Способ количественного определения ретикулоцитов в крови

,14395 5) 1 М 33/48 3ой параэитолины Клиническиения. М,: 198 СУДАРСТНЕНКЫИ КОМИТЕТ СССРО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛ(21) 4117998/28-1422) 06.06.86 46) 23.11.88. Бюл. У (71) Институт медицин гии и тропической мед им. Е.И.Марциновского (72) А.М.Аплахвердиев (53) 616,07 (088.8) (56) Любина А,Я. и дрлабораторные исследов с. 155-156. 54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕТИКУЛОЦИТОВ В КРОВИ(57) Изобретение относится к медицине, касается гематологии. Цель изобретения - ускорение и упрощение способа. Стимуляцию ретикулоцитоэа проводят лабораторным животным путемежедневного отбора крови из хвостовойвены 50-60 капель) 5-6 дн или введением 60 мг/кг фенилгидразина внутрибркппинно (дважды через 48 ч), Нарастание числа ретиколоцитов в периферической крови обнаруживают через 5-6 дн. Для определения содержания ретикулоцитов пробу крови из хвостовой вены помещают в пробирку с Физиологическим раствором и гепарином и добавляют 2-3 капли насыщенного; р-ра бриллиантового крезилового синего 1,2 г на 100 мл абсолютного спирта) . После 10-15-минутного прокраанвання пробу отмывают от краски в 5- кратном объеме физраствора прн 3508 Эритроциты оседают без разрушения, Отбирают надосадок и 3-4 раза повто ряют процедуру до прозрачного цвета надосадка., определяют содержание ретикулоцитов, для чегос эритромассу центрифугируют 1 О мин щ при 15008. В результате происходит разделение по плавучей плотности эритроцитов и ретикулоцитов. Ретикулоциты определяют количественно в процентах по соотношению высоты зоны ретикулоцитов (синий цвет) в обйей высоте, занимаемой клетками (желтовато-эеленоватые и синий) в капилля- ффффф реМ1439500 Формула изобретеиия Составитель А.АгуреевТехред А.Кравчук Корректор Э,Лончакова Редактор В,Данко Заказ 607144 Тираж 847 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 45 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ". Проектная, 4 Изобретение относится к медицинеа именно к гематологии.Цель изобретения - ускорениеи упрощение способа.П р и м е р 1. Крыс линии Чзагусыпляют под эфирным наркозом, Кожутщательно обрабатывают дезинфицирующим раствором (спирт 70). Стимуляцию ретикулоцитоза проводят путемежедневного отбора крови из хвостовой вены 50-60 капель в течение 56 дн, либо введением 60 мгкг фенилгидразина виутрибрюшинно дважды через 48 ч). В обоих случаях нараста; нне числа ретикулоцитов в перифери"ческой крови обнаруживают через 5-6 дн, Для определения содержания ретикулоцитов берут 7-8 капель кровииз хвостовой вены в пробирку, содержащую физраствор и 2 мг гепарина. Затем туда же добавляют 2-3 капли насы щенного раствора бриллиантового крезилового синего (1,2 г на 100 мп аб-солютного спирта). Количество добавляемой краски достаточно для прокрашивания. При большем количестве затрудняется отмывание пробы от краски,Тщательно перемешивают, закрываютпрсбкой и оставляют на 10-15 мин для , прскрашивания нри комнатной темпера, туре. После этого проба отмываетсяот краски в 5-кратном объеме физраствора в течение 5 мин при 350 я. При такой скорости все эритроциты оседают и практически отсутствует раэруше 35 ние эритроцита. Отбирают недостаточную жидкость и повторяют процедуры 3 или 4 раза до прозрачного цвета недостаточной жидкости. При возможности полностью отбирают надосадочную жидкость и определяют содержание ретикулоцитов. С этой целью эритромассу набирают в капилляр (примерно 90% длины капилляра) диаметром 10 мм и длиной 75 мм, Чем вьпче длина капилляра и уже диаметр, тем выраженней столбики элементов крови - эритроцитови ретикулоцитов.Со стороны заполнения капиллярзакупоривают и помещают в диск гематокритной центрифуги. Вращение происходит в горизонтальной плоскости втечение 10 мин при 1500 я. При такомвремени и скорости происходит разделение по плавучей плотности эритроцитови ретикулоцитов,Определение ретикулоцитов. Послецентрифугирования определяют ретикупопиты количественно в процентах посоотношению высоты зоны ретикулоцитов (синий цвет) в общей высоте, занимаемой клетками (желтовато-зеленоватые и синий), в капилляре,Если высота зоны ретикулоцитов(синий цвет) 4 мм, то высота общейзоны, занимаемой эритроцитами и ретикулоцитами (желтовато-зеленоватыеи синий), 20 мм.В таком случае количество ретикулоцитов составляет 20%,Способ количественного определения ретикулоцитов в крови путем окрашивания пробы бриллиантовым крезиловым синим, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, окрашенные пробы промывают физиологическим раствором, центрйфугируют 5 мин при 350 е, затем переносят в капилляр диаметром 1 мм, центрифугкруют 10 мин при 1500 я, измеряют общую высоту столбика жидкости окрашенной в желто-зеленый и синий цвета, и столбика, окрашенного в синий цвет, и по их соотношению определяют количество ретикулоцитов в крови.