Способ определения эритропоэтина у животных-парабионтов

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик(6) Дополнительное к авт, свид-ву(22) Заявлено 04. 08. 80 (21) 2968616/30-15с присоединением заявки МВ -(23) Приоритет -Опубликовано 300882. Бюллетень М 32Дата опубликования описания 300882 Р 1) М. Кл.з А 61 В 10/00 Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытий(71) Заявитель 4) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭРИТРОПОЭТИНА У ЖИВОТНЫХ-ПАРАБИОНТОВИзобретение относится к биологий, в частности к экспериментальной физиЬлогии, и может быть, преимущественно, втспользовано при изучении механизмов специфической гуморальной регуляции эритропоэза на животных-парабионтах.Известен способ определения эритропоэтина, заключающийся в установлении изменений количества эрнтроцитов и концентрации гемоглобина в крови интактного парабионта после эритропоэзстимулирующего воздействия на партнера-парабионта Ц .Данный способ определения эритро-. поэтина имеет недостаток, выражающийся в том, что в эксперименте исполь зуются животные с нестабилизированным эритропоэзом, а это приводит к тому, что интактные парабионты реагируют на большую группу неспецифических факторов - вазоактивные вещества, параметаболипт, гормоны я др. Все это маскирует действие эритропоэтина и. затрудняет оценку эффективности эри- . тропоэзстимулирующего воздействия на партнера-парабионта.Наиболее близким к предлаГаемому является способ определения эритропоэтина иа животных-парабионтах, включакхдий этиропоэзстимулирующее воздействиена одно из животных-.парабионтов н последующее определение изменения числа ретикулоцнтов вкрови интактного парабионта 2 .НедостатКом известного способанаряду с реакцией интактного парабионта на большую группу неспецифических факторов является низкаяЪ 1 О чувствительность к эритропоэтину,позволяющая давать лишь качественную оценку величины образования эрнтропоэтина.Цель изобретения - повышение точности способа путем исключения действия неспецифических факторов прнэритропоэзстимулирующем воздействии.Дпя достижения укаэанной цели доэритропоэзстимулирующего воздействияна парабионта-партнера интактногопарабионта подвергают двухкратной синтервалом в одни сутки трансфузии80-ной взвесью гомологичных эритроцитов с разовой дозой из расчета3 мл на 100 г веса животного, а эритропоэзстимулирующее воздействие напартнера производят через сутки после последней трансфузии.П р и м е р . Опыты проведены на17 парах крыс линии Вистар. ПарабионЗО .ты были подобраны по полу и возрасту.Наложение кожно-мышечного анастомоза выполнено под эфирным наркозом. По боковой поверхности туловища слева у правого и справа у левого парабионтов) ироизведен кожный разрез с иссечением участка кожи с подкож ной клетчаткой в виде удлиненного овала (2 х 10 см), обнаженные собственные фасции с мышечно-апоневротическими образованиями сшиты по длиннику раны. Следующий ряд швов наложен по 10 краю кожной раны. Введено 500 тыс.ед. пенициллини. Через 8 дней после операции проведено определение эффективности кожно-мышечного анастомоза с помощью вещества индикатора, в качестве которого вводили полиглюкин, Об эффективности кожно-мышечного анастомоза, судили по развитию у интактного парабионта отека акральных органов.Среди подготовленных таким образом крыс-парабионтов были выделены группы 1 и П (соответственно 9 и 7 .пар парабионтов), одна пара парабионтов вследствие нагноения кожно-мышечного анастомоза исключена из опыта. Для 1-.ой группы использован известный способ, для П-ой - предлагаемый.Согласно предлагаемому способу сначала одному из парабионтов каждой пары крыс П-ой группы внутривенно ввели 80-ную взвесь гомологичных эритроцитов в физиологическом растворе в количестве 3 мл взвеси на 100 г веса животного. Через 24 ч после этого произвели повторную трансфузию в количестве 3 мп взвеси на 100 г веса животного. Используемая доза эритроцИтарной взвеси (3 мп/100 г) и временной интервал между ее введени ем 24 ч) установлены в контрольных опытах и вызывают увеличение количества эритроцитов в периферической крови - полицитемию на 75, а также прекращение образования почечного эритропоэтина, что обеспечивает исключение воздействия неспецифических факторов на образование эритропоэтина.По прошествии 48 ч экспериментально установленного временного ин; тервала, в течение которого имеющийся . в крови парабионта эритропоэтин пблностью метаболизируется, а количество ретикулоцитов в крови уменьшается до 0,31-0,1) парабионты-партнеРы П-ой группы были подвергнуты эри тропоэзстимулирующему воздействию - анемизированы (кровойускание 15 от Объема циркулирующий крови с одновременным введением гомологичной 60 плазмы в объеме, равном количеству ;взятой крови). Количество крови, взятое при кровопускании, как показали контрольные опыты, является ми- нимильнОЙ пОрОгОвой величиной Вызы вающей регистрируемое увеличение образования эритропоэтина.Аналогичному воздействию - анемизации были подвергнуты и парабионтыпартнеры 1-ой контрольной группы.После эритропоэзстимулирующего воздействия - анемизации парабионтов-партнеров 1 и П группы у интактных парабионтов 1-ой группы и парабионтов с эритроцитарной полицитемией П-ой группы определяли количество ретикулоцитов, сопоставляя их изменение с данными, полученными у этих же животных за 10 мин до анемизации их партнеров-парабионтов.В . группе 1 проведенная анемизация парабионтов-партнеров не вызвала увеличения количества ретикулоцитов в крови интактного парабионта, что ,ложно расценивается как отсутствие йзменения количества эритропоэтина.В группе П проведенная анемизация парабионтов-партнеров вызвала в крови полицитемического парабионта.увеличение Р(0,6001) количества ретикулоцитов.Сопоставляя данные изменения числа ретикулоцитов у полицитемических парабионтов с показателями доз-реактивной кривой стандартного эритропозтина, определяют количество эритро.поэтина, поступившего в организм полицитемического парабионта от партнера-парабионта, у которого образование эритропоэтина было индуцировано кровопотерей - анемизацией.По сравнению с известным предлагаемый способ отличается высокой чувствительностью к эритропоэтину, позволяет определять эритропоэтин в малых количествах и исключает возможность действия неспецифических факторов, возникающих при эритропоэзстимулирующих воздействиях.Формула изобретения1, Способ определения эритропоэтина у животных-парабионтов, включающий эритропоэзстимулирующее воздействие на одного из животных-парабионтов и определение эритропоэтина по количеству ретикулоцитов в крови интактного парабионта до и после воздействия на партнера-парабионта, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности путем исключения действия неспецифических факторов при эритропоэзстимулирующем воздействии, до эритропоэзстимулирую- щего воздействия на парабионта-партнера интактного парабионта подвергают двухкратной с интервалом в одни сутки трансфузии гомологичных зритроцитов, а эритропоэзстимулирующее воздействие на парабионта-партнера проводятчерез сутки после последней трансфузии.2, Способ по п.1, о т л и ч а - ю щ и й с я тем, что, трансфузиюЗаказ 6327/5 Тираж 714 . . ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5 Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул,Проектная,4 проводят 80-ной взвесью гомологичных эритроцитов с разовой дозой3 мп взвеси на 100 г массы животного,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Арх.катал., 1947, 3,48.2. В 1 оой., 1950, 5,372.