Способ определения кодеина в сложных лекарственных смесях

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК И 9) И 1) 4 А Ф(50 С 01 К 30(00 Е ИЗОБРЕТЕНИЯСВИДЕТЕЛЬСТВУ ПИСА К АВТОРСН ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(56) 1. Пособие по химическому анализу лекарств. Под ред, МЛ.Кулешовой М., "Медицина", 1974, с, 81-85.2. Вьсап Рзйег Т. Идентификация некоторых фармацевтических смесей тонкослойной хроматографией. Асйа Рпахш. Лц 8 оз 1., 1962, т. 12, с. 733. Михеева М.Н., Брутко Л.И. Идентификация димедрола, кодеина, кофеина-бензоата натрия и барбитал-натрия в жидких лекарственных формах. "фармация", 1983, У 1, с. 58-59 (прототип) ..4. МапЕ К.Т., Яапя Л.Я.Х. Хроматография нуклеозидов оснований нуклеиновых кислот в тонком слое полиамидного геля. - Л.СЬгошайо 8 г 1967, ч.27, р. 318.(54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОДЕИНА В СЛОЖНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СМЕСЯХ путем тонкослойной хроматографии анализируемой пробы на полиамидной пленке с последующей идентификацией полученной ,хроматограммы в Уф-свете по значению Я , о т л и ч а ю щ и й с я тем, что е целью повышения чувствительности .и специфичности способа, хроматограмму предварительно нагревают при 115- 125 С и идентификацию дополнительноОпроводят по нативной флуоресценции.1133546 Изобретение относится к Фармацевтическому анализу, конкретно к способам определения кодеина в сложных лекарственных смесях, и может быть использовано в контрольно-аналитических лабораториях.Известен фотометрический метод определения кодеина в лекарственных смесях, основанный на его взаимодей" ствии с формальдегидом и оксидом селе .1 О на в среде концентрированной серной ккслоти Я .Недостатками способа являются невозможность одновремецного определения всех компонентов смеси, невысокая чувствительность и специфичность, а также относительно большой расход анализируемой лекарственной формы.Известен способ идентификации кодеина фосфата в смеси с фенобарбиталом, 20 амидопирином, Фенацетином, ацетилса.лициловой кислотой методом тонкослойной хроматографии путем растворения анализируемой смеси в метаноле с последующим отделением инертных добавок фильтрованием и хроматограФированием полученного раствора в тонком слое силикагеля в присутствии веществ-"свидетелей" в течение 30 мин. в качестве элюента используют эфир. Затем хроматограмму для обнаружения зон всех компонентов последовательно обрабатывают реактивом Драгендорфа, раствором азотнокислой ртути и раствором хлорного железа с последующим нагреванием нри 150 С в течение 15 мин. Чувствительность определения кодеина фосфата взоне 0,25 мкг 2 .Недостатками данного способа являются сложность и длительность (не. 40 менее бО мин), невысокая чувстви" тельность и специфичность определения. Наиболее близким к предлагаемому 45 по технической сущности и достигаемому эффекту является способ определения кодеина в смеси с димедролом и кофеином-.бензоатом натрия в.жидких лекарственных формах который заклю чается в том, что анализируемую жидкую лекарственную форму и растворы соответствующих веществ-"свидетелей" наносят на полиамидную пленку и хро- . матографируют в системе хлороформ эфир 15:5 или хлороформ-эфир 22:3, Предварительная обработка полиамидных .пленок 0,0057.-ным щелочным раство 2ром Флуоресцина в бутаноле позволяет в Уф-свете (254 нм) обнаружитьэоны разделенных компонентов, поглощающих в Уф-области, в виде темньаспятен на флуоресцирующем фонеНедостатками известного способаявляются невысокая чувствительность(0,2 мкг в зоне) и низкая специфичность, так как идентичность компонентов устанавливается только позначению 11 .Цель изобретения - повышение чувствительности и специфичности способаопределения кодеина в сложных лекарственных смесях.Поставленная цель достигается тем,что согласно способу, заключающемусяв тонкослойной хроматографии анализируемой пробы на полиамидной пленке с последующей идентификацией полученной хроматограммы в Уф-свете позначению 11, хроматограмму предварительно нагревают при 115-125 оС ийдеитификацию дополнительно проводятпо нативной флуоресценции.Обнаружение зон веществ нахроматограммах по натинной Флуоресценции является одним из наиболее чув- .ствительнык способов. Однако зонакодеииа в обычных условиях опытане обнаруживается при непосредственномпросматривании хроматограмм на полиамидной пленке в Уф-свете.Предварительное нагревание полученньи хроматограмм при 115-125 Спозволяет эа счет специфической флуоресценции обнаружить ультрамалые ко-:личества кодеина (0,02 мкг в зоне) .Оптимальность укаэанного температурного.интервала объясняется тем,что нагревание хроматограмм при более низкой температуре менее эффективно, так как при этом требуетсябольшая затрата времени, более высокая температура нежелательна ввидуопасности деструкции.полиамидных слоев и снижения чувствительности оп"ределения (табл 1),В табл. 1 показана зависимость чувствительности обнаружения кодеина наполиамидных пленках в УФ-свете оттемпературы и времени нагревания хроматограммы,Как видно из результатов, представленных в- табл. 1 необходимое времяо нагревания хроматограммы при 115-125 С составляет 2 мин. Меньшее время нагревания трудноконтролируемо. Большее3 1133 время нагревания не приводит к повышению чувствительности способа, а только увеличивает время анализа.Преимуществом предлагаемого способа является так же то, что одновременно с кодеином проводится разделение и обнаружение хроматографических зон всех других компонентов лекарственных смесей по специфической Фпуоресценции с чувствительностью, превышаю О щей в 10 раз известный метод (табл.2) . При этом цветной оттенок Фпуоресценции служит удобным вспомогательным средством, позволяющим в совокупности со значением 01 наиболее достоверно 15 идентифицировать кодеин и другие компоненты смеси.Универсальность способа состоит в том, что хроматографические зоны .практически всех компонентов иссле дуемых лекарственных смесей, анализируемые данным способом, обладают собственной (нативной) Флуоресценцией, что можно объяснить особенностью протекания фотохимических процессов в полимерах, в данном случае в поли- амиде. Введение любой добавки (зона вещества) приводит к протеканию в полимере сложных фотохимических процессов, причем тепло и облучение УФ- ЗО светом оказывают существенное влияние на процессы, сопровождающиеся флуоресценцией.Полиамидные пленки готовят известным методом 41 путем растворения. 35 полиамидной смолы в муравьиной кислоте, смачивания полученных вязким раст. вором обеих сторон полиэтилентерефталатной пленки (основы) и высушивания в.камере, насыщенной парами воды.Полученные полиамидные пленки обладают высокой механической проч+ ностью для длительного храненияОпределение кодеина в сложных лекарственных смесях осуществляют 45 следующим образом.Раствор навески порошка в этиловом спирте с помощью микрошприца (МШ) или калиброванных капилляров наносят на линию старта на рас-.50 стоянии 5 мм от нижнего края поли-, амидной пленки размером 5 х 5 см и одновременно наносят этанольные растворы веществ- "свидетелей" техже концентраций. 55Хроматографирование осуществляют восходящим способом в подходящей дпя . каждой смеси системе растворителей,Длина пробега Фронта растворителейсоставляет 40 мм и является вполнедостаточной для полного разделениякомпонентов смеси. При этом времяхроматографирования 5-7 мин,Затем полученную хроматограмму нагревают в сушильном шкафу при 115 О125 С в течение 2 мин, и обработанную таким образом хроматограмму просматривают в УФ-свете при длинах волн254 и 366 нм.При этом обнаруживают на полиамидной пленке зоны компонентов смеси и соответствующих веществ-"свидетелей". По совпадению значений 8 1и цветного оттенка флуоресценции исследуемых и стандартных веществ("свидетелей") идентифицируют составсмеси.П р и м е р 1. 0,05 г порошковой смеси состава: кодеина фосфат0,015,ф фенобарбитал 0,05; амидопирин 0,3, растворяют в 1 мл 703-ногоэтилового спирта, Параллельно готовят растворы веществ-"свидетелей":кодеина фосфата, фенобарбитала иамидопирина.На линию старта полиамидной пленки наносят по 0,5 мкл исследуемогораствора и растворов "свидетелей"и хроматографируют в системе растворителей эфир-метанол - 252-ный водный аммиак (12:1:1) .Затем хроматограмму нагревают втечение 2 мин при 115-125 С.При обнулении хроматограмм УФ-светом обнаруживают зоны трех веществ,которые идентифицируют по значениям3.и цветному оттенку флуоресценцииэоны (табл. 2).П р и м е р 2. 0,05 г порошковойсмеси состава: кодеина фосфат 0,01,фенацетин 0,3; кислота ацетилсалициловая 0,3, растворяют в 1 мп 70 Е-ного этилового спирта. Далее поступают, как описано в примере 1, используя для хроматографирования системурастворителей ацетон-эфир-ледяная уксусная кислота ( 15:5:0,5) .При облучении хроматограммы УФсветом обнаруживают зоны трех веществ,которые идентифицируют по значениям 1 1 и цветному оттенку флуорес-.ценции зон (табл. 3)П р и м е р 3. 0,02 г порошковой смеси состава: кодеина фосфат 0,02 папаверина гидрохлорид 0,02, эфедрина гидрохлорид 0,025, фенобарбитал1133546 Таблица 1 Температура ОС Чувствительность, мкг в зоне, при времени нагревания, мин 4 1 6 105 0,04 0,05 0,03 0,03 0,02 115 0,02 0,02 0,03 0,02 0,02 0,03 0.,04 0,03 0,03 0,04 135 0,05 Таблица 2 Окраска в Уф-свете Вещество 254 нм 366 нм 0,51 Кодеина фосфат розовая Голубая 0,71 Амидопирин Фенобарбитал ГолубаяТемная 0,28 Синеватофиолетовая Таблица 3 Окраска в Уф-свете Вещество 254 нм 366 нм Кодеина фосфат 0,59 Желтая Желтоваторозовая0,79 Фенацетин ярко-зеле"ная Светло-голубая Кислота ацетилсалициловая Синяя 0,43 Синяя Э0,025 у димедрол 0,03, растворяют в 1 мп 703-ного этилового спирта и да- лее поступают, как описано в примере 1, в присутствии соответствующих веществ-"свидетелей". При облучении хроматограмм Уфсветом, обнаруживают эоны пяти веществ, которые идентифицируют по значениям И и цветному оттенку флуорес ценции (табл . 4) . ЪЖелтая Желтовато1133546 Таблица 4 Окраска в УФ-светеВещество 254 нм 366 нм Кодеина фосфат Желтоваторозовая 0 51 Желтая Папаверина гидрохлорид О,ЧО Ярко-голубая(гашение) Синевато- фиолетовая Светло-зеленая 0,91 Желтоватозеленая Димедрол Филиал ППП"Патент", г, Уагород, ул. Проектная, 4 Составитель В.ШкилъковаРедактор В.Петраш ТехредЛ,Иикеш . КорректорИ.ИускаЗаказ 9945/38 Тирак 898 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж,Раушская.наб ., д. 4/5