Способ определения лизиса эритроцитов в иммунологических реакциях

(5)5 6 01 И 33 ЕН РЕ ВТОРС СВИДЕТЕЛЬСТВ В.Кара ник и Т.В,Ки Применения комплемоза, - Авт24.РЕДЕЛ ЕН ИММУНО ие реакции угента в диагно,канд,диссГ,ИЯ ЛИЗИСА ЛОГИЧЕСКИХ ие чувс ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ПИСАНИЕ ИЗО"ч. 25едовательский институтикробиологии и инфекци Изобретение относится к медицине, а именно, к иммунологии.Цель изобретения - повышен твительности способа.Способ осуществляют следующим образом,В иммунологических реакциях в качестве индикатора гемолиза используют анти- тельный эритроцитарный диагностикум из сыворотки против гемоглобина, а степень гемолиза оценивают по интенсивности агглютинации диагностикума.П р и м е р 1. Определение гемолитической активности стафилококкового а-токсина, Последовательные разделения токсина готовят в 0,850-ном растворе хлористого натрия в обьеме 0,5 мл. Затем добавляют в каждую пробирку 1 каплю (0,025 мл) взвеси 5-ных нативных бараньих эритроцитов, Пробирки выдерживают при комнатной температуре в течение 2 ч и затем(57) Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, Цель изобретения - повышение цувствительности иммунологических реакций (например, реакций связывания комплемента и определения гемолиза), сопровождающихся лизисом эритроцитов барана, После проведения исследования в каждую лунку добавляют 0,50-ную взвесь антител ьного эритроцитарного диагностикума к гемоглобину эритроцитов барана. Специфическую активность в иммунологических реакциях определяют по агглютинации диагностикума, Чувствительность реакции при этом возрастает по сравнению с прототипом в реакции угнетения связывания комплемента в 28 раз, а в реакциях прямого гемолиза в 35 раз. центрифугируют при 100 об/мин в течение 20 мин, Дозатором берут по 0,05 мл надосадка и переносят в лунки планшета для иммунологических реакций, В эти и контрольную лунки вносят по 0,025 мл 0,50-нойвювЪ взвеси антительного эритроцитарного диагностикума к гемоглобину барана. Антительный эритроцитарный диагностикум к О гемоглобину барана получен сенсибилиза- ф цией фиксированных эритроцитов иммун- ЯЬ ной сывороткой против гемоглобина при ф помощи амидола. Гемолитическую актив- ( ) ность а-токсина характеризуют наибол ьшим его разведением, при котором в лунках зарегистрирована отчетливая (на 3-4 креста) агглютинация эритроцитарного диагностикума.П р и м е р 2, Определение неполных антител к Тохораэпа цопд в реакции угнетения связывания комплемента. Реакцию. ставят микрометодом в планшетах титрато1661643 Составитель В,ЛитовченкоТехред М,Моргентал Корректор О.Кравцова Редактор Н,Яцола Заказ 2119 Тираж 413 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, К 35, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 ра Такачи. К последовательным разведениям 0,025 мл исследуемых сывороток больныхтоксоплазмозом добавляют по 0,025 млантигена токсоплаэм в рабочем разведении, затем добавляют по 0,025 мл комплемента в рабочей дозе и по 0,025 млиммунной сыворотки кролика к возбудителю токсоплазмоза в дозе 1-2 сывороточныеединицы, которые определяют путем предварительного титрования последней с 2 10, единицами токсоплазменного антигена,Пробы оставляют при 4 С в течение 18 - 20 ч.После этого во все лунки вносят 0,5 мл гемолитической системы 1,5 ф-ная взвесь бараньих эритроцитов, сенсибилизированных 15коммерческой гемолитической сывороткой).Через 30 мин контакта при 37 С во вселунки вносят по 0,025 мл 05 оь взвеси эритроцитарного диагностикума, Реакцию учи тывали через 1,5-2 ч. За титр исследуемой 20сь 1 воротки принимают ее наибольшее разведение,. в котором наблюдают агглютинац 1 о диагности кума,При исследовании 9 сыворотках средний титр антител к возбудителю токсоплаэмоза составлял 1;496,8+ 2,0.П р и м е р 3, Точность определенияантител при помощи РУСК по известному ипредлагаемому способам оценили по варьированию результатов тестирования - ко эффициенту варьирования, отражающему воспроизводимость метода, Исследовали одну и ту же пробу сыворотки крови больной токсоплазмозом 30 раэ каждым способом.Таким образом, чувствительность предлагаемого способа определения лизиса эритроцитов существенно выше, чем по известному, в реакциях прямого гемолиза увеличение чувствительности составило в 35 раз и угнетения связывания комплемента - в 28 раз, Точность предлагаемого способа не ниже, чем известного, а высокая специфичность обеспечивает надежность диагностического использования, Это открывает новые возможности определения агентов с небольшой гемолитической активностью и неполныхне связывающих комплемент) антител.Формула изобретения Способ определения лизиса эритроцитов в иммунологических реакциях путем добавления эритроцитов в опытную пробу с последующей регистрацией гемолиза, о т л и. ч а ю щ и й ся тем, что, с целью повышения чувствительности способа; после добавления эритроцитов в пробу вносят эритроцитарный антительный диагностикум к гемоглобину эритроцитов барана, а регистрацию гемолиза проводят по агглютинации диагностикума,