Способ выделения дезоксирибонуклеиновой кислоты из органов животных

)5 С 07 Н 21/О ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕ СВИДЕТЕЛЬСТВУ К АВТОРСК ению бибретения и сокра, измельавливаютимеется 5-8 мм, в й эфир - и коровы ыделения вГОСУДРС 1 ВС НГ 1 г.,й КОМИГГтпо иэое 1 Ретсниям и ОткРытиРмпРи Гкнт сссР(71) Институт биоорганической химии АНБССР(54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ ИЗ ОРГАНОВ ЖИВОТНЫХ Изобретение относится к получению биохимических препаратов, конкретно к получению ДНК из органов животных, и можетбыть использовано для крупномасштабногоейделения ДНК,Целью изобретения является повышение выхода ДНК и сокращение времени выделения,Измельченный до состояния фарша орган эаморажиеают путем продавлиеанияфарша через решетку с размерами отверстий 5-8 мм в сосуд, содержащий жидкийазот или смесь эфир-сухой лед,П р и м е р 1. 1 кг селезенки пропускаютчерез мясорубку. Фарш помещают в цилиндр пресса, на выходе которого имеетсярешетка с отверстиями диаметром 5 мм, ипродавливают в жидкий азот. После замораживания в течение 3 мин фарш извлекают изсосуда при помощи сита, а затем помещаютв морозильник (1-20 С), где он хранитсядо выделения, Перед выделением фаршу дают возможность оттаять (20 мин), затем размельчают при помощи гомогениэатора иресуспендируют в 5 л стандартного солево(57) Изобретение относится к получ охимических препаратов. Цель изо состоит в увеличении выхода ДНК щении времени выделения, Орган ченный до состояния фарша, прод через пресс, на выходе которого решетка с диаметром отверстий жидкий азот или смесь диэтиловы сухой лед. Выход ДНК селезенк 770-830 мг на 100 г сырья. Время в 3.5 ч. 1 табл,го раствора, фильтруют через пластмассовую сетку с ячейками размером 2 мм и центрифугируют при 2500 об/мин (2000 д) в течение 10 мин при 00 С, Осадок повторно гомогенизируют в 5 л стандартного солевого раствора и центрифугирование повторяют (5 мин). Осадок ресуспендируют в 5 л стандартного солевого раствора, добавляют 1,2 л 17-ного раствора додецилсульфата натрия и нагреваютдо 65 С, Раствор охлаждают до 10 С и добавляют 5 л раствора 5 М гчаО, имеющего температуру 0 С, Раствор центрифугируют е течение 30 мин (2500 об/мин), ДНК осаждают иэ надосадочной жидкости одним объемом этанола, Осадок последовательно промывают в 60, 70, 80.100-ном иэопропаноле, Содержание белка в образце определяют методом Лоури, содержание РНК - путем хроматографии на оксиапатите, Характеристика ДНК. выход 760 мг на 100 г фарша (что составляет 94;6 исходной ДНК, белка 0,8, РНК 2,07 гмол.м 2,6 10 Д)П р и м е р 2, 1 кг селезенки коровы пропускают через мясорубку. Фарш поме1705300 Составитель Т. ЗабоикинаРедактор В, Трубченко Техред М,Моргентал Корректор М, Максимишинец аказ 168 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ С 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5.Гагарина, 101 одственно-издательский комбинат "Патент", г, У щают в цилиндр пресса, на выходе которого имеется решетка с отверстиями диаметром 8 мм и продавливают в смесь диэтиловый эфир-сухой лед Все остальные операции проводят, как в примере 1.П р и м е р 3. 1 кг селезенки коровы пропускают через мясорубку. Фарш помещают в цилиндр пресса, на вьоде которого имеется решетка с диаметром отверстий 7 мм и продавливают в жидкий азот. Все остальные операции проводят как в примере 1.П р и м е р 4, 1 кг почек коровы пропускают через мясорубку. Фарш помещают в цилиндр пресса, на выходе которого имеется решетка с диаметром отверстий 5 мм, продавливают в жидкий азот. Все остальные операции проводят как в примере 1,Аналогичным образом осуществляют выделение ДНК иэ легких, сердца и печени, Результаты выделения отражены в таблице.Таким образом, изобретение позволяет повысить выход ДНК и сократить время выделения ДНК с мол.м, не менее 10 Д, содертжащей не более 2,06 белка, осадок которой имеет белый цвет (цвет ДНК иногда включают в технические условия, например, ТУ 10 П-71, ДНК высокополимерная изселезенки к руп ного рогатого скота),Формула изобретенияСпособ выделения деэоксирибонуклеи новой кислоты иэ органов животных, включающий замораживание органа,- иэмельчение, гомогенизацию, отмывку ядерного материала гомогената. депротеинизацию и спиртовое осаждение ДНК, о т л и ч а ю щ и й с я тем. что. с цельюповышения выхода и сокращения времени выделения, орган измельчают до состояния фарша, а замораживание осуществляют путем продавливания фарша через 20 решетку с диаметром отверстий 5-8 мм вжидкий азот или смесь дизтиловый эфир - сухой лед,