Способ выявления эндотелиоцитов в стенке кровеносных сосудов

СВОЗ СОВЕТСНИХС ОЦИАЛИСТИЧЕСНРЕСПУБЛИН9) ) 5 ИЗОБРЕТ АН ЕТЕЛЬСТВ АВТОРСКОМ.М.Е титу цирку- межных ЭНДОТЕЛИОСОСУДОВ вором азотГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(56) Чернокульский С.Т. Микрляторное руслопериметрия ис ним участков брюшины человКанд. дис, Киев: 1974, с. 41(54) (57) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯЦИТОВ.В СТЕНКЕ КРОВЕНОСНЫХпутем перФузии сосуда раст но-кислого серебра, последующего пригото гических препаратов, щ и й с я тем, что, менной окраски ядер ниц клеток эндотелия зией азотно-кислого дистое русло вводят с гепарином, а затем многократно инъециру раствором гематоксил мой покраски сосудов их промывку водопров смеси с глицерином в 10 мин. ематоксилина и ления гистоло- отличаюцелью одновреконтуров граперед перфуеребра в сосуаствор Рингера стенку сосуда т ." 50-603-ным на и после видио суще ствляют дной водой в течение 5180739 ираж 896 Подписное Изобретение относится к экспериментальной медицине, точнее к гис-,тологическим способам окраски ткани.Целью изобретения является одновременная окраска ядер и контуров 5границ клеток эндотелия.Способ выявления эндотелиоцитовв стенке кровеносных сосудов осуществляют следующим образом.Согласно известному способу,Овключающему введение в сосудистоерусло раствора азотно-кислого серебра, окраску ядер гистологическимикрасителями и приготовление просветленных препаратов, перед введением 15в сосудистое русло раствора азотнокислого серебра осуществляют перфузию сосудистого русла раствором Рингера с гепарином, производят последовательную инъекцию сосудистого 20русла 50-60 -ным раствором гематоксилина и промывку сосудов водопроводной водой с глицерином в течение5-10 мин.Указанная концентрация раствора 25гематоксилина для инъекции кровеносного русла позволяет эффективно окрасить ядра эндотелиоцитов. Растворгематоксилина свыше 60% использоватьне следует, так как при этом ядра 30перекрашиваются и появляется дополнительный этап обработки кровеносногорусла слабым раствором соляной кислоты для дифференцировки ядер, Есликонцентрация раствора гематоксилинаменее 50 , то ядра эндотелиоцитовслабо окрашиваются и препараты получаются некачественными. После инъекции сосудистого русла раствором гема.токсилина необходима промывка водопроводной водой, имеющей слабо щелочную реакцию. В течение указанноговремени при перфузии сосудистое русло отмывается от избытка ядерногокрасителя, а слабо щелочная реакцияводопроводной воды способствует тому,что ядра, окрашенные гематоксилином,приобретают синий цвет, Если промывка водопроводной водой длится менее5 мин, то качество препаратов значительно снижается. Если промывать сосудистое русло более 10 мин, наблюдается гидротация тканей, что такжеотрицательно сказывается на качествепрепаратов. 55ВНИИПИ Заказ 5912/40 .Т П р и м е р. Кровеносное руслоосвобождают от форменных элементовкрови путем перфузии раствором Рингера с добавлением гепарина по общепринятой методике, Затем инъецируютсосудистое русло 55%-ным растворомгематоксилина до тех пор, пока сосуды, видимые невооруженным глазом,не приобретут красный цвет. Затемрусло промывают водопроводной водойс глицерином в течение 7 мин. Послеэтого кровеносное русло инъецируют0,15 -ным раствором азотно-кислогосеребра. Инъекцию раствором азотнокислого серебра проводят до тех пор,пока сосуды не приобретут белыйцвет. После этого. инъекцию прекращают. Извлекают орган, необходимыйдля исследования. Приготовление просветленных препаратов производятпо общепринятой схеме. При последующем микроскопическом изучении полученных препаратов определяются коричневые (темно-коричневые в артериолярных звеньях гемомикроциркуляторногорусла и светло-коричневые в венулярных микрососудах) контуры границэндотелиоцитов, а их ядра окрашиваются в темно-лиловый цвет,По сравнению с известным способом предлагаемый менее трудоемкий и менее длительный, так как позволяет исключить этап гистологической окраски полученных просветленных препаратов, который длится 2-3 ч. Предлагаемый способ позволяет одновременно выявить ядра и контуры границ эндотелиоцитов, в то время как окружающие ткани остаются неокрашенными, что значительно улучшает качество полученных препаратов и повышает их информативность. Предлагаемый способ отличается надежностью, хорошим качеством получаемых препаратов и высокой информативностью, он позволяет на одном срезе одновременно определить контуры границ эндотелиоцитов и характер расположения их ядер, что имеет большое значение для изучения звеньев специфичности и органоспецифичности эндотелиоцитов гемомикроциркуляторного русла различных органов.