Способ приготовления гистологических препаратов для люминисцентного выявления -хроматина в интерфазных ядрах

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЩИАЛИСТИЧ ЕСНИРЕСПУБЛИК Н 9) ЯО ОП 01 М 1 3 ОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИИ ОБРЕТЕНИЯ ВИДЕТЕЛЬСТВУ ОРСК 24/28-14(54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕН ГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ НОГО ВЫЯВЛЕНИЯ У-ХРОМАТ ФАЗНЫХ ЯДРАХ ГИСТОЛО- ЛЮМИНЕСЦЕНТА В ИНТЕРОПИСАНИ(57) Срезы ткани депараАинируют, доводят до воды через этанол нисходящей концентрации, инкубируют в0 0,3%-ном растворе трипсина при 34 С 30-45 мин, промывают в воде, погружают в 2%-ный раствор уксусной кислоты, а затем в красящую смесь состава: 0,005%-ный раствор квинакрина гидрохлорида на 2%-ной уксусной кислоте 96 этанол - глицерин (4,5-5) :(1-1,5) : (3,5-4,5) на 2-4 мин, обезвоживают в спиртах восходящей концентрации, просветляют и заключают в полистирол. Свойства препарата не изменяются в течение 8 мес хранения в темноте при 20-22 С. Дифференциальная светимость У-хроматина не ухудшается.1355896 Формула изобретения ЧирковаЪчук Корректор О, Кравцова Заказ 5787/38 Тираж 776 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, )К, Раушская наб., д. 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Изобретение относится к медицине,в частности к цитологии,ф Цель изобретения - удлинение сроков хранения препарата путем окраши 5вания его в красящей смеси, дополнительно содержащей глицерин и спирт.П р и м е р 1. Образец тканииндивидуума мужского пола фиксируютЬв жидкости Карнуа, после проводки 10через целлоидин-парафин и заливки впарафиновые блоки изготавливаютгистологические срезы толщиной5-7 мкм и монтируют их на предметныестекла. Срезы депарафинируют по известной методике в двух сменах ксилола по 5 мин в каждой, доводятдо воды через растворы этанола нисходящей концентрации (96, 80, 70,40 ), инкубируют в 0,3%-ном растворе 20трипсина в термостате при 34 С 3045 мин, промывают в дистиллированнойводе, на 30 с погружают в 2%-ныйраствор уксусной кислоты и окрашиваютв течение 2 мин в красящей смеси 25следующего состава: 0,0005%-ный раствор квинакрина дигидрохлорида нао2%-ной уксусной кислоте - 96 этанол - глицерин в соотношении 5:1:4,затем срезы обезвоживают в растворах 30этанола восходящей концентрациио о(70 - 2 мин, 96 - 2 мин, абсолютныйэтанол - 2 мин), просветляют в двухпорциях ксилола по 3 мин и заключаютв полистирол. После полимеризациизаключающей среды препараты готовыдля исследования под микроскопом врежиме люминесценции при длине волнывозбуждающего света 300-400 нм.П р и м е р 2, Образец ткани фиксируют в жидкости Карнуа, после проводки через целлоидин-парафин и заливки в парафиновые блоки изготавливают гистологические срезы толщиной5-7 мкм и монтируют их на предметныестекла. Срезы депарафинируют по известной методике в двух сменах ксилола по 5 мин в каждой, доводят до водычерез растворы этанола нисходящейконцентрации (96, 80, 70, 40 ), инкуСоставитель ЭРедактор А. Огар Техред А,Крав бируют в 0,3%-ном растворе трипсинаов термостате при 34 С 30-45 мин, промывают в дистиллированной воде, на 30 с погружают в 2%-ный раствор уксусной кислоты и окрашивают в течение 4 мин в смеси состава: 0,0005%-ный раствор квинакрина дигидрохлорида наи 2%-ной уксусной кислоте - 96 этанол - глицерин в соотношении 4,5:1,5:4. Затем срезы обезвоживают в растворах этанола восходящей концентрации, просветляют в ксилоле и заключают в полистирол.Результаты, полученные в примерах 1 и 2, аналогичны. У-хроматин выявляется в виде крупного блока квинакринположительного материала, имеющего изумрудно-зеленую флюоресценцию на желто-зеленом или коричнево-зеленом фоне ядра. При использовании предлагаемого способа свойства препарата не изменились в течение 8 мес хранеония в темноте при 20-22 С, дифференциальная светимость У-хроматина не ухудшилась,Препараты, изготовленные по из- . вестному способу, после хранения в течение 4-5 сут становятся непригодными для исследования. чСпособ приготовления гистологических препаратов для люминесцентного выявления 7-хроматина в интерфазных ядрах путем изготовления целлоидинпарафиновых срезов и их окраски в 0,0005%-ном растворе квинакрина дигидрохлорида на 2%-ной уксусной кислоте, о т л и ч а ю щ и й с я. тем, что, с целью удлинения сроков храпения препарата, к раствору красителя добавляют этанол и глицерин в соотношении краситель - этанол - глицерин (4,5-5) : (1-1,5) : (3,5-4,5), производят окрашивание в течение 2-4 мин, обезвоживают в спиртах восходящей концентрации, просветляют в ксилоле и заключают в полистирол.