156345

Класс 6 011; 421, 13 аа Мо 156345 СССР ОПИСАНИЕ ИЗОбРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ одписная группа Лв л Леонтьева Китросский, В. 3. Горкин3 Я сарова.В,КомСеверина ФОТОМЕТРИЧ ЕС СТИ МОНОАМИН ГО С РЕД ЗЫ Е СПОСОБ СПЕКТ АКТИВЗаявлено 27 икал епам изобретений 962 г. за ЛЪ 789230/3 открытий при Совет оМинна ров СССза 9633 в Комитет по Опебанловано В Бюнаетене изоореееннй и товарных знак 1 Лзвестны способы спектрофотометрцческого определения активности моноаминоксидазы путем гомогенцзаццц исследуемого материала детергентом, отфильтровывация соедшительной ткани, внесения в пробы раствора субстрата и измерешгя оптической плотности. Способы предусматривают применение в качестве субстрата кцнурамцца цлц бензиламина. При использовании кццурамина активность моноамцноксидазы определяется по убыли субстрата при окцслцтельном дезамииировании его ферментом. Для получения четких результатов реакция ведется до тех пор, пока не окислцтся значительное количество внесенного в пробы амина. Такое снижение концентрации субстрата в ходе реакции может повлиять на ее скорость ц привести к искажению результатов.При использовании в качестве субстрата бензиламцца спектрофотометрическое определение производят при 250 лпк. Однако в этой области спектра проявляется способность многих бцохцзпческих компонентов тканей (белков, г клеотцдов, ароматических аминокислот т. п.) поглощать ультрафиолетовые лучи.Предлагаемый способ спектрофотометрцческого определения акгцдцссти моноаминоксидазы предусматривает цспользог.ацце в качестве субстрата л-нитро-и-оксибезилазица. что сокращает время и повышает точность определения активности моцоамццоксцдазы.При фермецтативном дезамиццродании л-нцтро-и-окспбецзилазпна образуется я-нитро-гг-оксибензальдегцд, который в водной среде прц 315 лпгк в 10 раз более интеггсивно поглощает ультрафиолетовые ггу156345чи, чем исходный амин. Повторные измерения величины оптической плотности при этой длине волны в течение 5 - 6 нин после смешения фермента и субстрата позволяют точно определить скорость реакции. Добавлепиегя неионного детергента ОПмокно значительно просветлить исследуемый материал (на активность моноааиноксидазы детергент не действует).При мер. Свехкеполученную печень крысы для удаления эритроцитов перфузируют охлаяденным 0,9 в/в-ныл раствором хлористого натрия, в течение 3 - 4 лссн гомогенизируют в стеклянном гомогенизаторе с равным по весу объемом 3%-ного водного раствора детергента ОПи добавлением к гомогепату 1% ного водного раствора едкого кали доводят рН до 8,5. Полученную смесь для отделения соединительной ткани фильтруют через двойной слой марли и в количестве 0,05 - 0,1 лл вносят в пробы для спектрофотометрического определения. В пробу, кроме того, вносят 0,1 нл фосфатного буфера (рН =-7,45) и 0,05,ил 3,2 10-в М водного раствора агипро-п-оксибензпламина, доводя затем ее объем до 0,5 ил. Сразу хке по внесении в пробу л 1-нигрои-оксибензила 1 мина измеряют ее оптическую плотность пои 315 дл,;, сравнивая с контрольной пробой, содержащей все указанные компоне;1- ты кроме л-нитро-и-оксибензиламина. Измерения с интервалами в 1 лин повторяют в течение 6 лик после внесения субстрата в пробу. При наличии в исследуемом материале активной моноамипоксидазы величина оптической плотности линейно нарастает во времени. Тангенс угла, образованного осью абсцисс с полученной в опьте прямой, количественно характеризует начальную скорость, катализир емой моноаминоксидазой реакции.Предмет изобретенияСпособ спектрофотометрического определения активости моноаминоксидазы путем гомогепизации исследуемого материала детергентом, отфильтровывания соединительной ткани, внесешья в пробы раствора субстрата и измерения оптической плотности, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью сокрашения времени и обеспечения точности определения, в качестве субстрата берут д-нитро-и-оксибензилааин,Составитель В. Л. Таратута Редактор Б. Л. Шнейдерман Техред Т, П. Курнлко Корректор Л. Я. Баранова Годп. к пеи. 12,11 - 63 г. Формат бум. 70;-1081;6 Объем 0,18 изд. л.Зак. 881/12 Ти 1 за)к 82 о Цена 4 коп.с 1 р 111 ИГ 1, 1 осударственного комитета по делам изобретении открытий СССРМосква, Центр, пр. Серова, д. 4.1 ииографии, пр. Сапунова, 2.