Штамм бактерий propionibacterium shermanii продуцент витамина b12

Штамм бактерий Propionibacterium shermanil В-4891 - продуцент витамина В₁₂.

Изобретение относится к медицинской промышленности, а именно к производству витамина В₁₂.
Цель изобретения - повышение способности продуцента к накоплению витамина В12.
Штамм 1-63 получен путем ступенчатой селекции из штамма М-82 с использованием химических мутагенов, депонирован в коллекции культур ВНИИГенетика под N В-4891 и характеризуется следующими признаками.
Морфологические признаки.
Бактерии представляют собой мелкие палочки размером 0,5-0,6 х 1,5-2,0 мкм, расположенные парами или короткими цепочками, неподвижные, грамположительные, неспорообразующие.
Культуральные признаки.
На твердой питательной среде с кукурузным экстрактом колонии розового цвета круглые, маслянистые, пастообразные с ровным краем диаметром 3-5 мм. На синтетической среде с агар-агаром колонии желтовато-розовые круглые, маслянистые, пастообразные с ровным краем, диаметром 1-3 мм.
На жидкой синтетической среде рост по всему столбику жидкости.
На твердой среде с дрожжевым экстрактом колонии желтовато-розовые круглые, маслянистые, пастообразные с ровным краем, диаметром 2-4 мм.
На жидкой среде с дрожжевым экстрактом рост по всему столбику жидкости.
На жидкой среде с кукурузным экстрактом рост по всему столбику жидкости.
Оптимальная температура роста (29 1)^оС, бактерии растут после 20-30-минутного прогревания при 62,8^оС. Растут при концентрации хлористого натрия 5,0-7,5% в дрожжесолевом бульоне. При росте в дрожжелактозной среде легко взмучиваются. Растут в присутствии 10% глюкозы в среде. Оптимальный рН роста 6,8-7,2, минимальный 5,0, максимальный 8,0. По отношению к кислороду штамм 1-63 является факультативным анаэробом.
Физиолого-биохимические признаки.
Утилизирует очень хорошо декстрин, лактозу, глицерин, глюкозу; хорошо - ксилозу, фруктозу; слабо - арабинозу, дульцит, мальтозу, маннит, рамнозу, сорбит, крахмал. Источниками азота для штамма 1-63 могут служить сернокислый аммоний, кукурузный экстракт, дрожжевой экстракт, аминокислоты.
Штамм 1-63 желатину не разжижает, начало пептонизации молока на 7-е сутки, полная пептонизация на 10-е сутки, наблюдается коагуляция молока.
Восстанавливает нитраты, образует каталазу. Индол не образует. Воду из цистеина не образует. Обладает редуцирующей способностью.
П р и м е р. Культурой штамма 1-63 засевают посевную среду следующего состава, %: глюкоза 2,0; кукурузный экстракт 2,0; сернокислый аммоний 0,2; мел 2,0; хлористый кобальт 0,0005, остальное - вода. Выращивают при (29 1)^оС в стационарных условиях без подачи воздуха в течение 72 ч. Полученным посевным материалом в количестве 10% засевают ферментационную среду следующего состава, %: глюкоза 3,0; лактоза 1,0; кукурузный экстракт 7,0; сернокислый аммоний 0,2; хлористый кобальт 0,001, остальное - вода. Ферментацию проводят в стационарных условиях без подачи воздуха в течение 113-120 ч, поддерживая рН в пределах 6,8-7,2 подачей раствора едкого натра или аммиака.
Через 72 ч ферментации вносят предшественник витамина В₁₂ - 5,6-диметилбензимидазол - в количестве 20-34 мг/л.
Содержание витамина В₁₂ к концу процесса составляет 37,5-39,5 мкг/мл при определении физико-химическим методом с предварительным цианированием гидролизата бактерий, в то время как штамм-прототип способен образовывать 34,5-35,0 мкг/мл витамина В₁₂ на среде с 9-11% кукурузного экстракта на 168 ч ферментации.
Таким образом, штамм бактерий 1-63 Propionibacterium shermanii - продуцент витамина В₁₂ выгодно отличается от прототипа повышенной способностью к образованию витамина В₁₂ при пониженной потребности в кукурузном экстракте и за более короткий промежуток времени.
Сущность изобретения: штамм Proplonibacterium shermanii получен путем селекции от исходного штамма М-82 и депонирован в ВКПМ под номером В-4891. Штамм обладает повышенной витаминообразующей способностью, коротким циклом развития и пониженной потребностью в кукурузном экстракте. При выращивании на типичных посевной и ферментационной средах образует 37,5 - 39,5 мкг/мл витамина B₁₂ на 120 ч ферментации.