно к иммуноцитохимии, и может быть использовано для оценки имиуно". логического состояния организма.Цель изобретения - полное выявление хроматина за счет луцшего контраста хроматиновых структур.Способ осуществляют следующим образом.Из крови, взятой из пальца, гото" вят стандартные мазки. Мазки Фиксируют на предметных стеклах в смеси ацетон:этанол 1:1, проводят через гистологическую батарею спиртов с понижающейся концентрацией (96, 70, 30 ) .дистиллированную воду и наносят на них несколько капель раствора анти" сыворотки к иммуноглобулинвм человека, меченной ФИТЦ, или раствора моно" специфических антител к определенно" му классу иммуноглобулинов человека, меченных ФИТЦ в рабочем разведении. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГННТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗК АВТОРСКОМУ СРИДЕ ориметром измеряют Инт минесценции: 20 лимфоц15 Составитель Л. СтебаеваТехред И.дидык Корректор М, СамборскаящРедактор И. СтрельниковаЮ а Заказ 1577 Тираж Подписное ВНИКЛИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5,тов, несущих поверхностные иммуноглобулины, отличаются от остальных характерным зеленым свечением мембраныи 20 лимфоцитов, не имеющих иммуноглобулиновых детерминант, и находятсредние значения, выраженные в относительных единицах, На мазках, обработанных растворами моноспецифических антител к 19 А, 19 сь 19 И 190 10или 19 Е, меченных ФИТЦ, определяютинтенсивность. люминесценции 1 А-,19 С И В- или 1 Г, " положиэ 9 Ф 9 9тельных лимфоцитов соответственно.Активность хроматина лимфоцитовв норме И+ш оценена в группе,состо"ящей из 10 здоровых человек) составляет. 23,7010,71 отн.ед. у 1- кле"ток; 24,5011,02 отн,ед. у 1+ - кле"ток. 20П р и м е р 1. Больной П 50 лет.Лиагноз при поступлении: смешанныйцирроз печени, портальная гипертензия. В анализе крови: лейкоциты7,6 1 О"/л, лимфоциты " 273, СОЭ - 2531 мм/ч. В иммунологическом профилекрови; Т"лимфоциты " 59, В"лимфоциты - 211,При проведении цитохимическогоанализа выявлено. значительное подав- ЗОление активности хроматина как в субпопуляции 19- лимфоцитов, так и19 - лимфоцитов. Значения интенсивности их люминесценции составляли13,86 и 8,53 отн,ед., соответственно, что ниже нормы на 41,54 и 65,24.При дальнейшем обследовании больного установлен диагноз первичного рака печени. Лапароскопически установленоналичие множественных метастазов.П р и м е р 2. Больной Б., 47 лет.Диагноз при обследовании;, хронический абструктивный бронхит с астматическим компонентом, эмфизема легких,диффузный пневмосклероз ДН 1-П, Впериферической крови " лейкопения 14(3,6 109/л). В иммунологическом проФиле: Т-лимфоциты - 504, В"лимфоциты - 22,При цитохимическом анализе субпопуляций лимфоцитов активность хромати.на 1 - клеток находилась в пределахнормы и составляла 21,30 отн.едтогда как функциональная активностьхроматина 1 - лимфоцитов, оцениваемая по интенсивности их люминесценции, была снижена по сравнению снормой на 47,8 и составляла12,38 отн.ед. Больной прошел курссимптоматического лечения, послечего отмечалась нормализация этогопоказателя,Способ повышает точность за счетисключения диссоциации хроматина иболее полного связывания красителяпутем проведения.флуорохромированияв 10 М растворе бромистого этидия,приготовленного на забуференном физиологическом растворе, а также засчет проведения отмывки препаратовот неспецифически связанного красителя. Кроме того, способ сокращает,Формула изобретенияСпособ выявления хроматина в лимФоцитах крови на мазках путем ихФиксации и окрашивания в растворебромистого этидия с последующим спектрофлуорометрическим исследованием,о т и и ч а ю щ и й с я тем, что,с целью полного выявления хроматиназа счет лучшего контраста хроматиновых структур, мазки до окрашиванияобрабатывают раствором люминисцирующих антител к иммуноглобулинам, адля скрашивания используют 10 фМ раствор бромистого этидия, приготовленного на 0,01 М трис НС 1, при этомокрашивание проводят в течение 1 О 15 мин.