Способ оценки неспецифической иммунофлуоресценции

(72) (53) (56) 9/28-148890, Бюл. Р 30ут экспериментальнойКазССРдыкова5 (088.8)логические методы. М987, с.472. 445206 29.06, 15.08. Инстит огии АН К,А.Са 615.47 Иммуно сина, 1(57)гии,Цель ос ге фл преп ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР СПОСОБ ОЦЕНКИ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ ОФЛУОРЕСЦЕНЦИИИзобретение относится к биоло- в частности к иммунохимии.изобретения - повьппение точлокализации исследуемого анти- и выявление неспециАической есценции на гистологических ратах в методе непрямой АлуоИзобретение относится к биологии, в частности к иммунохимии, и может быть использовано как тест для определения наличия исследуемого антигена на гистологическом препарате,Целью изобретения является повьппение точности локализации исследуемого антигена и выявление неспецийической Алуоресценции на гистологических препаратах в методе непрямой иммуноАлуоресценции.Способ выполняется следующим образом.Испытуемые гистологические препараты инкубируют с антителами к исследуемому антигену, для элюции этих первичных антител с антигенного ресценции. Способ заключается в инкубации гистологических препаратовс антителами к исследуемому антигенуи последующей элюции этих первичныхантител с антигенного субстрата3-молярным раствором роданистого натрия. После отмывания АосАатным буАером препараты обрабатывают вторичными антителами к иммуноглобулинамкролика, мечеными Алюоресцеинизотиоционатом (БЛИТЦ). Специфическая Алюоресценция при такой обработке полностью исчезает, а неспециАическаяАоновая Алюоресценция остается такойже, как в контрольных препаратах,обработанных только АосАатным буАером (аутоАлюоресценции), или препаратах, обработанных только ФИТЦконьюгированными антителамн. субстрата используют 3-молярный раствор роданистого натрия. Препараты отмывают АосАатным буАером, обрабатывают вторичными антителами к им" муноглобулинам кролика, мечеными флуоресцеинизотиоцианатом (ФИТЦ).СпециАическая Алуоресценция при эток исчезает, а неспециАическая Аоновая флуоресценция остается такой же, как на контрольных препаратах, обработанных только АосАатным буАером, или препаратах, обработанных только ФИТЦ - коньюгированными антителами.П р и м е р. Исследовали локализацию ганглиозидов (С ) на поверхности ранних доимплантационных заро" дышей мыши методом непрямой иммуно4 1585764флюоресценции после элюирования связанных первичных антител ЗМ раствором роданистого натрия; при иммуноФлюоресцентном исследовании локализации антигена, слабо экспрессированного на препарате, и наличии Аонового неспециАического свечения введение дополнительной контрольной тестсистемы позволит избежать неправильной оценки данных; исключается необходимость применения в каждом случае сложного по выполнению и длительного иммуно-адсорбированного контрольного теста; более того, при использовании деАицитных препаратов антител соответствующий антиген не всегда доступен,Составитель Р.ГуменюкТехред Л.Олийнык Корректор С.Черни Редактор И,ЦиткинаЗаказ 2325 Тираж 508 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г,ужгород, ул. Гагарина,10 4флуоресценции. Яйцеклетки и раннихзародышей Аиксировали, помещая в4%-ный Аормалин на 2 ч. Затем зародышей переносили в капле на обезжиренные предметные стекла, предварительно обработанные в течение 30 минО, 1%-ным раствором протамин-сульАата,и подсушивали на гистологическомстолике при 40 С, Перед процедуройиммуноФлюоресцентного окрашиванияпрепараты отмывали в ФБ (0,1 И; рН7,2), содержащем 0,01% тритон-х"100.Препараты обрабатывали 60 минраствором первичных антител к 6лифотмывали 30 мин АосАатным буАером с0,01%-ным тритоном-х(0,01 И,рН 7,2; этот буАер использовали вовсех других случаях), затем наносилираствор 3 И роданистого натрия, инкубировали 30 мин, отмывали препаратыи наносили ФИТЦ-конъюгированные вторичные антитела к иммуноглобулинамкролика. Далее следовала обычнаяпроцедура отмывки и заключения препаратов в глицерин. Б препаратах, обработанных таким образом, специАическая флюоресценция на поверхности зародышей не наблюдалась, Процесс элюирования антител с антигенного субстрата занимает 30 мин,Предложенный способ позволяетточно диААеренцировать специАическуюи неспециАическую Алюоресценцию засчет полного "гашения" специАической35 формула изобретения Способ оценки неспециАической иммунолуоресценции на гистологическом препарате, содержащем специАический антиген, путем добавления антител и сЬлуоресцеинизотиоцианат - меченой антисыворотки, о т л и ч а ю щ и й - с я тем, что, с целью повышения точности локализации исследуемого анти- гена, в качестве антител используют специАические антитела к исследуемому антигену и дополнительно применяют элюцию первичных антител с анти- генного субстрата 3-молярным раствором роданистого натрия.