Способ определения эндотоксемии при ожоговой болезни

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУбЛИК 169174 19) э 6 01 й 33/53 ОСУДАРСТВЕННЫИ КОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИРИ ГКНТ СССР ИСДНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТО У СВ ЛЬСТВУ е относ пользов ии при я - пов огами т сывор екс ток е 103, авнени кол иче атов и(57) Иэобретени может быть ис ния эндотоксем Цель иэобретени больного с ож крови, выделяю ится к медицине и ано для определеожоговой болезни. ышение точности. У производят забор отку и лейкоциты и сичности. При его определяют эндою с прототипом на ство ложноположина 12 - ложноотвычисляют инд значении больш токсемию. По с 30 снижается тельных реэуль рицательных. Леикоц паринизиров методом - к при 37 С по Отсасывают щенную лейк(56) Авторское свидетельство СССР ЬЬ 1018015, кл, 6 01 й 33/48, 1983. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭНДОТОКСЕМИИ ПРИ. ОЖОГОВОЙ БОЛЕЗНИ Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения токсичных свойств сыворотки крови при различных заболеваниях. Целью изобретения является повышение точности способа,Способ осуществляют следующим образом.Из испытуемой пробы крови выделяют лейкоциты и сыворотку. Полученную сыворотку (0,1 мл) разводят в 4 раза физиологическим раствором(0,3 мл) и фильтруют через владипоровый фильтр УАМ, При этом из сыворотки отфильтровываются белки с молекулярной массой выше 10 кД. В осадке остаются среднемолекудярные пептиды, обуславливающие токсические свойства сыворотки,иты выделяют из геанной крови общепринятым ровь отстаивают в термостате д углом 45 О в течение 30 мин. надосадочную плазму, обогаоцитами. Лейкоциты осаждают путем центрифугирования при 1000 об/мин и дважды отмывают физиологическим раствором.К осадку отмытых лейкоцйтов добавляют физиологический раствор в таком количестве, чтобы довести концентрацию лейкоцитов примерно до 2 х 10 клеток (в среднем 0,4 мл физиологического раствора). Точную исходную концентрацию лейко.цитов подсчитывают в камере Горяева, предварительно добавив к 0,1 мл взвеси лейкоцитов 0,2 мл физиологического раствора и 1,6 мл 5-ного раствора уксусной кислоты (исходная проба).К 0,1 мл лейкоцитарной взвеси добавляют 0,2 мл физиологического раствора и помещают в термостат при 37 С на 90 мин (контрольная проба). К 0,1 мл лейкоцитарной взвеси добавляют 0,2 мл ультрафильтрата аутологичной сыворотки и помещают в термостат при 37 С на 90 мин (опытная прсба). После инкубации в каждую пробу добавляют 1,6 мл 5-ного раствора уксусной кислоты и подсчитывают количество лейкоцитов в каждой пробе.1691747 Степень токсичности испытуемой лю токсичности сыворотки (ПТС).сыворотки оценивают по показате. количество лейкоцитов в конт ольной и обе -количество лейкоцитов в опыте исходное количество лейкоцитов 19 в опытной пробе ПТС - Х 100% =9%23 66 ПТС - Х 100% =25% 71 П р и м е р 1, Кровь интактной крысы собирают в 2 пробирки - пробирка с гепарином (50 ЕД на 1 мл крови) для получения лейкоцитарной взвеси и пробирка для консерванта для получения сыворотки.После свертывания крови в пробирке без консерванта сгусток отделяют от стенок пробирки и центрифугируют при 1500 об/мин в течение 10 мин, Полученную сыворотку фильтруют через владипоровый фильтр УАМ - 100 с помощью мембранной установки под давлением 2 атм, 8 опыте используют ультрафильтрат аутологичной сыворотки.Лейкоциты выделяют из гепариниэированной крови общепринятым методом - кровь отстаивают в термостате при 37 С под углом 45 в течение 30 мин. Отсасывают надосадочную плазму, обогащенную лейкоцитами, Лейкоциты осаждают путем центрифугирования при 1000 об/мин и дважды отмывают физиологическим раствором по 1 - 2 мин.К осадку отмытых лейкоцитов добавляют физиологический раствор в таком ко личестве, чтобы довести концентрацию лейкоцитов примерно до 2 х 10 клеток (в6среднем 0,4 мл физиологического раствора). Точную исходную концентрацию лейкоцитов подсчитывают в камере Горяева, предварительно добавив к 0,1 мл взвеси лейкоцитов 0,2 мл физиологического раствора и 1,6 мл 5%-ного раствора уксусной кислоты (исходная проба). К контрольной пробе, состоящей из 0,1 мл лейкоцитарной взвеси, добавляют 0,2 мл физиологического раствора и помещаю в термостат при 37 С на 90 мин. К опытной пробе, состоящей из 0,1 мл лейкоцитарной взвеси, добавляют 0,2 мл ультрафильтрата аутологичной сыворотки и помещают в термостат при 37 С на 90 мин. После инкубации в каждую пробу добавляют 1,6 мл 5%-ного раствора уксусной кислоты и подсчитывают количество лейкоцитов в каждой пробе.Получены следующие результаты: Количество лейкоцитовв исходной пробе 23 Количество лейкоцитовв контрольной пробе 21 Количество лейкоцитов П р и м е р 3, Ожог крысе наносят контактным способом (площадь ожога 25% по верхности тела, И Б степени), Через 3 дняпосле ожога кровь собирают в 2 пробирки и проводят анализ по методике, описанной в примере 1.Получены следующие показатели, 15 Количество лейкоцитовв исходной пробе 71 Количество лейкоцитовв контрольной пробеКоличество лейкоцитов20 в опытной пробе 48 25 Способ определения токсичности сыворотки крови позволяет проще и точнее оценить не изученное ранее действие токсинов на лейкоциты; дает возможность определить токсичность сыворотки крови эа 2,5 - 30 3 ч; может быть использован не только дляопределения уровня токсемии при ожоговой болезни, но и для оценки эффективности проводимого лечения, Кроме того, предлагаемый способ может применяться 35 для определения токсичности крови и придругих заболеваниях (поражениях печени, почек, острых отравлениях и пр.).По сравнению с прототипом снижаетсяколичество ложноотрицательных результа тов на 30%, а ложноположительных на 12%.ф о р мул а изобретен ия Способ определения эндотоксемии приожоговой болезни, включающий забор крови больного, выделение сыворотки, инкуба цию с форменными элементами крови споследующим вычислением показателя токсичности, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, из крови дополнительно выделяют лейкоциты и 50 инкубируют их с сывороткой, при этом сыворотку предварительно подвергают ультрафильтрации, и при индексе токсичности более 10% определяют эндотоксемию.