Способ получения культурального антигена из тriснinеllа spiralis

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИК с)9)ЯО с 39/О 04 А ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ ЛЬСТВУ д ВТОРСНОМУ СВИ)осте цкии Бе)А. С. 11 ид гос тка триНильнюс, 1975.5-71,и е).е. с е(54) СПОСОБ АНТ 11 ГБНА ИЗ (57) Изс бре 1 Н 1 У 1 ЕНИЯ КУгП)ТУРАЛЬНОГОГНТСН 111 Е 1.1.А БРТВА 1,18ение относится к биотехдстцости к производствучя серологической диагицеллезалндей и сельпрепарат ос тик трих Изобретение относится к, областин частности к произиотехцо;ог,одсту препдр; дид гс)от ик с ельс кхозя йсгон для серологичестрихицеллезд у людей к венных живо а куь) урдц пон ного антигенд и 1 ичос ти.1. Беспородных - О г заражают т 1 ихигслл н ловЧерез 45-60 и т, костно-мышеч дют и растворе ч скд (пс шецие ег спец,е рбелых ьнпечмышей мд ньн с:) и;ми м 1 не ей ук) ичицк ц гт,х убд ткань пс рс т е))с ) дри цск.ин 1 ),; ь избретения - унеггчение в скохозяйственцых животных. Целью изобретения является увеличение выхода культуральцого антигеца и повышение его специфичности. Длг этого проводят пРедварительную очисткугг- нок трихинелл от балластных белков с ыделением жизнеспособной Фракции личинок центрифугирванием в 30- 60-цом градиенте плотности глицерина. Лнтиген получают при культивировании мышечных личицок трихицепл вс) течение 48-60 ч при 37 С в растворе Хенкса с антибиотиками и добавлением 0,020-0,030 Ед/г)г инсулина . Использование предложенного способа поноляет повысить выход триюнеллез- с ного культурального ацтигеца ца единицу биомассы трихицелл и увеличить специфичность сероцогической диагностики трихицеллезд . 2 табл . С: медцицский 3,0 г, концентрированная соляная кислота 1,0 мм, дистиллированндя вода до 100,0 мл) при 37 С в течение 20-24 ч. Изолированные личинки трихинелл 5 раз отмывают физиологическим раствором и наслаивают н объеме 5,0 мл в количестве 3,5- 4,0 10 личинок на градиент плотности глицерина (по 10 мл 60, 50, 40 и 307-ного глицерина) . Центрифугирование проводят при 1500-2000 об/мин н течение 1 О мин. Фракции, расположенные на границе 40-502 и 50-607. глицерина, содерждгие только жизнеспособные личинки, собирают, три рд -149 неллеза. Концентрация белкана общее колисество трцхицелл,МК 1 /МЛ Дозаинсулина(О, 001 Та сли ца 2 ВсегоВсего полож.иселедоЛнтиген СреднеТитр антител Геоетр1/20 1/40 1/80 1/ 160 титр/о 8 еи выше в,но 12 25,0 а 6,2 55+05 ЭВ 33 28 1979,0 т 67 68,7167 58,0171 39 Ы 7 38 790+67 48 Коммернескиц Культурапьный 48 1 Э 1 О 6 427,0 й 64 20 От.58 12,5+4,8 8,0+3,9 сО 001 0001 000 с 000, 7,6,4 360134с 0,001 1,ЫО 4с 000 а с 3 мь в:кт от глицерина раствором ескса с антибиотикам.В растворе Хецкса с добавлением канамицина в дозе 100,0 мкг/мл и ли - ворица в дозе 100 мкг/мл добавляют стерильно раствор инсулина до конечной концентрации 0,020-0,030 Ед/мл. В приготовлеццую среду стерильно вносят жизнеспособные личинки трихинелл до конечной концентрации 3.0- 3,5 10 З личинок/мц среды. Культивирование проводят при 37 С в течениео48-60 ч при периодическом вст 1,яхивании. Среду освобождают от личнок трихинелл центрифугированием при 3000-3500 об/мин в течение 10 мин или Фильтрованием. В с уперцатанте или фильтрате среды определяют содержание белка по методу Лоури разводят раствором Хенкса до концентрации белка 1000200 мкг/мл и используют для иммобилизации ца фармолинизированных и тацизироцанных эритроцитах барана по общепринятой методике.П р и м е р 2. Жизнеспособные фракции личицок трихинелл культивирунт в безбелковой питательной среде по примеру 1, но изменяют количество инсулина.В табл. 1 показана зависимость накопления культуральцого антигеца от дозы ицсулица,П р и м е р 3. Специфичность культуральцого ацтигеца определяют в реакции цепрямой гемагглютинации 3260путем сопсставс цця даццых РНГЛ с культуральцым и коммерческим антигенами, полученных при исследовании сывсроток крови больцьсх ра зтичными паразитарными болезнями (описторхоз аскаридоз, дифиллоботриоз, анкилосто.мидозы, тениаринхоэ, знтеробиоз,лямблисз). Результаты этих исследований представлены в табл.2. Таким образом, использование предложенцого способа позволяет повысить выход трихинеллезного культуральногсантигеца в 20-80 раз на единицу биомассы трихинелл (25-45 мкг на 10личинок) и увеличить специфичностьсерологической диагностики трихи 20 Формула изобретения Способ получения культуральногоантигеца из Тг 1 сЬюе 11 а врдга 1.з,включающий выделение мышечных личинок, их очистку и культивированиев безбелковой питательной среде спослсдующм отделением целевого продукта, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода антиена и его специфичности, очистку личинок проводят дифференциальнымцентрифугированием в 30-607-ном градиенте плотности глицерина, а в питательную среду дополнительно вносят 5 инсулин в дозе 0,02-0,03 Ед/мл.Таблица 1