Способ выделения лейкоцитов из крови

(51)5 6 О ТЕ.Н И ОПИСАН ИЗОБ й медицина, А,А,Сохин Л.Р., Земля- метод изучеейкоцитов в 2, с.733 - 734. ЕЙКОЦИТОВ Изоб ожет бы ых мето Цель твд выхо ов кров Споседицине и лабораторе количение объемоб осуществляют следу Кровь в об ца в стерильн том (20-25 ед Пробирку с кр и ставят в тер наклона 25 н ции в термост эритроцитов и ную пробиркуГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) Дойецкий государственныский институт им. М.Горького(56) Гюллинг Э.ВПомыткинаная И.А, Модифицированныйния торможения миграции лагарозе, - Лаб, дело, 1977, М 1(54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ЛИЗ КРОВИ етение относится к мть использовано дляов диагностики.зобретения - повышеда лейкоцитов и сниж ъеме 0,5 - 1,0 мл берут из пальую и ро бирку с анти коа гул я нгепарина на 1.0 мл крови). овью тщательно встряхивают мостат при 37 С под углом а 20-30 мин, После экспозиате плазму и верхний слой ереносят в чистую стерильи центрифугируют 7 - 10 мин(57) Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологическим методам исследования, и может быть использовано иммунологическими лабораториями для оценки специфического клеточного иммунитета, Из образца крови объемом 0,5 - 1,0 мм выделяют3лейкоциты путем гравитационного осаждения в термостате, наклоняя пробирку с кровью под углом 25 О, без добавления градиента плотности, Примесь эритроцитов разрушают в 0,35 - 0,4;4- ном растворе МН 4 С при 30 - 40 С, Выход количества лейкоцитов увеличивается в 4-5 раз по сравнению с известным способом и уменьшает в 5 - 10 раз объемы крови для исследования, 1 табл. при 1000 об/мин; 4/5 объема сыворотки отбирают и используют для изучения факторов гуморального иммунитета. К осадку клеток добавляют подогретый до. 37 - 40 С 0,35 - 0,4%-ный раствор МН 4 С в обьеме 2,0 - 3,0 мл. Лизис эритроцитов контролируют визуально, после чего лейкоциты дважды отмывают 5 - 10-кратным объемом питательной среды для культивирования клеток, Затем клетки ресуспендируют в 0,5 мл среды 199 и рассчитывают количество лейкоцитов в единице объема, Полученная лейкоцитарнэя взвесь в концентрации не менее 1- 2 х 10 клеток/мл может использоваться для оценки клеточного иммунитета в РТМЛ, РБТЛ, Е-РОК, ЕАС-РОК и других реакциях в зависимости от задач исследования. Выделенного количества лейкоцитов достаточно1649444 Результаты выделения лейкоцитов из гепаринизированной крови предлагаемым и известным способомИсходное содержание лейкоцитов в 1 мкл кровипредлагаемого известного С - ов С,И,Ю - ов В,П.В, - ев Н,В,П - на Н,П. Б - я И.Н. Б - н В,В. К - ко В.И. П-ло В.С,9800 8200 9400 8600 8200 10500 9800 11000 13900 11500 12900 12000 11400 14000 13100 14100 3200 2100 2500 3100 2000 3500 3000 32 ОО 4 0,01 (0,01 (0,01 ( 0,010,01 ( 0,01 (0,01 (0,01 Составитель Г, КрюковаТехред М.Моргентал Корректор Т. Колб Редактор С,Лисина Заказ 1519 Тираж 420 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 для комплексной оценки клеточного звена иммунитета.П р и м е р. Выделение лейкоцитарной взвеси с помощью сравниваемых способов было проведено иэ равных объемов крови (1,0 мл), взятой иэ пальца у детей в возра те 1-3 года с неблагополучным аллергологическим анамнезом, Выделенная суспензия лейкоцитов использовалась для получения характеристик клеточного иммунитета (РТМЛ, РБТЛ, и Е-РОК), сыворотка крови для определения показателей гуморального иммунитета (РИД по Манчини, РПГА).Преимущества предлагаемого способа заключаются в том, что данный метод позволяет из малых объемов крови (0,5-1,0 мл) получать суспензию лейкоцитов в концентрации, достаточной для комплексного изучения клеточного звена иммунитета, Количество лейкоцитов, выделяемых с помощью предлагаемого способа, в 4-5 раз больше, чем с помощью известного способа, что позволяет уменьшить объем исследуемой крови в 5 - 10 раэ.Метод позволяет отказаться от использования доротостоящих градиентов плоскости, используемых в известных способах выделения лейкоцитарной массы, что дает возможность избежать воздействия вцсокомолекулярных соединений на рецепторный аппарат клетки, позволяя более достоверно определять .эффекторную и функциональную активность иммунокомпе тентных клеток,В предлагаемом способе сывороткакрови может быть использована для изучения факторов гуморального иммунитета и биохимических показателей крови без ка ких-либо ограничений. Способ выделениялейкоцитов из микрообъемов крови наряду с повышением экономичности и эффективности позволяет отказаться от венопункции и связанных с этим сложностей изучения 15 клеточного иммунитета у населения, в томчисле и у детей раннего возраста. Формула изобретения Способ выделения лейкоцитов из крови 20 путем инкубирования гепаринизированнойкрови в термостате под углом наклона, с последующим отбором плазмы и эритроцитов, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения количества выхода лейкоцитов 25 и снижения объемов крови, используют 0,5 -1,0 мл крови, инкубируют в термостате под углом наклона 25 и разрушают примесь эритроцитов добавлением 0,35 - 0,4-ного раствора ИНО при температуре 37 - 40 С,