Устройство для электрофореза микроколичеств белков

,801029064 А 3(50 С 01 И 27/26 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(54) (57) УСТРОЙСТВО ДЛЯ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА МИКРОКОЛИЧЕСТВ БЕЛКОВ, содержащее кювету для разделяющего геля,соединенную с анодным и катодным,буферными сосудами, о т л и ч а ющ е е с я тем, что, с целью повышения точности анализа и упрощенияподготовительных операций, устройство дополнительно снабжено коническимкапилляром для концентрирующего геляс возможностью его установки сверхукюветы, соосно с ней и с контактомего узкого конца с разделяющим гелемкюветы. юл. 9 26Б,Ф.Санталовонструкторскоео приборостроениябиологической.8)Диск-электрофорез.1, с.51,Микрохимическийкани. М., Меди 184-229. анал цина ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ1029064 Тираж 471 Подписное ВНИИПИ Заказ 4967 41 Филиал ППП Патент , г. Ужгород,ул.Проектная,Изобретение относится к биохимии,а именно к устройствам электрофорезабиологических макромолекул на клеточном уровне и может быть использовано в генетике, эмбриологии, энэимологии, клинической диагностике,Известно устройство для электрофореза белков, содержащее кювету,заполненную разделяющим Гелем, поверх которого расположен слой концентрирующего геля, анодный и катодный сосуды для буфЕрных растворов 1,13,Однако проба белков, подлежащйхразделению, вводится в"карман" дляпроб, проделанный в слое коицентри.рующего геля. Так как площадь основания фкармана:относительновелика и она определяет ширину зонразделяемых белков; то при анализЕмикроколичеств белков становитсяневозможным их денситометрирование. 2Наиболее близким к изобретениюпо техническому решению являетсяустройство для электрофореза микро-.количеств белков, содержащее кювету(микрокапилляр) для разделяющегогеля, соединенную с анодным и катод"ным буферными сосудами. Проба белковнаслаивается над концентрирующимгелем, введенным в микрокапилляр надразделяющим гелем, но всему сечениюкапилляра ) 2).Недостатком устройства являетсяего низкая разрешающая способность,вследствие применения одного и тогоже микрокапилляра для концентрирования и разделения белков. В микрокапиллярах, где отношение площадиповерхности стенок к ограниченномуими объему геля велико, большое отрицательное влияние на качество разделения оказывают пристеночные эф ОФекты, приводящие к неоднородностиструктуры геля по сечению капилляра.В результате чего белковые зоны после раэгонки получаются размытыми,их детектирование затруднено, 45Кроме того, применение тонких капилляров крайне усложняет операциюих заполнения гелями и введение пробы. Выполнение этих операций проводится е помощью микроманипулято Ов под микроскопом. Попытка умень;ения пробы (менее 1 мкл) с целью,уменыаения ее длины в капилляре, ведет к еще болыаему усложнению подготовительных операций. 55Цель изобретения - повышение точности анализа микроколичеств белкови упрощение подготовительных операций.Цель достигается тем, что в устрой.стве для электрофореза микроколичеств белков, содержащем кювету дляразделяацего геля, соединенную с анодным и катодным буферными сосудами,устройство дополнительно снабженоконическим капилляром для концентрирующего геля с возможностью его установления сверху кюветы, соосно сней и с контактом его узкого конца сразделяющим гелем кюветы.На чертеже схематически изобра"жено предлагаемое устройство, общий вид.Устройство состоит из коническогокапилляра 1, для концентрирующегогеля 2, кюветы 3 с разделяющим гелем4. Поверх разделяющего геля в нейможет находится одновременно и концентрирующий гель,Устройство состоит также из анодного 5 и катодного б буферных сосудов,Устройство работает следующим образом.Конический капилляр 1 с концентрирующим гелем 2 устанавливается вотверстии дна анодного буферного сосуда 5 так, чтобы его верхняя частьсосуда б находилась под слоем буФерного раствора. Нижняя коническаячасть капилляра 1 вводится в катодный буферный сосуд б и так же покрывается раствором при заполнениисосуда 6. Проба белка наслаиваетсяповерх геля (зачерненная полоска).Подавая напряжение на электродыбуферных сосудов, проводят электроФоретическое концентрирование пробыбелков в концентрирующем геле 2. Приэтом в узкой части капилляра компактный по вертикали пакет белков подвергается сжатию по диаметру. Затемустанавливают конический капиллярповерх кюветы 3 с разделяющим гелем4 и проводят электрофоретическое разделение белков. При этом кювета может быть произвольной формы и размера и в ней может находится одновременно с разделяющим и концентрирующий гель, с которым в этом случаеконтактирует кончик капилляра 1. Поскольку разделение белков производят в толще геля, отсутствуют пристеночные эффекты, т.е, обеспечивается однородность геля по сечениюкюветы.С помощью предложенного устройства повышается точность определения и его чувствительность, Так вконтрольном опыте по разделениюбелков бычьего альбумина, взятогов концентрации 0025 мкГ/мкл иобъеме пробы 1 мкл получено пятьзон. Наименьшая из них содержалаоколо 310 о г белка,В предложенном устройстве можноработать с кюветами диаметром (толщиной) геля 1-2 и более мм, что зна-чительно повышает производительностьтруда и делает ненужным применениемикроманипуляторов,