Способ получения -карболиновых алкалоидов из гармалы обыкновенной

(51) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ К АВТОРСКОМУ Сви ТЕЛЬСТ тений ерман,Охгогдг 4.БОЛИНОВЫХОВЕННОЙ к биотех ие екбласти Изобретениебиотехнологии и Целью изобрение эффективнос тся еннои инженерии ся повыше- а счет й культуры й способна овне ния явля способа растущ в У ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕпО изОБРетениям и ОтнРытияПРИ ЩНТ СССР(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 3-КААЛКАЛОИДОВ ИЗ ГАРМАЛЫ ОБЫК(57) Изобретение относитсянологии и к генной инженериизобретения является повыше получения постоянно еРе 8 апщю Ъагша 1 а, сохраняющеность к синтезу алкалоидов ур целого растения.Способ состоит в том, что осущестляют направленное инфицирование г: .гипокотилей стерильных проростков гармалы с помощью вирулентного штамма АргоЪасгегшп гМго 8 епез (штамм А), несущего К 1-йлазмиду, которая, встраиваясь в геном клеток гармалы, вызывает их трансформацию, морфологи" ческое проявление которой заключается в опухолевом росте корней.П р и м е р. Для проведения работы используют одномесячные стерильные проростки гармалы обыкновенной.Инфицирование сегментов гипокоти" ля проростков проводят свежей культ тивности способа за счет полученияпостоянно растущей культуры РерапцшЪагша 1 а, сохраняющей способность ксинтезу алкалоидов на уровне целогорастения. Цель достигается за счетиндукции ризогенеза в клетках гармалыпутем инфицирования сегментов гипокотиля стерильных проростков вирулентным штаммом А 8 гоЪасгег).цш гМго 8 епез(штамм А), несущим К 1-плазмиду,что позволяет получить трансформацию,приводящую к образованию непрерывно .растущей ризогенной культуры с высоким уровнем биосинтеза д-карболиновыхалкалоидов,рой А.гдго 8 епез (18-часовой) в среде Мурасиге и Скуга в течение 24 ч при встряхивании на качалке . После инкубации обработанные сегменты промывают стерильной средой, подсушивают фильтровальной бумагой и помещают на агаризованную питательную среду МЯ, не содержащую гормонов с добавлением антибиотика (клафоран - 500 мг/л) для элиминирования бактерии. Через 3-4 недели на сегментах появляются участки с растущими корнями, Эти трансформированные участки отделяют и пересаживают на свежую среду того же состава, Через 2-3 пассажа (т.е.6-9 недель) участки переносят на агаризованную питательную среду МЯ не содержащую антибиотик, и выращивают на ней в течение 3 недель, Иск- лючение антибиотика после элиминироия бактерии приводит к стимуляции та корней и образованию значительрастительной массы (ростовой ин1594180 других регионов, приводит к аналогичным результатам и также позволяет получить непрерывно растущую культуру гармалы обыкновенной.Таким образом, предлагаемый способ позволяет повысить эффективность получения р-карболиновых алкалоидов из гармалы обыкновенной за счет получения постоянно растущей культуры, сохраняющей высокий уровень биосинтеза " карболиновых алкалоидов.,Формула изобретения Составитель Т.ЗабойкинаТехред М.ХоданичКорректор О.Ципле Редактор Н.Рогулич Заказ 2812 Тираж 298 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж Раушская наб., д, 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул, Гагарина, 101 декс полученной риэогенной культуры 6-го пассажа составляет от 15 до 20 в течение 3-недельного ее роста).Хроматографирование метанольного экстракта, полученного из лиофилизи 5 рованной культуры, на тонком слое ЯьОв системе хлороформ: метанол: аммиак (10:4: 1) с последующим элюированием гармина и гармалола покаэыва О ет, что концентрация веществ в транс- генной культуре составляет 2,6 мг на 1 г сухих корней для гармина и 1,03 мг для гармалола, что в 20 и 2 раза (соответственно) ниже концент рации алкалоидов в корнях проростков гармалы. Учитывая, что вес 3-недельной трансгенной культуры в одной колбе в среднем в 300 раз выше, чем вес корня одного проростка гармалы, об О щая .продуктивнрсть полученной культуры выше продуктивности проростков в 20 раз по гармину и в 165 раз по гармалолу.Отличием трансгенной культуры 25 гармалы является также ее непрерывный рост и возможность планируемого выращивания растительного сырья в любое время года,Использование в качестве исходного материала проростков гармалы обыкновенной из семян, полученных иэ Способ получения,6 -карболиновых алкалоидов из гармалы обыкновенной, включающий индукцию ризогенеэа в клетках гармалы, выращивание полученной ризогенной культуры и выделение иэ нее алкалоидов, о .т л и ч а " ю щ и й с я тем, что, с целью повышения эффективности способа за счет полученйя постоянно растущей культуры гармалы обыкновенной, сохраняющей способность к синтезу алкалоидов на уровне целого растения, индукцию риэогенеза осуществляют путем инфицирования сегментов гипокотиля стерильных проростков вирулентным штаммом АнгоЬасгегьцт гМяодепез А, несущим К 1-плазмиду.