Способ получения клеточной культуры
Формула | Описание | Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Номер патента: 1692145
Авторы: Абрамочкин, Андреева, Кулаев, Миронова, Северин, Червонская
Формула
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КЛЕТОЧНОЙ КУЛЬТУРЫ путем культивирования клеток почечной ткани на стекле в питательной среде, дезагрегации клеток с последующим снятием их со стекла с помощью протеолитического фермента, отличающийся тем, что, с целью ускорения способа при получении первичных перевиваемых культур, дезагрегацию клеток и снятие их со стекла осуществляют с помощью фермента, выделенного из Xanthomonas campestris ВКПМ В-4102, взятых в концентрации 0,008-0,11%
Описание
Целью изобретения является ускорение способа при получении первичных и перевиваемых культур.
Пример получения первичной клеточной культуры из ткани почек зеленых мартышек.
В стерильных условиях извлекают почку, после снятия капсулы делают продольный разрез и извлекают из почки мозговое вещество с сосудами и мочеточником. Оставшееся корковое вещество нарезают до величины кусочков 2 мм, переносят в колбу и промывают 0,01 М натрий фосфатным буфером рН 8,0. Процесс проводят при комнатной температуре. Перемешивают на магнитной мешалке 7 мин в 0,01 М натрий фосфатном буфере рН 8,0. Затем эту порцию выбрасывают вместе с отделившимися клетками, а в колбу добавляют препарат протеолитического фермента из Xanthomonas campestris ВКПМ В-4102 до конечной концентрации 0,01% Отделившиеся клетки собирают через каждые 5 мин, чередуя обработку коркового вещества раствором фермента с раствором натрий фосфатного буфера. Жидкость с отделившимися клетками собирают в центрифужные стаканы емкостью 50 мл, содержащими 20 мл среды, состоящей из 5% гидролизата лактальбумина и 10% сыворотки крупного рогатого скота. Диспергирование продолжают до момента, пока не прекратится отделение клеток, отделившиеся клетки центрифугируют при 700 тыс. оборотах/мин в течение 10 мин. После центрифугирования надосадочную жидкость сливают, а осадок ресуспендируют, фильтруют, подсчитывают число клеток и разводят так, чтобы в 1 мл содержалось 500 тыс. клеток посевная концентрация для одной пробирки.
Клетки, получаемые из ткани почек зеленых мартышек, культивируют без смены среды. Через 6-7 дней после формирования плотного монослоя на 1,5-литровых матрасах при эксплуатации в них 30-106 клеток, культуру используют для заражения вирусами. Морфологическое состояние культуры контролируют с помощью светового микроскопа. Видимых морфологических изменений клеток не обнаружено.
Предлагаемый способ позволяет сократить время, необходимое для получения первичных культур на стадии дезагрегации, в 3 раза, перевиваемых клеток культур со стекла в 3-10 раз по сравнению с известным способом.
Изобретение относится к микробиологии, касается приготовления первичных и перевиваемых клеточных культур, необходимых в производстве вирусных вакцин, а также проведения диагностических и научных исследований в медицине. С целью ускорения способа при получении первичных перевиваемых культур культивируют клетки почечной ткани в питательной среде, проводят дезагрегацию клеток и снятие со стекла осуществляют при помощи протеолитического фермента Xanthomonas campestris ВКПМ В 4102 в конечной концентрации 0,01%
Заявка
3099119/14, 04.10.1984
Институт биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л. А. Тарасевича
Червонская Г. П, Миронова Л. Л, Андреева З. М, Северин А. И, Абрамочкин Г. В, Кулаев И. С
МПК / Метки
МПК: C12N 5/00
Опубликовано: 10.12.1995
Код ссылки
<a href="https://patents.su/0-1692145-sposob-polucheniya-kletochnojj-kultury.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ получения клеточной культуры</a>
Способ деконтаминации перевиваемых культур клеток животных от микоплазм
Номер патента: 1655982
Опубликовано: 15.06.1991
Авторы: Гальнбек, Дьяконов, Куликова, Лобунцова
МПК: C12N 5/00
Метки: деконтаминации, животных, клеток, культур, микоплазм, перевиваемых
...ОТ М 11 КО1655982 формула из обретения Составитель А, МаныкинТехред Л,Сердюкова Редактор Т. Лазоренко Корректор С. Иекмар Заказ 3523 тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/ВПроизводственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул, Гагарина,101 нейшем культивировании на протяжении 2 мес (20 пассажей) без препаратов клетки свободны от микоплазм (срок наблюдения).5П р и м е р 2, Перевиваемую линию клеток ПТв концентрации 80 тыс,/мп высевают в 250 мл матрасики, Клетки культивируют на среде 199 и ГЛА (0,5 -ный раствор .гидролизата лактальбумина) в равных соотношениях с 10 . сыворотки крупного рогатого скота. Б ростовую среду добавляют...
Способ выявления клеток панкреатических островков на гистологическом препарате
Номер патента: 993096
Опубликовано: 30.01.1983
МПК: A61B 10/00, G01N 33/48
Метки: выявления, гистологическом, клеток, островков, панкреатических, препарате
...микроскопическом излучении гистологического препарата опухоли, окрашенного предлагаемым красителем, установлено, что цитоплазма опухоле-,45 вых клеток содержит альдегид-Фуксинофильные гранулы Фиолетового цвета.Заключение: опухоль является В-клеточной.П р и м е р 2. При патологоанатомическом вскрытии трупа больной, страдавшей язвенной болезнью желудка, берут кусочек опухоли поджелудочной железы для гистологического исследования. Из материала, залитого в параФин, готовят среды, которые наклеивают на предметные стекла белком с глицерином. Срезы депарафинируют и окисляют их в течение 20 с в смеси из 3 мл насыщенного водного раствора марганцовокислого калия, 3 мл 3-ной 60 серной кислоты и 44 мл дистиллированной воды. Затем срезы...
Способ выделения снlоrеllа sp. к из смешанной культуры микроводорослей
Номер патента: 1682386
Опубликовано: 07.10.1991
Авторы: Левинских, Мелешко, Ушакова
МПК: C12N 1/12
Метки: выделения, культуры, микроводорослей, смешанной, снlоrеllа
...14 л/ч см придиаметре пузырьков воздуха 3 - 4 мм. Объем полученного концентрата составляет 90 - 110 мл при плотности 2,5 г/л.Результаты экспериментов представлены в табл.2.П р и м е р 7, Выделение СЫогеИа Яр.К из сообщества СЬоге 1 э Яр, К и СЫащубоаопаз гепЬагбИ.Экспериментальные данные показывают, что при используемых параметрах флотации хламидомонады не происходит,Суспензию, содержащую СЫогеИа Яр,К и СЫааубощопэз, заливают во флотатор, затем аэрируют суспензию воздухом с размером пузырьков 3 - 4 мм со скоростью в пределах 5 - 14 л/ч см .2Результаты представлены в табл,3.Результаты экспериментов показывают, что происходит увеличение соотношения количества хлореллы и хламидоманады с 0,8 в исходной суспензии до 10-13 в концентрате, В...
1-фенил-3-окси-4-этоксикарбонил-5-п-бромфенил-2, 5 дигидропиррол-2-он, проявляющий противовирусную активность
Номер патента: 1573813
Опубликовано: 27.05.1996
Авторы: Андрейчиков, Бореко, Владыко, Вотяков, Гейн, Згировская, Зубович, Коробченко, Мишаева, Тарасенко, Шумиловских
МПК: A61K 31/40, C07D 207/38
Метки: 1-фенил-3-окси-4-этоксикарбонил-5-п-бромфенил-2, активность, дигидропиррол-2-он, противовирусную, проявляющий
1-Фенил-3-окси-4- этоксикарбонил-5-п-бромфенил -2,5-дигидропиррол-2-он формулыпроявляющий противовирусную активность.
Способ размножения ягодных растений в культуре ткани
Номер патента: 1722317
Опубликовано: 30.03.1992
Авторы: Гаврикова, Голик, Каменская, Малыхин, Третьяков
МПК: A01H 4/00
Метки: культуре, размножения, растений, ткани, ягодных
...достигается тем, что регенерация побегов из апексов и размно-, жение микропобегов ягодных растений, находящихся на питательной среде, содержащей цитокинины, проводится в электростатическом поле напряженностью 5 - 10 кВ(м в стерильных условиях бесконтактным способом. Под действием электростатического поля увеличиваются аксиальные градиенты побегов. что приводит к улучшению их функционального состояния, и следовательно, к интенсификации роста и развития.П р и м е р 1. Апексы смородины, взятые с одревесневших побегов в зимне-осенний период, сортов Минай Шмырев, Сеянец Голубки помещают на среду в пробирки на среду Мурасиге-Скуга с добавками по 0,5 мг/л тиамина, пиридоксина, никотиновой кислоты,1,0 мг/л аскорбиновой кислоты, 100 мг/л...
Предыдущий патент: Смазочное покрытие для холодной деформации металлов
Следующий патент: Датчик для определения концентрации паров бензина
Случайный патент: Способ работы четырехтактного форкамерного двигателя внутреннего сгорания