Способ выявления токсинов clostridium perfringens

Способ выявления токсинов Clostridium perfringens, включающий интраперитонеальное заражение чувствительных животных исследуемой культурой с последующим взятием биологического материала и определением в нем токсинов в реакции нейтрализации, отличающийся тем, что, с целью упрощения и повышения точности, в качестве биологического материала используют перитонеальную жидкость животных, павших после заражения.

Изобретение относится к микробиологии, в частности к выявлению и типированию бактериальных токсинов.
Целью изобретения является упрощение и повышение точности способа.
П р и м е р 1. На среде Китта-Тароцци в течение 10 16 ч при 37 - 38^oС выращивают исследуемую культуру Cl.perfringens. Готовят смыв культуры Cl.perfringens с концентрацией микробных тел, равной 60 100 международных единиц мутности. Для накопления токсина исследуемой культурой Cl.perfringens заражают морских свинок массой 350 400 г. Культуру вводят внутрибрюшинно в объеме 15 20 мл. Животные погибают в течение 1 3 ч.
У павших животных внутрибрюшинную жидкость собирают в стерильную посуду, после чего проводят центрифугирование при 1200 1500 g в течение 5 10 мин. Надосадочную жидкость отсасывают и определяют наличие токсина и его тип в реакции нейтрализации на белых мышах с антитоксическими сыворотками Cl.perfringens типов А, С, Д, Е. Результаты определения типа токсина представлены в табл.1.
П р и м е р 2. Кроликам массой 500 1000 г внутрибрюшинно вводят исследуемую культуру Cl.perfringens объемом 20 40 мл, которая соответствует плотности 60 100 международных единиц мутности оптического стандарта. Животные погибают в течение 1,5 2,0 ч. При исследовании менее патогенных штаммов эти сроки могут увеличиваться. У павших кроликов отбирают перитонеальную жидкость, имеющую красноватый оттенок.
В центрифугате жидкости, полученной из брюшной полости, определяют наличие токсина и его тип в реакции нейтрализации на белых мышах. Результаты определения типа токсина, содержащегося в перитонеальной жидкости кроликов, представлены в табл.1.
П р и м е р 3. Ягнятам массой 5 10 кг внутрибрюшинно вводят 70 80 мл суспензии Cl.perfringens, соответствующей оптической плотности 60 100 международных единиц мутности. Животные погибают через 5 6 ч. Объем жидкости в брюшной полости равен или превышает количество введенной культуры, она имеет красноватый оттенок.
В центрифугате жидкости, полученной из брюшной полости, определяют наличие токсина и его тип в реакции нейтрализации на белых мышах. Результаты представлены в табл.1.
П р и м е р 4. Для определения токсичности исследуемую культуру Cl.perfringens выращивают на среде Китта-Тароцци в течение 10 12 ч. Полученные культуры центрифугируют при 1200 1500 g в течение 5 10 мин, надосадочную жидкость вводят внутрибрюшинно белым мышам массой 16 18 г в разных объемах (0,5; 0,25; 0,12; 0,06; 0,03; 0,015 мл).
Одновременно проводят исследование токсина содержимого брюшной полости морских свинок, инфицированных интраперитонеально культурами испытуемых бактерий. Для получения исследуемого материала морским свинкам массой 350 - 400 г внутрибрюшинно вводят 15 20 мл культуры, выращенной на среде Китта-Тароцци. Инфицированные животные гибнут в течение 1,5 2,5 ч после заражения. При вскрытии в органах и тканях обнаруживали изменения, свойственные для бактерий Cl.perfringens. В брюшной полости обнаруживают 12 - 17 мл жидкости с красноватым оттенком. Жидкость подвергают центрифугированию по указанному выше режиму для культур бактерий и вводят мышам в тех же дозах.
Результаты определения типа токсина и сравнения токсичности культур Cl. perfringens, выращенных на среде Китта-Тароцци и содержимого брюшной полости животных после интраперитонеального заражения, представлены в табл.2 и 3.
Таким образом, внутрибрюшинное заражение морских свинок культурой Cl. perfringens приводит к быстрому и значительному повышению уровня токсина в экссудате брюшной полости этих животных. Полученное после быстрой гибели этих животных содержимое брюшной полости следует использовать для идентификации типа бактерий Cl.perffingens. Этот способ целесообразно применять в тех случаях, когда на искусственной питательной среде Китта-Тароцци образуется низкий уровень токсина, что не позволяет выявить и определить его тип. ТТТ1 ТТТ2
Изобретение относится к микробиологии, в частности к выявлению и типированию бактериальных токсинов. Целью изобретения является упрощение и повышение точности способа. Исследуемой культурой Cl.perfringens внутрибрюшнно заражают лабораторных животных, в результате чего в течение 1 - 10 ч в перитонеальной жидкости накапливаются токсины. Они обнаруживаются на белых мышах. Это позволяет идентифицировать бактерии из рода Clostridium по типу продуцируемых токсинов и установить лабораторный диагноз при анализе патологического материала. 3 табл.