Способ получения гипотриглицеридально-активных полисахаридов

(5 ИЕ ИЗОБРЕТЕНИ А ПАТЕ ОСУДАР СТВ Е ННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР 1(71) Кабусики Кайся Эдванс Каихацу Кенкюдзе ( Р)(57) Изобретение относится к способу получения физиологически активных полисахаИзобретение относится к способам получения гипоглицеридально-активных полисахаридов, т.е. полисахаридов, снижающих содержание триглицерида в крови млекопитающих.Веществгут быть приских препаргиперлипиделее типичнынего и пожи а подобного типа действия моменены в качестве терапевтичеатов против атеросклероза или мии, которые являются. наибоми заболеваниями людей сред- лого возраста. Известен способ получения физиологически активного полисахарида путем культивирования штаммов-продуцентов из рода Рзецбовопаз на соответствующей питательной среде и выделения из ферментациридов, которые могут найти применение в медицине. Целью изобретения является повышение активности целевого продукта. Способ заключается в том, что на бульоне Рогозы в аэробных условиях культивируют штамм Ятгерососсцз наесцпэ ГЕЙМ ВРили Ятгертососсцз 1 аесаз ГЕЙМ ВР, или Ятгертососсцз зачцпэ ГЕЙМ ВР, или Ятгертососсцз зачаз ГЕЙМ ВР, или Ятгертососсцз оцгапз ГЕЙМ В Р-ЗОО, или Ятгертососсцз втз ГЕЙМ ВР, или ЯЭЕртОССОССцЗ ЕццПцв ГЕЙМ ВР, ОтдЕ- ляют биомассу от культуральной жидкости с последующим выделением целевого прсдукт. Получаемые полисахариды обладают способностью снижать уровень триглицерида в крови от 45 до 50 . 11 табл 4 ил. онного бульона посредством фракционирования биополимеров (1), ОдНедостатком способа является недоста Я точно высокая физиологическая активность СО полисахарида. "а.Целью изобретения является повыше- (Я ние активности целевого продукта.На фиг.1-4 приведены хроматограммы, поясняющие предлагаемый способ.Сущность способа получения гипотриглицеридально-активных полисахаридов состоит в том, что на питательной среде бульоне Рогозы - в аэробных условиях выращивают штаммы-продуценты Зтгертососсцз наесцпэ ГЕЙМ ВРили Зтгертососсцз 1 аесаз ГЕЙМ ВР, или Зтгертососсцз зачца ВР, или Зтгертососсцз зачаз1732815 1 11 И ею зпюцрс 5 анцн, ни РцгХйЮ РАЙ эвюцу 03 анцРигЯСоставитель О. Скородумова едактор С. Пекарь Техред М.Моргентал Корректор Т, Пал каз 1592 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ ССС113035. Москва, Ж, Раушская наб 4/5изводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 105 10 15 20 25 30 35 40 50 55 ГЕЙМ ВР, или Зсгер 1 ососсцз бцгапз ГЕВМ ВР-ЗОО, или Ятгерососсцз в 1 с 3 ГЕЯМ ВР, или Ятгерйососсцз ецц 1 пцз ГЕРМ ВР - 302 до максимального наполнения целевого продукта, отделяют биомассу от культуральной жидкости и осуществляют выделение целевого продукта иэ культу- ральной жидкости или из биомассы после ее депротеинизации и дезынтеграции.Наиболее общие примеры таких микроорганизмов сданы на хранение в Исследовательский институт ферментации (ИИФ, т,е, Международный центр хранения в соответствии с Будапештским соглашением) в Японии, а шифры хранения перечислены в табл.1.Микробиологические характеристики микроорганизмов, используемых в предла: гаемом способе, являются такими же, что и микробиологические характеристики известных микроорганизмов, принадлежащих тому же классу, т.е, общие микробиологические характеристики, методы культивирование и другие свойства соответствуют характеристикам, описанным в Руководстве Бергея по определительной бактериологии, 8-е изд.Наиболее общие микробиологические свойства указанных штаммов приведены в табл. 2 и 11.Указанные микроорганизмы можно . культивировать известным методом. Например, бактериальные клетки могут быть получены при помощи стационарного культивирования в среде бульона Рогоза при аэробных условиях, затем бактериальные клетки отделяются при помощи центрифугирования культуры.Состав среды бульона Рогоза следующий, г: триптиказа 10; экстракт дрожжей 5;триптоза 3; КгНРОа 3; КНгР 043; триаммоний цитрат 2; твин1; глюкоза 20; хлоргидрат цистеина 0,2, кроме того, раствор соли (1 МЯЮ 4 7 НгО 11,5; Ге 304 7 НгО 0,68; МпЯ 04 2 Нг 0 2,4; дистиллированная вода 100 мл) 1-5 мл и дистиллированная вода - до объема 1 л, (рН 7, стерилизация нагреванием до температу. ры 121 С, которая поддерживается в течение 15 мин).Получение полисахарида ПССТ.Выращивание микроорганизмов, Каждый из указанных микробных штаммов, засевают на среду бульона Рогоза и инкубируют без перемешивания при 37 С в течение 5-10 ч при азробных условиях, в результате чего получают культуральный бульон с некоторой концентрацией живых бактериальных клеток,Культуральный бульон непрерывно подвергают центрифугированию со скоростью12000 об/мин, а собранные бактериальныеклетки затем промывают в соляном растворе(0,85 йаС 1) 2 или 3 раза,Разрушение бактериальных клеток.Промытые клетки суспендируют в физиологический соляной раствор и обрабатываюттермическим способом при 115 ОС в течение10 мин с целью их разрушения.Бактериальные клетки, промытые и суспендированные в физиологический солянойраствор, разрушают при помощи обработкиультразвуком (15 кГц, 60 мин) французскимпрессом или.другими известными способами.Удаление жира из клеток. Суспензиюразрушенных клеток смешивают со смесьюхлороформ-метанол (2:1 об/об). Компоненты, экстрагируемые органическим растворителем, затем полностью удаляются,припомощи центрифугирования со скоростью300 об/мин в течение 10 мин, а слой хлоро- .форма сливают.Обработка протеолитическими ферментами, Обезжиренные пробы обрабатываютпротеолитическими ферментами, такимикак пронаэа, трипсин ипепсин при помощиизвестных процедур, Из этих протеолитических ферментов проназа является наиболеепредпочтительной для этой цели. Условияобработки этим ферментом являются известными.Очистка, В верхний слой после центрифугирования протеолитической реакционной смеси добавляют такие осаждающиеагенты, как трихлоруксусная кислота илисульфат аммония с тем, чтобы протеиноваяфракция выпала в осадок и ее можно былоудалить. Фракцию верхнего слоя затем обрабатывают соответствующей нуклеазойили протеолитическими ферментами с тем,чтобы удалить составляющие нуклеиновыхкислот, таких как ДНК и РНК или протеиныфракции. После такой ферментной обработки несколько раз осуществляют диализ.Частично очищенную фракцию затемснова подвергают другим процедурам очистки, таким как гелевая фильтрация и очистка с использованием хроматографическойколонны. Чистая препарация полисахарида,обозначаемого как полисахарид ПССТ, получается в конце последней стадии.В общем случае этот полисахарид ПССТможет быть получен в соответствии с егофизико. химическими характеристикамипри помощи многочисленных процедуризоляции и очистки, которые уже давно широко используются в это области техники,таких как осаждение-растворение и экстра5 10 15 20 235 - 241 С, ее измеряют при помощи уста 30 новки для измерения температуры точки плавления (модель Яанако МР - 3, фирма 35 50 кция, экстрагирование растворителем, диализ, применение хроматографической колонны, электрофорез, гелевая фильтрацияили любая комбинация этих процедур. Таким образом, изобретение никоим образомне ограничивается какой-либо конкретнойиз упомянутых процедур.Т.е. препарация изобретения относитсяк способам получения активных продуктов,снижающих содержащие триглицеридов вкрови, которые состоят из полисахарида, иих получают из микроорганизмов, принадлежащих семейству Ятгертососсцэ, так какфармакологическая активность .была обнаружена во фракции полисахарида,Отметим, что активность по снижениюсодержания триглицерида в верхнем слоекультурального бульона составляет примерно 1/5 от активности в бактериальной клетке.Физико-химические и физиологическиехарактеристики полисахарида ПССТ состо;ят в следующем,Химическая природа и свойства растворимости. Тонко измельченная проба, 2полученная после обессоливания и сушкивымораживанием, является негигроскопичным белым порошком, обладающим высокой растворимостью (-100 мг/мл) в воде, ноона только частично раствоояется в этаноле,метаноле и ацетоне и совсем не растворяется в простом эфире и хлороформе.Молекулярный вес, Молекулярный весполисахарида ПССТ оценивается в примерно 14000 й 3000 и устанавливается припомощи гелевой фильтрации с использованием нескольких правовращающих материалов различного молекулярного веса вкачестве индексов, и колонны ТойопеарлНИ//55 (фирма Тойосоде Ко., Лтд), уравно. вешенной при помощи 25 мМ трис-НС буфера, содержащего О,ЗМ МэС (рН 7,5),Удельный показатель вращения,Удельный показатель вращения упомянутого полисахарида ПССТ в 1,8%-ном 4Щрастворе, ао, равен + 190,.1. (правоевращение), Этот показатель определяетсяпри помощи поляриметра (модель ДИП,фирма Джапан Спектроскопик, Ко, Лтд.),Сахарный состав. 4 мг пробы обрабатывают 0,2 М раствором ТФК трифторуксусной кислоты) при 100 С в течение 7 ч, атриметилсилилирование осуществляют следующим образом: пробу смешивают с 0,2 млгексэметилдисилазана (20% в пиридине) и 50,02 мл триметилхлорсилана, смесь перемешивают в течение 15 мин и после отстаивания в течение 5 мин подвергают газовойхроматографии.с целью определения содержания глюкозы, рамнозы и т,д. Температура колонны разделения составляет 179 С. Содержание уроновой кислоты определяют с использованием метода карбазол-Н 2304 (модифицированный метод Биттера-Муира),Состав сахаров полисахарида ПССТ следующий, %.: глюкоза 70,3; рамноза 13,7; уроновая кислота 16,0,Кислотно-основные характеристики. рН 0,1 и 0,5%-ного раствора полисахарида ПССТ составил 6,71.Спектр инфракрасного поглощения. Инфракрасный спектр поглощения полисахарида ПССТ, полученный с.использованием инфракрасного спектрометра (модуль 1 А 31 О А 302, Джапан Спектроскопик Ко, Лтд), приведен на фиг.1,где по осям абсцисс и ординат отложены длина волны и пропускание соответственно,Элементарный анализ. Элементарный анализ при помощи элементарного анализатора (модель 240 В, Перкин-Элмер) дал следующий результат: С 37,2%, Н 6,4% и О 56,4%, для полисахарида ПССТ, Упрощенная формула имеет следующий вид С 31 Н 64 Н 35,Температура точки плавления. Точка плавления полисахарида ПССТ составила Яэнагимото Сейсакушо, Япония).Физиологические характеристики, Полисэхарид ПССТ является активным при применении с целью снижения содержания триглицерида в крови млекопитэющего при стоматическом применении, Эта активность является стабильной в области температур от -80 С до 115 С и при рН в области от 4,1 до 11, если даже полисахарид перед применением хранился.Фармакологическое действие палисахарида ПССТ,Фармакологические эффекты. Предлагаемый антиэтеросклеротический препарат,содержащий предлагаемый полисахарид ПССТ, является в высшей степени эффективным при снижении содержания триглицерида в крови млекопитающих. В соответствии с этим предлагаемый препарат используется в качестве терапевтического или профилактического препарата при заболеваниях, связанных с атеросклерозом, гиперлипидемией,. гиперлипопротеиномией, ксантоматозом, холецистолитизом, гипертонией,диабетом и другими заболеваниями.Предлагаемая композиция может быть применена к млекопитающим стоматическим, внутрибрюшинным внутривенным или любым другим способам. Количествопрепарата в одной дозе должно составлятьот примерно 1 мг до 0,5 г/кг веса тела, При- стоматическом применении в предпочтительном варианте это количество в однойдозе составляет от примерно 0,01 мг до 5100 мг/кг веса тела. Для применения лекарственного препарата может быть выбраналюбая его форма, его можно применять ввиде раствора в физиологическом соляномрастворе или в других носителях, в виде 10иньекций, изготовленных при помощи лиофилизации и т,д., в виде суппозиториев, таблеток с покрытием, гранул, таблеток, капсули т.д. с соответствующими носителями иразбавителями. 15Острая токсичность, Указанная величина для предлагаемого полисахарида ПССТсоставляет более 1200 мг/кг веса тела при. внутрибрюшинном применении мышам,Предлагаемый материал является по существу нетоксичным при стоматическом применении.П р и м е р 1, Получение и очистка пол-.исахарида ПССТ. Яггертососсцэ наесощФЕРМ БП - 296 прививают в 2 л среды 25бульона Рогоза с конечной концентрацией клеток 1 х 10 бактерий/мл. Среду после прививки культивируют в течение 10 чпри 37 ОС без перемешивания в аэробныхусловиях с тем, чтобы в результате получить 30культууальный бульон с концентрацией клеток 10, бактерий/мл, Бактериальные клеткисобирают при помощи непрерывного центрифугирования со скоростью 12000 об/мин,промывают физиологическим соляным раствором (0,85 йаС 1) и суспендируют в такойраствор с тем, чтобы получить 100 мл суспензии клеток с концентрацией 2 х 10 бактерий/мл,Упомянутую суспензию бактериальных 40клеток обрабатывают при 115 С в течение10 мин и обрабатывают 3 раза смесью хлороформ-метанол (2:1 в/в) с целью удаленияжиров.Обезжиренную суспензию бактерий 45подвергают центрифугированию со скоростью 3000 об/мин в течение 10 мин, а нижний слой, т.е, слой хлороформа, удаляют.Водный слой используют в качестве исходного материала на следующих стадиях очистки;Исходный материал затем обрабатывают 20 мг проназы (сигма протеаза типа ХО)в 100 мл фосфатного буфера (рН 7,8), содержащего 0,0015 мг СаС 2, при 47 С втечение 5524 ч, а затем обрабатывают при помощи10 мг проназы при тех же условиях.Материал, обработанный проназой,разделяют на осажденную фракцию и фракцию верхнего слоя после отстаивания при помощи центрифугирования со скоростью 3000 об/мин в течение 10 мин,Во фракцию верхнего слоя добавляют 1/9 объема 100-ного (в/о) раствора трихлоруксусной кислоты (ТХК), выдерживают при 4 С в течение 3 ч при перемешивании, а затем полученный материал подвергают центрифугированию при скорости 3000 об/мин в течение 10 мин, в результате чего получают осадок и верхний слой, В осажденную фракцию добавляют такой же объем 10 о -ного раствора ТХК и повторяют описанную процедуру, Полученный верхний слой промывают 3 раза этиловым простым эфиром с целью удаления ТХК, растворяют в 50 мл дистиллированной воды, нейтрализуют 1 н, раствором ИаОН, диализируют с целью полного удаления ТХК и, наконец, подвергают его лиофилиэации с тем, чтобы получить 258 мг (сухой вес) фракции верхнего слоя,Полученную фракцию верхнего слоя обрабатывают проназой, .подвергают диалиэу, в результате чего получаю т 176 мг (сухой вес) диализированной фракции (МВ 3500), Диализированную фракцию в дальнейшем будем называть очищенной фракцией 1.Очищенную фракцию 1 подвергают фракционированию при помощи хроматографической колонны Сефадекс-Г(фирма Фармациа), урвновешенной буфером 0,05 М трис-НС 1. Полученная в результате хроматограмма очищенной фракции 1 при скорости элюирования 1 мл/мин, приведена на фиг,2, где по абсциссе откладывают объем элюирования, а по оси ординат - концентрацию злюированного материала. ,Фракцию после 124 мл собирают и в дальнейшем будем ее называть очищенной фракцией 11(сухой вес 93,6 мг).На фиг.З - приведена хроматограмма очищенной фракции 1, которая была получена при помощи колонны Тойопеарал НЮ - 55 Г, уравновешенной 25 мМ буфера трисНС 1, содержащего 0,3 М ИаС 1.Скорость элюирования составила 1 мл/мин, На фиг.З кривые 1 - 3 представляют собой профили элюирования сахара, протеина и нуклеиновой кислоты соответственно.Очищенный полисахарид ПССТ(87,9 мг сухой вес) выделяют при помощи отбора порции, элюированной в области фракций 80100 мл.На фиг.4 приведена хроматограмма полисахарида ПССТ при тех же эспериментальных условиях, которые были использованы для фиг,З.В табл,З приведен количественный выход протеина, который определялся ме510 15 20 25 30 35 40 45 тодом Лоури. РНК, который определялсяметодом орсинола, ДНК, который определялся методом дифениламина, и сахара, который определялся методом фенола-Н 2804в каждом способе получения.Удельная активность, приведенная втабл.3, указывает на относительную активность по снижению содержаний триглицерида каждой фракции при испытании накрысах на единицу веса, причем активностьтермически обработанных бактериальныхклеток равна 1. Методы анализа по определению активности снижения содержаниятриглицерида у животных описаны в примере 2.Установлено, что полисахарид ПССТможет быть выделен и очищен из другихбактериальных штаммов, перечисленных втабл.1, по аналогии с настоящим примером,но с меньшим выходом,П р и м е р 2. Фармакологический эффект полисахарида ПССТ.Активность по снижению содержаниятриглицерида.1. Пробы физиологического раствора,содержащие эквивалент 16 мг/кг веса телалиофилиэованного полисахарида ПССТ,получают аналогичным образом. Эти пробыприменяют стоматическим способом в ежедневной дозе 1 мл в крысам (возраст 18недель, самцы, средний вес 246 г, 10 крыс вгруппе) и стерильным мышам (возраст 18недель, самцы, средний вес тела 30 г, 10мышей в группе). Крысы и мыши вскармл и ваются в течение 8 - 12 недель. Затемсобирают артериальную кровь из абдоминальной аорты этих животных, а пробысыворотки отделяют при помощи центрифугирования всей крови. Определяют содержание триглицерид ТГ ВАКО (фирма Вако. Ю нивке Ко, Лтд. Ацетил-ацетоновый метод).Полученные рузультаты собраны втабл,4 (степень снижения по сравнению созначениями в контрольных группах, к которым описанная обработка не применялась),Состав диеты, которая применяласьна период вскармливания, приведен втабл,5.2. Упомянутые пробы применяют орально стоматическим способом в ежедневнойдозе 1 мл к обычным крысам (возраст 18недель, самцы, средний вес животного 238г, 15 крыс в группе) и к обычным стерилизованным мышам (возраст 18 недель, самцы,средний вес животного 31 г, 10 мышей вгруппе) в течение 4 недель. Содержаниетриглицерида в крови определяют в точности так же, как это было описано. Полученные результаты собраны в табл,б (степеньснижения по сравнению со значениями,полученными для необработанной контрольной группы).3. Физиологические соляные пробы, содержащие 4 мг/мл полисахарида ПССТ, применяют стоматическим способом в ежедневной дозе 1 мл на крысу в течение 2 недель к крысам, больным гиперлипидемией (возраст 18 недель, самцы, средний вес животного 250 г, 5 крыс в группе). которых вскармливают кормом, богатым холестерином. Содержание триглицерида в крови определяется в соответствии с приведенным описанием, Результаты собраны в табл,7.Реакция на различные дозы. Физиологические соляные пробы, содержащие от 0,1 до 20 мг/мл полисахарида ПССТ, применяют стоматическим способом в ежедневной дозе 1 мл на обычную крысу (возраст 6 недель, самцы, средний вес животного 216 г, 5 крыс в группе) в течение 4 недель. Содержание триглицерида в крови определяют указанными методами(в качестве контрольной группы использовалась группа необработанных крыс). Полученные результаты собраны в табл.8,Острая токсичность. Физиологические соляные пробы (0,5 мл/мышь), содержащие 1,10 и 100 мг полисахарида ПССТ, применяют внутрибрюшинным способом к мышам 1 С (возраст 6 недель, средний вес 31,6+0,6 г, 10 животных в группе). Танатобиологические наблюдения за мышами осуществляют в течение 14 дней. Контрольным материалом был физиологический соляной раствор.Величина05 а, рассчитанная в соответствии с методом Беренса-Кербера, составила более 1200 мг/кг веса животного. При стоматическом применении предлагаемый материал является по существу нетоксичным,Фармацевтические композиции, 1. 25 мг очищенного полисахарида ПССТ тщательно перемешивают с 275 мг порошка очищенного крахмала, а затем иэ полученной смеси изготавливают таблетки для стоматического применения. Каждая полученная. таким образом таблетка соответствует дозе в 10 термически обработаннцх клеток/кг веса тела для взрослого пациента, имеющего вес в 50 кг.2. Полисахарид ПССТ тщательно перемешиваат с раэбавителями, такими как карбонат кальция, лактоза и т.д., смазывающими материалами, такими как стеариновая кислота, тальк и т,д, и другими добавками, а затем из полученной смеси получают таблетки для стоматического применения. Ежедневная доза полисахаридаПССТ в общем случае составляет от 01, до100 мг/кг веса тела,3. Полисахарид ПССТ (900 мг) суспендируют и растворяют в дистиллированной воде (30 мл), добавляют ароматизирующийсироп, а затем приготавливают композициив виде сиропа.П р и м е р 3, Получение и очистка ТР 5 полисахарида,ЗЛаесаз РЕЯМ ВР, З ач 1 цв РЕЯМВР, Я. за 1 чаг 1 цз РЕЯМ ВР - 299,З,богапз РЕЯМ ВР-ЗОО, З.в 111 з РЕЯМ ВР 301, Я.ецц 1 пцз РЕЯМ ВР - 302 инокулируют вбубьон Рогзоза (2 л) при конечной концент рации 1 х 10 бактерий/мл. Засеянную средуинкубируют в течение 10 ч при 37 С безперемешивания при аэробных условиях дополучения 10 бактерий/мл культурального., бульона. Затем бактериальные клетки собирают при помощи непрерывного центрифугирования при 12000 об/мин, промываютфизиологическим раствором (0,850 йаС 1) исуспендируют в том же растворе до получения 100 мл суепензии клеток при концентрации 2 х 10мл.Указанную бактериальную клеточнуюсуспензию подвергают тепловой обработкепри 1150 С в течение 10 мин и трехкратнойобработке смесью хлороформа и метанола(2:1 об/об) в целях удаления жиров.Обезжиренную бактериальную суспензию центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин и нижний слой, т.е. слойхлороформа, отбрасывают. Водный слой используют в качестве исходного материала впоследующей стадии очистки. Затем исходный материал обрабатывают 20 мг проназы(сигма проказа типа Хч) в 100 мл фосфатного буфера (рН 7,8), содержащего 0,0015 мгСаС 12, в течение 24 ч при 47 С, а затем притех же условиях обрабатывают 10 мг проназы,Обработанный проназой материалразделяют на фракции преципитации исупернатанта путем центрифугированияпри 3000 об/мин в течение 10 мин. Во фракцию супернатанта добавляют 1/9 объема100 мас. -ной трихлоруксусной кислоты(ТСА), оставляют с перемешиванием на 3 чпри 4 С, а затем центрифугируют при300 об/мин в течение 10 мин для полученияфракции преципитации и супернатанта.Фракцию преципитации дополняют тем жеобъемом 100 ТСА и повторяют указаннуюпроцедуру, Полученный супернатант 3 разапромывают этиловым эфиром для удаления 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 ТСА, растворяют в 50 мл дистиллированной воды, нейтрализуют 1 н. МаОН, диалиэуют с целью полного удаления ТСА и, наконец, лиофилизуют для получения фракции супернатанта.Полученную фракцию супернатанта обрабатывают проназой описанным способом и диализуют для получения диалиэированной фракции (Мчч3500),Указанную очищенную фракцию фракционируют при помощи хроматографии на колонках с,Сефадексом С - 100, уравновешенным 0,05 М трис-НС 1 буфером.Очищенный ТРЗ полисахарид выделяют путем сбора элюированной части в 80- 100 мл фракций.Выход полисахаридов приведен в табл.9.Физико-химические свойства ТРЗ полисахарида являются такими же, как описанные.П р и м е р 4, Фармакологический эффект ТРЯ полисахарида.Указанные образцы были введены перорально при дневной дозе 10 мг/день/крыса стандартным крысам (самцам в возрасте 18 недель со средним весом 238 г, каждая группа содержала 15 крыс). Кровь животных анализировали на уровень триглицерида.Степень снижения триглицерида приведена в табл.10.Формула изобретения Способ получения гипотриглицеридально-активных полисахаридов предусматривающий выращивание штамма-продуцента на питательной среде, содержащей источники углерода, азота, фосфора, минеральные соли, биостимуляторы роста и воду, в аэробных .условиях до, максимального накопления целевого продукта, отделение биомассы продуцента с образованием потока культуральной жидкости и последующее выделение и очистку целевого продукта с его депротеиниэацией, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения активности целевого продукта, в качестве штамма-продуцента используют штамм Я.1 аесйв РЕЯМ ВРили ЯУаесаз РЕЯМ ВР, или Я.зачцв РЕЯМ ВР, или Я,за 11 чаз РЕЯМ ВР, или Я.бигапз РЕЯМ ВР-ЗОО, или Я.в 111 з РЕЯМ ВР, или З,есцпцз ЕЕЯМ ВР-З 02, в качестве питательной среды - бульон Рогозы, а выделение целевого продукта проводят из культуральной жидкости или из биомассы после ее депротеинизации и дезинтеграции.(сухой Сахар Н с ов 8 23,2 76,3 Следы 1, 1 ф 0,2 и 3,а лисаха леды аб Таблица Подвергнутые теп обработке клетки Всплывающий слой Очищенная фракци Очищенная фракци лок РНК 2000 31,9258 1 Й,1176 2,8 93,6 2,187,9 Следыомпонентов, мас,Ф . 95,6 .97,0100 Удельная активность1732 В 15 Таблица бДиета, обогащенная холестерином (добавление 1 хоуказанную диегу)Диета, обогащенная фруктозой (замена фруктозой всего количествапшеничного крахмала в указанной диете)Таблица 7 лестерина в 5 аблиц Таблица Т а 11732815 17 18 Характеристика Штаммы РЕВИ ВРВРВР ВРВР1 .ВРВРСфероид 0,5-1,0 мк в диаметреФорма клеткиРазмер клетки Соединение Пары или цепи в жидкой среде Подвижность Образование эндоспорКаталаза ОксидазаКраситель по Граму Гемолиз Рост:при 10 С при Й 5 С при 50 С Оптимальная температурадля роста, Со 37 Теплоустойчивость при 60 С в течение 30 мин Рост в культурной средепри рХ 9,6 Способность восстанавле ния метиленового голубого Потребность в СОВРазжижение желатина Рост в культурной среде,содержащей:МаС 1 (6,5 Х)(40) т 11+тА Продуктивность аммиака Гидролиз гиппуровойкислоты Рост в культуральнойсреде, содержащейтеллуритТТС О/О/К/ Фекалии человека Источник 2,3,5-Трифенилтетразолхлорид,ф Не производилось. ГлюкозаЭскулин1 н улинЛактозаГлицеринАрабинозаИелецитозаСорбитАнтигенная группа Т а бл и ц а 1т ттц 11