Способ определения чувствительности организма к пыльцевым аллергенам

(л клеток лее чем с контр на), оп ность кПр Й ляли ли иэвлека надрез лами в Хенкса ливали (10.-30) 20 мкл конечн по 10 м ческий ного из ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗО АВТОРСКС)МУ СВИДЕТЕЛЬС(53) 615.375(088,8) (56) Косников В. В., Г. Е. Добрецов, 8. А. Фрадкин, В. А, Скворцова, Оценка степени сенсибилизации больных поллинозами с помощью тест-системы тимоциты крысы-флуоресцентный зонд, Лабораторное дело, 1984, 1 Ф 7, с. 423-426.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ОРГАНИЗМА К ПЫЛЬЦЕВЫМ АЛЛЕРГЕНАМ (57) Изобретение относится к медицине, в-частности к аллергологии, Цель изобретения - повышение точности, ускорение и упИзобретение относится к медицине, в частности к аллергологии, и может быть использовано в диагностике поллинозов,Целью изобретения является повышение точности, ускорение и упрощение способа.Способ выполняется следующим образом.В суспензию выделенных обычным способом лимфоцитов тимуса крысы вводят последовательно плазму крови исследуемого больного, водный раствор аллергена и водный раствор красителя 4-(и-диметиламиностирил 1-метилпиридиния (ДСМ) до его конечной концентрации 0,2-0.7 мкМ. Лимфоциты инкубируют с введенными ингредиентами, после чего исследуют в люминесцентном микроскопе, Подсчитывают количество флуоресцирующих лимфоцитов на каждые 100 1 б 49445 А 1 рощение способа. Изобретение заключается в том, что в суспензию лимфоцитов тимуса крысы вводят последовательно плазму крови исследуемого больного, водный раствор аллергена и водный раствор флуоресцентного красителя 4-(и-диметиламиностирил 1-метилпиридиния, Лимфоциты инкубируют с введением ингредиентами, после чего исследуют в люминесцентном микроскопе, Подсчитывают количество флуоресцирующих клеток на каждые 100 клеток в суспензии и при его снижении более чем в 1,5 раза (на 30 - 70) по сравнению с контролем/контроль проба беэ аллергена/ определяют повышенную чувствительность к аллергену, Предлагаемый способ позволяет ускорить определение не менее чем в 5 раз, повысить точность в 1,5 раза, а также упростить процев суспенэии и при его снижении бов 1,5 раза(на 30 - 70;ь) по сравнению олем (контроль - проба беэ аллергеределяют повышенную чувствительданному аллергену,и м е р 1. Обычным способом выдемфоциты тимуса крысы. Для этого ли тимус крысы, скальпелем делали вдоль органа и препаровальными игытряхивали лимфоциты в раствор Полученную суспензию клеток разв лунки по 0.1 мл в концентрации млн/мл, В каждую пробу вводили по водного раствора ДСМ (10 мкМ - ая концентрация в пробе 0,2 мкМ) и кл плазмы больного М. (аллергиринит, коньюнктивит) и раствора одпыльцевых аллергенов в конечной1649445по-разному: коэффициент К составил величину от 1,8 до 5,4. Таким образом, предлагаемый способ позволил выявить аллерген иэпыльцы лисохвоста, к которому больной М,5 наиболее чувствителен (К=5,4),П р и м е р 2, Аналогичным образомисследовали плазму крови больного С.(бронхиальная астма, атопическая форма). Вкаждую пробу (0,1 мл клеточной суспензии)10 вводили по 7,0 мкл раствора ДСМ (10 мкМ -конечная концентрация в пробе 0,7 мкМ) ипо 10 мкл плазмы больного С. и раствороваллергенов. Были оценены пыльцевые аллергены ежи сборной, тимофеевки, лисохвоста, овсяницы, ржи, мятлика, пырея.Коэффициент К превышал для всех указанных аллергенов величину 1,7. Аллергеныиз пыльцы тимофеевки вызвал практическиполное тушение флуоресценции клеток К= 69,Таким образом предложенный способпозволяет:ускорить поределение чувствительностик аллергену по сравнению с прототипом неменее, чем в 5 Раз;повысить точность определения до 100;упростить процедуру определения;уменьшить объем необходимой для определения крови с 40 мл до 0,2 мл,ф ор мул а и зоб рете н ияСпособ определения чувствительностиорганизма к пыльцевым аллергенам путеминкубации пассивно сенсибилиэированныхлимфоцитов тимуса крысы с аллергеном и35 флуоресцентным красителем 4(п-диметиламиностирил)-1-метилпиридиний с последующим учетом результатов реакции с помощьюлюминесцентного микроскопа, о т л и ч а ю 40 щ и й с я тем, что, с целью повышенияточности, ускорение и упрощение способа,лимфоциты тимуса сенсибилиэируют плазмой крови исследуемого пациента, флуоресцентный краситель используют в концентрации45 0,2-0,7 мкМ и при снижении количества флуоресцирующих клеток в поле зрения микроскопа в 1,5 и более раз по сравнению среакционной смесью без аллергена определяют повышенную чувствительность к дан 50 ному аллергену.Составитель Р. Гуменюк Редактор М.Васильева Техред М,Моргентал Корректор А,Осауленко Эвкээ 1869 Тираж 417 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская нэб,. 4/5Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина. 101