Способ определения кофеина в лекарственных смесях

ОП ИСАКИЙ Союз СоветскикСоциалистическиеРеспублик в 9 К АВТОРСКО ВИДЕ ТЕЛЬСТВУ.присоединением заявки М Геаударстеенный камнтет СССР ло делам нзобретеннй н открытнй.21.0718.8) Опубликовано 07,02.82 Бюллетень МДата опубликования описания 10.02. 72) Авторы изобретен и Л.В. Саливанова леп(71) Заявитель Ир кий государственный медицинский инстит(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОФЕИНА В ЛЕКАРСТВЕНО 1 ЕСЯХ зах фармацевтически ре атов онтрольно-аналитичиях.Наиболее близким их лаборато к из етению хническои сущно и достигаемому результату являетс ния кофеина в лека спос твен определех смесях е емои проеле, отде и фотоанализиг, поме 50 мл го способа яв тивность, цтоСпособ не для определенных смесях,лоог статком извест ая сел ляется его осл ограничивает применен может быть использова ния кофеина в лекарст охлаждения раств хлороформом, пер Первую порцию фи из следующей пор делительную ворс р доводямеаивают о метки фильтрую асывают, еносят в ают 2 ра ва, напримеа гидрохлоие активног ьтрата отб ии 2 мл пе ку и промы Изобретение относится к определению кофеина и лекарственных смесяхи может быть использовано при анали путем растворения анализиру бы в органическом растворит ления сопутствующих веществ метрирования. Точную навеск руемого образца, равную 0,1 щают в мерную колбу емкость и обрабатывают 20-25 мл теп роформа для извлечения дейс веществ из таблеточной масс,за 1 н раствором серной кислоты пор,циями по 5 мл, взГалтывая каждый рав течение 2 мин. Хлороформный раствпереносят в мерную колбу емкостью50 мл, сернокислое извлечение пронывают хлороформом дважды по 5 мл, прсоединяя его к основному раствору вмерной колбе. Хлороформ отгоняют,остаток растворяют в 0,01 н растворгидроокиси аммония. Оптическую плотность раствора определяют при 240 и273 нм при использовании в качествераствора сравнения 0,01 н растворагидроокиси аммония. Содержание кофеина определяют по известной формуле Е 12 . содержащих такие вещес как промедол, папавери рид, фенацетин вследст3 90поглощения этих веществ в области поглощения кофеина и невозможности отделения указанных компонентов от кофеина методом экстракции из-эа растворимости промедола и солей папаве"рина в хлороформе, а также содержанияфенацетина, являющегося макрокомпонентом (в лекарственных смеСях соот"ношение кофеина и фенацетина обычноравно 1;10), в анализируемой фракциидаже с учетом его ограниченной растворимости в хлороформе.Известный способ неприемлем дляопределения кофеин-бензоата натриявследствие его нерастворимости в хлороформе, хотя кофеин-бенэоат натриязначительно чаще кофеина входит в состав различных фармакологических сочетаний.Цель изобретения - повышение селективности способа.Поставленная цель достигается тем,что согласно способу определениякофеина в лекарственных смесях путем растворения анализируемой пробыв органическом растворителе, отделения сопутствующих веществ и фотометрирования, пробу растворяют в 5060/-ном этаноле, сопутствующие вещества отделяют хроматографией в тонком незакрепленном слое кисдой окиси алюминия в системе хлороформэФир, взятых в соотношении 25-35::50-65, полученную зону коФеина выявляют в ультрафиолетовом свете и Фотометрируют.Способ осуществляется следующимобразом.Анализируемую пробу растворяютв 50-60-ном этаноле, полученныйраствор хроматографируют в тонком незакрепленном слое кислой окиси алюминия в системе хлороформ-эфир, взятых в соотношении 25-35:50-65.Зону кофеина выявляют в Уф-свете,элюируют анализируемое вещество 0,050,1 н раствором соляной кислоты иполученный элюат спектрофотометрируютпри 273 нм.Обработка анализируемой пробы раст.ворителем, отделение сопутствующихвеществ и фотометрирование позволяет перевести в раствор в случае порошка всю анализируемую пробу, а вслучае таблеток - все действующие вещества, включая кофеин-бензоат натрия,Хроматографирование раствора смеси в тонком незакрепленном слое кисА Ч Р У 4О 1 с 1количество кофеина иликофеин-бензоата натрияв анализируемой пробе, г;оптическая плотностьэлеатов анализируемогообразца и стандартногораствора соответственно;количество кофеина или кофеин-бензоата натрияв 1 мл стандартногораствора с учетом исходной концентрации, наносимого на хроматограмму количества раствора и разведения при элюировании, г;объем пробы, наносимойна хроматограмму, мл; объем мерной колбы, используемой для растворения анализируемого образца;объем мерной колбы, используемой при элюировании;вес лекарственной Формы по прописи, г; точная навеска анализируемого образца, г. ления точности предлаа проводят его испытай серии опытов, для кофеин-бензоат .натрия определяют в "искуссттвенных Формах, пригогде 25 ОхиОс 35 4 С 50 Для установгаемого способ 55 ния постановкочего кофеин и количественновенных" лекарс лой окиси алюминия в системе растворителей хлороформ-эфир в соотношении 25-35:50-65 позволяет полностьюи со значительным различием в величинах ВГ отделить кофеин от сопутствующих компонентов.Кофеин-бензоат натрия дает на хроматограмме две эоны, одна из которыхявляется зоной кофеина, а втораязоной бенэоата натрия и находится налинии старта.Хроматографическое разделение веществ, составляющих кофеин-бензоатнатрия, позволяет использовать предлагаемый способ для количественного 15определения в лекарственных смесяхразличного состава не только кофеина,но и кофеина-бензоата,натрия.Количество кофеина вычисляют поформуле:20Охх -товленных по прописи отвешиванием ингредиентов, без вклюцения стадий измельчения и смешивания ингредиентов,во избежание наложения ошибок, несвязанных с точностью анализа, а характеризующих потери на различныхстадиях технологического процесса.Взвешивание ингредиентов проводят на аналитических весах, поэтомунавеска анализируемого образца соответствовала весу порошка по прописи.Экспериментальные данные многократной повторности и результатыстатистической обработки данных, полученных при анализе сложных ("искусственных") смесей при терапевтической дозе 0,1 г, представлены втабл. 1,Как видно из данных статистической обработки, способ не содержитсистематической ошибки, та как истинное содержание кофеина не выходит запределы установленного интервала.Относительная погрешность среднегорезультата с надежностью о = 0,95равняется +3,043.В качестве сбъектов исследованияиспользуют сложные кофеиносодержащиепорошки, приготовленные в аптекахи кофеинсодержащие. лекарственные фор мы заводского изготовления - таблетки при различных терапевтических дозах. Результаты приведены в табл.1-4,Технологический процесс изготовления порошков в условиях аптек вклю 55чает взвешивание ингредиентов на технических весах в расчете на все до"зы, измельцение, смешивание и раэвеску на дозы.На стадиях измельчения и смеши-.вания возможны потери ингредиентов,а также ошибки, обусловленные взвешиванием .на технических весах, поэтому точный вес порошка не соответствует весу порошка по прописи, что45учитывается при расчете результатованализа.Исходя измногостадийности техно- .логического процесса, допускаютсяотклонения в содержании отдельных инЯгредиентов в дозе.Для лекарственных форм аптечногоизготовления в соответствии с инструкцией допустимыми являются +10,+15, +203 при содержании 0,1; 0,05;0,02 г вещества соответственно.55Найденное содержание кофеина икофеин-бензоата натрия (табл. 2 и 3)не выходит за пределы допустимых отклонений. Относительная погрешностьсреднего результата с надежностью0 0,95 равняется - 4,14 (табл. 2).Способ испытывают на заводскихлекарственных формах.Данные количественного анализатаблеток свидетельствуют о возможнос"ти использования предлагаемого способа для анализа таблеток и показывают,что вспомогательные вещества, входящие в состав таблетоцной массы, неоказывают влияния на ход анализа, поэтому способ может быть применен длятаблеток кофальгин (кофеин-бензоатанатрия 0,053, анальгина 0,34), пира"меин (кофеина 0,03 г, амидопирина0,3 г), пираминал (кофеина 0,03 г,Фенобарбитала 0,02 г, амидопирина0,25 г), кофадин (кофеин-бензоата натрия 0,1 г, кодеина 0,0015 г, амидопирина 0,25 г, анальгина 0,25 г), диафеин (кофеин-бензоата натрия 0,05 г,Фенобарбитала 0,02 г, анальгина0,25 г, фенацетина 0,25 г), дикафен(кофеин-бензоата натоия 0.05 г, кодеина 0,015 г, анальгина 0,25 г, фенацетина 0,25 г), так как количественное определение коФеин-бензоатанатрия проводят при испытании способа на порошковых лекарственных смесях подобного или более сложного состава (табл. 1),П р и м е р 1, Один порошок лекарственной смеси (ц - точная навеска 0,38 г), содержащей, г: папаверина гидрохлорида 0,03; фенобарбитала 0,05; кофеин-бенэоата натрия 0,1;бромиэовала 0,2; вес по прописи Рравен 0,38 г) растворяют в мернойколбе емкостью 25 мл в 50-ном этиловом спирте и доводят объем до метки.Параллельно готовят раствор стандарта растворением в мерной колбе емкостью 25 мл 0,1 г кофеин-бенэоатанатрия, соответствующего требованиями содержащего 404 кофеина,На стеклянную пластинку размером20"20 см с помощью прибора наносятслой выпускаемой фирмой "Веапа 1"окиси алюминия 11 степени активностипо Брокману, модифицированной добавлением 24-ной ледяной уксусной кислоты; толщина слоя 1 мм.На линию старта с помощью микропипетки наносят 0,15 мл (Ч) раствораанализируемого образца и растворастандарта кофеин-бенэоата натрия ввиде полос шириной около 4 мм и дли03765 80,635 г) растворяют в мерной колбеемкостью 25 мл в 604-ном этиловомспирте и доводят объем до метки.Параллельно доводят раствор стандарта кофеина в концентрации, соответствующей содержанию кофеина в анализируемом образце.В дальнейшем ведут анализ по методике, описанной в примере 1, но используя в качестве подвижной фазы,взятых в соотношении (30:60), ВГ кофеина в этих условиях 0,35.При этом получают О 0,13 иОр 0,165. Содержание кофеина0,0218 г.П р и м е р 3. Один порошок лекарственной смеси (1 - точная навеска 0,63 г), содержащей г: промедола 0,03", кофеин-бензоата натрия 0,1;анальгина 0,25; амидопирина 0,25;(вес по прописи Р равен 0,63 г) растворяют в мерной колбе емкостью 25 млв 60/-ном этиловом спирте и доводятдо метки.В дальнейшем ведут анализ по методике, описанной в примере 1, но используя окись алюминия и систему растворителей хлороформ-эфир, взятых всоотношении 30:60, КГ кофеина в этихзоПри этом получают б 0,45 иО 0,42,Содержание кофеин-бензоата натриясоставляет 0,1070 г, а содержание кофеина - 0,0428 г.35П р и м е р 4. Одну таблетку(точная навеска 0,6574 г), содержа 7 9 ной около 4 см. (Увеличение объема наносимой пробы до 0,15 мл с использованием в процессе элюирования йриема разведения дает возможность избежать ошибок на первой стадии анализа за счет неточности измерения малых объемов).На хроматограмме оставляют пустую зону тех же размеров, Зоны подсушивают до полного удаления растворителя, затем хроматограмму развивают в системе растворителей хлороформ- эфир, взятых в соотношении 25:65.Обнаружение зоны кофеина проводят в Уф-свете, источником которого служит хроматоскоп с максимумом излучения 254 нм (КГ коФеина 0,33), Обкалывают иглой зону кофеина стандарта, зону кофеина в исследуемом образце и пустую зону таких же размеров, расположенную на уровне кофеина стандарта. С хроматограммы удаляют лишний адсорбент.Зону кофеина анализируемого образца, зону кофеина стандарта и пустую зону помещают в микроколонки и элюируют 0,1 н раствором соляной кислоты в мерные колбы 25 мл (Н) Полученные элюаты центрифугируют при скорости 10000 об/мин в течение 5 мин.На спектрофотометре Сфпри толщине поглощающего слоя 1 см и длине волны 273 нм определяют оптическую плотность элеатов, полученных с зон кофеина в исследуемом образце (О 0,37) и стандарте (О 0,368) при использовании в качестве раствора сравнения элюата пустой зоны.(Спектрофотометрирование элюата исследуемого образца и стандарта при использовании в качестве раствора сравнения элюата пустой зоны дает возможность уцесть помехи, обусловленные наличием в элюате побочных продуктов, зависящих от природы адсорбента).Содержание кофеина и кофеин-бензоата натрия в исследуемом образце определяют по формуле, при этом содержание кофеина равно 0,0402 г, а содержание кофеин-бензоата натрия 0,1005 г.П р и м е р 2. Берут полученную навеску порошка (с 1 0,635 г), приготовленного по прописи, г: кофеина фосфата 0,015; кофеина 0,02; анальгина 0,2; амидопирина 0,2; Фенацетина 0,2;(вес по прописи Р равен щую, г. кофеин-бензоата натрия 0,1; анальгина 0,25; амидопирина 0,25, вспомогательных веществ достаточное количество до получения таблетки средним весом 0,663 г, помещают в мерную колбу 25 мл и обрабатывают 603-ным этиловым спиртом при покачивании до полного распадания таблетки, затем доводят объем до метки.В дальнейшем ведут анализ по ме. тодике, описанной в примере 1, но используя систему растворителей хлороформ-эфир, взятых в соотношении 35:50 (РГ кофеина 0,42), и для элюирования кофеина с адсорбентом - 0,05 н раствор соляной кислоты.При этом получают О 0,395 и О, 0,405.Содержание кофеина равно 0,0394 г, а кофеин-бензоата натрия - 0,0984 г.П р и м е р 5. Один порошок лекарственной смеси (ц 0,565 г), со,42 0,4 0,6 барбитала 0 Кофеин-б ата натр х= 0,0013 х = 0,0030 0,25 мидопирин енацетина держащей, г: кодеина фосфата 0,015; кофеин-бензоата натрия 0,05; анальгина 0,25; фенацетина 0,25; (вес порошка по прописи Р равен 0,565 г) растворяют в мерной колбе емкостью 25 мл в 60-ном этиловом спирте и доводят объем до метки.Параллельно готовят раствор стандарта кофеин-бензоата натрия в концентрации, соответствующей содержанию кофеин-бензоата натрия в анализируемой смеси.В дальнейшем ведут анализ по методике, описанной в примере 1, но наносят на линию старта по 0,3 мл раствора анализируемой смеси и раствора стандарта, систему растворителей хлороформ-эфир, взятых в соотношении 30:60.Получают 00,45 и О 0,5,Содержание кофеина составляет 0,018 г, а содержание кофеин-бензоата натрия - 0,045 г.П р и м е р 6, Одну таблетку (точ ная навеска равна 0,779 г), содержащую, г: кодеина 0,0015; фенобарбитала 0,01; кофеин-бензоата натрия 0,05; анальгина 0,3; амидопирина 0,3, вспомогательных веществ достаточное количество до получения таблетки средним весом 0,773 г помещают в мерную колбу 25 мл и обрабатывают 60-ным этиловым спиртом при покачивании до полного распадания таблетки. В дальнейшем ведут анализ по методике, опи 03765 10санной в примере 1, включая приготовление стандарта, но используя вкачестве системы растворителей смесьхлороформа и эфира в соотношении30:60.Получают 0 0,15 и 0 0,32.Содержание кофеина равно 0,0186 г,а содержание кофеин-бензоата натрия 0,0465 г.в , Предлагаемый способ позволяет проводить количественное определениекофеина и кофеин-бензоата натрия вразличных лекарственных смесях слож ного состава в присутствии бромизовала, фенацетина, фенобарбитала, кодеина, амидопирина, промедола, анальги"на, папаверина гидрохлорида, т.е.веществ, наиболее часто сопутствующих кофеину в лекарственных смесях.Предлагаемый способ по сравнениюс известным обеспечивает высокую селективность определения кофеина в лекарственных смесях различного составаи позволяет определять количественноесодержание пооизводного кофеина " коФеин-бензоата натрия в сложных смесях.Способ прост по выполнению и обладает высокой точностью определениякофеина и кофеин-бензоата натрия вразличных дозах, а также высокойчувствительностью, так как уменьшениедозы кофеина в анализируемом образцесоответственно вызывает уменьшени.оптической плотности элюата.Таблица 1,39 0 идопирина Анальги 0952 О 0,42 ПромедолКофеинензоататрия 5 0,0 25 0,10 9 0,39 0,0 Рм идопиринальгина мидопириннальгинаромедола офеинензоат атрия Амидопири Фенацетин Промедола Кофеинбензоатанатрия0,3 Амидопирина Фенобэрбитала0,03 0,0042 0,1 0,25 Амидопиринафенацетина М,10 0,25 0,5917 0,35 о)35 0,0405 0,1014 0,1 0,25 0,25 0,015 0,6135 0,40 0,41 Оу 0411 0,1027 О,0,25 АнальгинаАмидопиринаКодеина фосфата 0,015 0,3620 0,42 0,40 0,0384 0,0960 0,1 0,25 АмидопиринаПромедола 0,03 0,6229 0,42 0,45 0,0433 .0,1083 0,1 0,25 0,250,025Оэ 5343 0142 Оэ 42 Оф 0392 Оэ 0982 Кофеинбензоатанатрия Кофеинбензоатанатрия Кофеинбензоатанатрия АнальгинаАмидопиринаКодеина Кофеинбензоатанатрия Кофеинбензоата натрия КоФеинбензоата натрия АмидопиринаАнальгинаПромедола Содержание,г Точнаянавескаанализируемогообразца кофеинбензоатанатрия Результатыстатистическойобработки90376 16Продолжение табл Содержание,ТочнаянавесканализиКоличество, г Состав Ор Ок кофеина кофеин- бензоата руемого образца натрия Кофеинбензоэта 0,1 0,2 0,0976 Табли ца. 3,Точнаянавеска Содержание, г Количество кофеина(кофеин-бензоатанатрия), г Состав О 0,015 0,0203 0,02 0,2 0,2 0,2 Папаверинагидрохлорида 0,1018 0,1046 0,03 Фенобарбитала 0,05 Кофеин-бензоатанатрия 0,1 0,2 БромизовалаКодеина 0,015 Кофеин-бензоатанатрия 0,05 0,25 Анальгина Фенацетина 0,25 натрия Амидопирина Фенацетина Промедола Амидопирина Кодеина фосфатаКофеинаАнальгинаАмидопиринафенацетина 0,20,025 0,4355 0,39 0,39 0,0390 0,6229 0,34 0,36 0,3631 0,36 0,370,0529 0,0529 КодеинаФенобарбитала 0,00150,01 КоФеинбензоатанатрия о,за 0,28 0,0164 о,о 463 о,ооз 0,34 0,34 0,0198 0,0496 . 0,0014 0,32 0,30 0,01.87 0,0468 0,0038о,о 497,0,0038 0,050,30,3 АмидопиринаАнальгинатепе ивет пптиаиии ив и , е авветеатееаиве ееаееетееевевеев слое кислой окиси алюминия в системе хлороформеэфир, взятых в соотношении 25 е 35;50 е 65, полученную зону кофеина выявляют в ультрафиолетовом свете ифотометрируют.Источники информации,принятые во внииание при экспертизе1. Некрасов В.И. Спектрофотометрическое определение амидопирина, кофеина и фенобарбитала в таблетках. Труды 1 Всесоюзного сьезда фармацевтов. И., 1970, с. 740-745. формула изобретения Составитель А. БражниковаРедактор Р. Цицика Техред С, Мигунова, Корректор О. Билак в ае е еа иве е ттеттееве е вв пиве Тираж 882 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Же 35, Раущская наб., д. 4/5Заказ 102/25 типаивапи тпеееаиапти пеа ,ваттеевееавиттапаеефилиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Способ определения кофеина в лекарственных смесях путем растворенияанализируемой пробы в органическом растворителе, отделения сопутствующих веществ и Фотометрирования, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения селективности способа, пробу растворяют в 50-60-нои этаноле,сопутствующиевещества отделяют хроматографией в тонком незакрепленном 0,0955 ,. 0,1061 0,1058 О,1 ООО 0,0958 0,1006 о,оо 51 0,0023 +0,0063 0,10061 0,0063 + 6,26 0,0497