Способ культивирования клеток животных и человека

СОК)З СОР СКИХСОИАЛИС ГИЧЕСКИРЕСПУБЛИК 78 А)5 А 61 К 31/705 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТ ЕЛЬСТВ К АВТОРСКОМУ СВ(54) СПОСОБ КУЛЬТИВТОК ЖИВОТНЫХ И ЧЕЛ ой физики АН СССР.Мякишева льтуры клеток для983. ИРОВАНИЯ КЛЕ- ОВЕКАавшевааввЪ ГОСУДАРСТБЕННЫИ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯКПРИ ГКНТ СССР Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано в биотехнологии и онкологии.Цел ь изобретения - предотвращение контаминации культур клеток лимфоидными и вирустрансформированными клетками. П р и м е р 1. Влияние строфантина 0 на рост эмбриональных клеток человека (ЭКЧ) и опухолевых клеток Ва) при смешанномпосеве культур.Готовятсуспензию ЭКЧ в концентрации 50 тыс.кл/мл на сРеде ДМЕМ с 107 р-ной. фетальной сывороткой. Параллельно на этой же среде готовят суспензию клеток йа) в концентрации 50 тыс.кл/мл, Далее во флаконы Карреля вносят по 2,5 мл клеточной суспензии ЭКЧ и Ра). Затем в одну группу из трех флаконов (со смешанными культурами) вносят 10 мкл/мл строфантина с конечной концентрацией его в среде 0.01 мкг/мл. В следующую группу флаконов вносят 0,1 мкг/мл строфантина, в другую 1,0 мкг/мл, в следующую 10 мкг/мл. Растворы строфантина готовЯт на 307 р-ном этаноле, поэтомУ в контрольные три флакона вносят по 10 мкл/мл 30-ного этанола,(57) Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано в биотехнологии и онкологии, Цель изобретения - предотвращение контаминации культур клеток лимфоидными и вирустрансформированными клетками достигается за счет внесения в культуральную среду строфантина 0 в концентрации 0,1 - 20 мкг/мл или дигоксина в концентрации 2,5-5,0 мкг/мл,Приготовленные таким образом контрольные и опытные культуры помещают для культивирования в термастат при 37 . Клетки подсчитывают в камере Горяева через 5 сут культивирования. При этом клетки ЭКЧ, которые в отличие от суспензионной культуры Ра) пролиферируют только прикрепляясь к подложке (контакт - зависимая культура), снимают трипсином.Внесение строфантина в среду в дозах 0,1 - 10 мкг/мл вызывает 100"-,ь-ную гибель опухолевых клеток, в то время как в контро О ле, без строфантина, эти клетки активно 00 пролиферируют и чис)то их к концу опыта СО достигает 360 тыс,кл/мл. ДП р и м е р 2. Влияние дигоксина на рост (О ЭКЧ и опухолевых клеток йа 11 при смешан-ном посеве культур.Готовят суспензию ЭКЧ в концентрации 50 тыс.кл/мл на среде ДМЕМ с 100-ной фетальной сывороткой. Параллельно на этой же среде готовят суспензию клеток йа) , в концентрации 50 тыс,кл/мл, Далее во флаконы Карреля вносят по 2,5 мл клеточной суспензии ЭКЧ и йа). Затем в одну группу из трех флаконов (со смешанными кул ьтурами) вносят 10 мкл/мл дигоксина с конечной1688878 Составитель С.Рыбалкин,Техред М.Моргентал Корректор Т,Палий Редактор И.Шмакова Заказ 3762 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент". г. Ужгород, ул.Гагарина, 101ю концентрацией его в среде 0,25 мкг/мл. В следующую группу флаконов вносят 2,5 мкг/мл дигоксина, в другую группу 5 мкг/мл, в следующую 25 мкг/мл. Растворы дигоксина готовят на 30;6-ном этаноле, поэтому в контрольные три флакона вносят по 10 мкг/мл 306-ного этанола.Приготовленные таким, образом контрольные и опытные культуры помещают ля культивирования в термостат при 37 С. Клетки подсчитывают в камере Горяева через 5 сут культивирования. При этом ЭКЧ снимаюттрипсином.Внесение дигоксина в среду в дозах 2,5-25 мкг/мл вызывает 100-ную гибель опухолевых клеток, в то время как в контроле, без дигоксина, эти клетки активно пролиферируют, число их. к концу опыта достигает 325 тыс.кл/мл. Наиболее эффективнымидозами дигоксина являются 2,5-5 мкг/мл, кото 5рые, вызывая гибель всех опухолевых клеток,не оказывают влияния на фибробласты ЭКЧ.Ф ор мул а из о Ь рете н и яСпособ культивирования клеток животных и человека путем инкубирования кле 10 ток в питательной среде, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью предотвращения контаминации культур клеток лимфоидными и вирустрансформированными клетками, впитательную среду вносят строфантин 0 в15 концентрации 0,1-10 мкг/мл или дигоксин вконцентрации 2,5-5,0 мкг/мл,