Способ определения этаноламина в биологическом материале

(505 0 01 й 33/4 ГОСУДАРСТВЕННЫЙПО ИЗОБРЕТЕНИЯМПРИ ГКНТ СССР МИТЕТТКРЫТИЯ ЗОБРЕТЕНИЯ ОПИСАН. %20зоотехническо-ветеринарПРЕДЕЛЕНИЯ ЭТАНОЛАГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ Изобретение относится к медицине и может быть использовано в экспериментальной и клинической биохимии.Цель изобретения - ускорение и повышение точности способа определения эта. ноламина в биологическом материале.Способ осуществляют следующим образом.Берут навеску исследуемого органа в 0,5-1,0 г (в зависимости от органа), добавляют 10 мл 6 -ного НС 04, гомогенизируют в гомогенизаторе Поттера, центрифугируют гомогенат при 3000 об. в течение 15 мин, надосадочную жидкость переносят в другую пробирку, рНдоводят до 4,0 2 ИКОН и помещают в холодную бане (О С в течение 30 мин) или в морозилку при -10 С на ночь, КС 04, который осаждают на холоде. удаляют центрифугированием (3000 об. в течение 15 мин при 0 С). Надосадочную жидкость переливают в чашечки для выпаривания (или тигли) и выпаривают на водяной бане, Сухой остаток растворяют в 0,5 - 1,0 мл Н 20 и наносят 0,05 мл на электрофоретическую ленту (хроматографическая бумага любого сорта), Электрофорезпроводят в камере ОЕ (Венгрия) при напряжении 1000 В и силе Ы 1652914 А 1(57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано, в экспериментальной и клинической биохимии, Цель изобретения - ускорение и повышение точности способа, Способ заключается в получении безбелкового экстракта гомогенатов ткани, Электрофорез проводят в пиридинацетатным буфере с рН 3.9-4,0, окраску - нингидрином, элюирование - спиртовым раствором С 0304 и фотометрирование при А 540 нм, 2 табл. тока 20 А. В камере помещаются 10 лент в 4 см при длине 44 см (на каждый см Н = 25 В, Б= 0,5 А). Ленты смачивают используемым для разделения пиридинацетатным буфером с помощью пульверизатора (или пипет- С кой). Электрофорез длится час. В данном буферном растворителе этаноламин обладает максимальным Ю (0,64) среди нитгидрин положительных соединений безбелкового экстракта. Основные аминокислоты - аргинин (йт = 0,48) и лизин (йт = 0,5) - четко отделяются от этаноламина, практически не разделяясь одна от другой,Результаты количественного определе- О ния свободного этаноламина в органах и крови лабораторных животных используемыми в литературе и предлагаемыми методами приведены в табл. 1.Процедуры окрашивания нингидрином, элюции спиртом и фотометрирования окрашенного раствора при 540 нм стандартны. При каждом определении вместе с опытными пробами аналогичным процедурам подвергается стандартный раствор этаноламина, три концентрации которого используются для построения калибровочной кривой, по которой вычисляется количе1652914 Таблица 1 20 Таблица 2 19,2+0,7 12,6+1,4 Составитель В. МитюшинРедактор А. Маковская Техред М.Моргентал Корректор В. Гирняк Заказ 1770 Тираж 417 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 ство этаноламиня в опытных образцах, Эксинкция линейна при концентрации этаноламина 0,5-6,0 мкг в 1 мл фатаметрируемого раствора.При данном способе определения используемые концентрации пиридина и ацетата резко уменьшены (в 5-10 раз) по сравнению с используемыми в хроматографии и электрофореэе концентрациями буферных растворителей для разделения аминокислот и аминов в билогическом материале, что весьма существенно, учитывая оксичность указанных веществ.Время осуществления способа 50-60 Мин при 200-210 мин по способу-прототипу,Результаты определения этаноламина вмозге крыс двумя способами (мкМ/г ткани)приведены в табл. 2.Формула изобретения5 Способ определения этаноламина в биологическом материале путем получения безбелкового экстракта, электрофоретического разделения, окраски раствором ни нгидрином, элюирования спиртовымраствором Со 304 и фотометрирования при А=540 нм, отличающийся тем,что, с целью ускорения и повышения точности.электрофоретическое разделение проводят 15 в пиридинацетатном буфере с рН 3,9-4.0,