Способ получения антибиотиков

ОПИ САНИ ЕИЗОБРЕТЕНИЯК ПАТЕНТУ Союз Советскиз Социалистическил Республикависимый от ентавлено 28.Ч 1.1968 ( 1249734/30-15) иоритет ЗОЛ"1.1967 ( 41894/67, Япония) Комитет по делаМ изобретений и открыти при Совете Министров СССРСабуро Су агацу Заявитель ТИБИОТИКОВ СОБ ПОЛУЧЕН обу,получения тем с,испольдуцентов преди культивиро ых средах, соазота,и минеоксинов 1, К Нз и ОН НСОНОН ОВНОСН1СН,ОСОКИН,=1 или 0; оторои К - гидроксиозначает Изобретение относится к снос антибиотиков биологическим п зованием в качестве грибов-про ставителей класса Ягер 1 оптусез ванием последних .на питательн держащих источники углерода, ральных элементов,Для получения комплекса по и Е общей формулы(Япония) когда гг=О; в качестве гриба-продуцента бе.рут Ягер 1 огпусез сасаог айаг. азоег 1 з 1 з штаммыАТСС 19093 и АТСС 19094 и полученнуюсмесь полиоксинов Л, К и 1 разделяют. Куль 5 тивирование штаммов ведут в аэробных условиях глубинным методом при,перемешиванпппитательной среды, содержащей источникиуглерода, азота и минеральных элементов,предпочтительно при температуре 25 - 35 С вО течение времени, достаточного для достижения максимального выхода готовых продуктов.В качестве, источника углерода используюткрахмал, декстрины, глюкозу, глицерин, маль 5 тозу и фруктозу.В качестве источника азота применяют мясные экстракты, пептон, кукурузный экстракт,соевую муку, размолотыи арахис, хлопковыйжмых и дрожжи,0 В качестве источника минеральных элементов берут хлористый натрий, хлористый калий, карбонат кальция,и фосфаты.Разделение полученной смеси ,полиоксиновЛ, К и 1. производят на колонках с целлюло 5 зой с использованием смеси растворителей:бутанола, уксусной кислоты и воды, взятых всоотношении соответственно 4: 1: 2.Если К - гидроксил, а гг=1, то этот антибиотик называется полиоксином 3; если КСООНИобозначает СНЗ - СН,=К, а п=0, тоантибиотик называется полиоксином К; еслиК - гидроксил, а а=0, то антибиотик назы,вается полиоксиномШтаммы АТСС 19093 и АТСС 19094 являются мутантами 8. сасао 1 и относятся к группе Я, дг 1 зецз. Второй штамм почти идентиченпервому, но отличается по окраске на обратной,стороне агара Чапека,Ниже приводится более подробная характеристика обоих штаммов (типы 1 и 2).1, Наблюдения под микроокопом.Хороший рост,наблюдается при 20 - 32 С,Воздушный мицелий моноподиально разветвлен на синтетическом и протеинсодержащемагарах. Спорофоры образуют открытые спирали и не скручиваются, Форма и размер спорасимметричная стержнеподобная (1,5 - 1,80,5 - 0,7 люк) или овальная (1,2 - 1,0 1,0 -0,7 мк), поверхность спор гладкая.11. Культуральные признаки 8. сасао 1 наг.азоепз 1 з.Агадир Чапека, 27 С.Тип 1 хорошо растет в бесцветном виде илибело-желтом и образует обильный воздушный мицелий, который по виду порошкообразен и меняется от белого до дымчато-серого.Обратная:сторона бледно-оливково-желтаябез растворимого пигмента.Тип 2 образует воздушный мицелий, который по виду порошкообразен и меняется отбелого до дымчато-серого, Обратная сторонас желтым оттенком бледно-розового цвета.Глицериновый агар Чапека, 27 С:Тип 1 растет хорошо, бледно-оливково-темно-желтого цвета. Образуется незначительноеколичество (или вовсе не образуется) тонкогобелого воздушного мицелпя, Обратная сторона бледно-оливково-желтая или кремовая, безрастворимого пигмента.У типа 2 не образуется воздушного мицелия, остальное, как у типа 1.Питательный агар, 27 С:Тип 1 растет хорошо, скручен, дымчато-серый, образуется незначительное количествовоздушного мицелия, цвет которого меняетсяот белого до светло-серого. Обратная сторона коричневато-желтого цвета и дает коричневый растворимый пигмент.Тип 2 растет, как тип 1, образует незначительное количество воздушного мицелия белого или беловато-серого цвета, Получаетсяменьше растворимого пигмента, чем у типа 1.Глюкозопептоновый агар, 27 С;Тип 1 имеет цвет от кремового до светло-серо-оливкового, Образуется небольшое количество серого воздушного мицелия или вовсе необразуется, Обратная сторона светло-коричневая и дает светлокоричневый пигмент.Тип 2 растет скудно со слабым образованием белого или светло-серого воздушногомицелия в последний период выращивания.Обратная сторона оливково-желтая, б 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Глюкозоаспарагиновый агар, 27 С:Тип 1 растет скрученным и меняет окраскуот белой до желтой, образует воздушный мицелий от белого до светло-серого или серогоцвета, Обратная еторона бронзово-желтая ине дает растворимого пигмента.Тип 2 дает незначительный рост воздушного мицелия, но идет незначительное образовалие бело-серого воздушного мицелия,Крахмальный агар, 27 С:Тип 1 растет хорошо, бесцветный или оливково-коричневый, образует большое количество порошкообразного светло-мышиного воздушного мицелия. Обратная сторона оливково-желтая и не дает растворимого пигмента.Гидролизующая активность по крахмалу нормальная,Тип 2 - то же, что для типа 1.Кальциймалеатный агар, 27 С:Тип 1 растет бесцветным или светло-коричневым и желтым, образует обильный воздушный мицелий мышиного цвета. Обратная сторона кремово-желтая и дает некоторое количество светлого желто-коричневого растворимого пигмента,Тип 2 - то же, что тип 1.Тирозиновый агадир, 27 С:Тип 1 дает рост слабь 1 й, коричневый цвет ине образует воздушного мицелия.Обратная сторона кремового цвета и недает растворимого пигмента.Тип 2 - то же, что тип 1.Яичноальбуминовый агар, 27 С:Тип 1 растет хорошо, бесцветный или белый,не образует значительных количеств воздушного мицелия, но иногда в последний периодвыращивания дает очень небольшой белыйвоздушный мицелий. Обратная сторона белая и не дает растворимого пигмента.Тип 2 - то же, что тип 1.Агар на овсяной муке, 27 С:Тип 1 растет оливково-желтого цвета и образует некоторое количество светло-сероговоздушного мицелия. Иногда не образуетсявоздушный мицелий, Обратная сторона бесцветна и не дает растворимого пигмента.Тип 2 - то же, что тип 1,Картофельная масса, 27 С:Тип 1 растет хорошо, темно-оливковый цвет,образует бледно-серый воздушный,мицелий.Среда меняет цвет до светло-дымчато-серого.Тип 2 - то же, что тип 1,Желатиновая культура, .полученная путеминокуляции уколом, 18 С: Тип 1 растет хорошо со слабым ожижением желатины. Образуется в;небольшом количестве темно-коричневый растворимый пигмент,Тип 2 не дает ожижения желатины.Глюкозный бульон, 27 С:Тип 1 растет хорошо на поверхности и под поверхностью раствора и дает растворимый коричневый пигмент.Тип 2 - то же, что тип 1.Раствор Каспекса, 27 С:Глюкоза Сахароза Крахмал Лактоза+1++ Тип 1 растет хорошо на поверхности и надпе раствора и образует на поверхности тонкие пленки вместе с небольшим количествомбелого воздушного мпцелия. Не образует растворимого пигмента,Тип 2 не дает пленок на поверхности.Образование меланина: оба типа 1 и 2 необразуют.Восстановление нитратов: оба типа 1 и 2слегка положительны.Целлюлозная среда.На синтетическом,культуральном растворе,содержащем в качестве источника углеродацеллюлозу, роста,нет.Питательный агар (мясо, пептон и глюкоза).Тип 1 растет хорошо, светло-оливково-желтого цвета, скручен, образует незначительноеколичество белого воздушного мицелия, который,иногда не образуется. Обратная сторонакультуры окрашена в белый цвет, тип 1 даетнебольшое количество черного растворимогопигмента.Тип 2 растет хорошо, кремово-желтого цвета без образования воздушного мицелия. Обратная сторона гладкая, Тип 2 подобен типу 1во всех других отношениях.Лефлеровекая сыворотка, 27 С:Тип 1 растет хорошо, оливково-желтыйцвет, сильно скручен и,не образует мицелия.Образует черный растворимый пигмент в небольшом количестве.Тип 2 - то же, что тип 1.Лекмусовое молоко, 27 С:Тип 1 растет, образуя, коричневые кружкина поверхности и не вызывает коагуляции илипептонизации. На 20-й день после начала выращивания рН 4,0 - 5,0.Тип 2 растет в виде, кружков на поверхности и вызывает постепенную коагуляцию сослабой пептонизацией. На 20-й день посленачала выращивания рН 7,8 - 8,0.111. Физиологические свойства.Оптимальные условия для роста: рН 6 - 8(типы 1 и 2); температура 25 - 30 С (типы 1 и2); облигатный аэроб (типы 1 и 2).Критические условия для возможного роста: рН 9 и 4 (тип 1); 10 и 4 (тип 2); температура 18 и 37 С (типы 1 и 2).Тирозиназа: реакция слабо положительна(типы 1 и 2).Пептонизация молока; тип 1 - отрицательна, тип 2 - положительна.Разложение целлюлозы оба типа 1 и 2отрицательны.Хромогенная функция: слабо положительнаи иногда отрицательна.1 Ч. Использование источников углерода.Использование источников углерода, определенное по Т. б. Рг 1 йагп:Тип 1 Тип 2+1 10 Полное разделение полиоксинов 1, К иможет быть достигнуто распределительной хроматографией на порошке целлюлозы или 60 на силикагеле. Ее осуществляют соответствующим растворителем, например смесью воды и смешпвающегося с водой растворителя - метанола, этанола, пропанола, бутанола, ацетона, уксусной кислоты, пиридина или 75%-ного 65 фенола. В этом случае полиоксины 1, К и 1. Условн е означения;- хороший рост;15- средний рост;+ - слабый рост,Как правило, концентрация антибиотиков вкультуре достигает максимума через 40 -120 час культивирования. Поскольку это вре 20 мя максимальной концентрации зависит отусловий аэрации и перемешивания даже приодной и той же температуре и среде, желательно в каждом случае определять это время.25 Для выделения антибиотиков из культурной среды можно применять обычные физикохимические методы. Например, сначала можно определить мицелий фильтрованием с добавкой способствующего фильтрованию веще 30 ства, например кислоты или нейтральной диатомовой земли, затем фильтрат сорбироватьна активированном угле при кислом или нейтральном значении рН. Лнтибиотики можноэлюировать из активированного угля с помо 35 щью растворителя антибиотиков, напримерсмеси воды и смешивающегося с водой растворителя, например метанола, этанола, пропанола, бутанола, ацетанола, ацетона, уксусной кислоты или пиридина. Поскольку поли 40 скспны являются амфотерными соединениями,они сорбируются на катионообменной илпанионообменной смолах и алюируются соответствующей кислотой, щелочью или раствором соли. Например, фильтрат культуры пос 45 ле подкислення можно пропустить через колонну с Доуекс 50 %Х 8 (тип Н), Полиоксинысорбируются на этой смоле и алюируются снее водным раствором 5 ф/О-ного хлористогонатрия нли фосфатным буфером рН 4,3. По 50 лученный таким образом сырой порошок полиоксинового комплекса можно очистить хроматографией на колонке с помощью ионообменника, например сульфоэтилсефадекса,сульфоэтилцеллюлозы или сульфометилцел 55 люлозы, или способом зонного электрофореза.элюируют вместе с другими полиоксинами иразделяют,При перекристаллизации из водного спиртаполиоксины , К и 1.:получают раздельно ввиде бесцветного порошка. Ниже приводятся 5физико-химические свойства полиоксинов , КиТемпература,разложения: хотя полиоксиныК и 1. не дают точной температуры разложвния, очевидно, что они постепенно разлагаются без плавления при температуре выше200 С,Элементарный состав: вес. %:, С 41,71 Н 5,25 х 13,90К С 44,25 Н 5,07 х 13,92 151. С 40,45 Н 5,09 х 1 14,37Остальное кислород.Молекулярный вес: , К и 1. являютсяамфотерными соединениями, их молекулярныйвес определяют титрованием их эквивалентных весов:499; К 590; х 495.Брутто-формула - : СНззхзОд, К:: С НззхзОд, 1: СзНззхзОз,Содержание элементов, высчитанное из молекулярного веса: 25Д для СиНззЫзО 12Вычислено, %: С 41,55; Н 5,13; х 14,25;мол. в. 491,41.К для СззНзох 601 з.Вычислено, %: С 45,05; Н 5,16; х 14,33; 30мол, в. 586,53.1. для СыНззХзОз.Вычислено, з/з: С 40,26; Н 4,86; х 1 14,67;мол, в. 477,40,Удельное оптическое вРащение:а 1 оз - 35+31,7 (С=1 в воде), К а - 16,5 (С=1в воде), 1. а+34,4 (С = 1 в воде),Ультрафиолетовый спектр поглощения для,:0,05 хНС Л., =264 ллк (Е 158)0,05 х хаОН Л=267 ллк (Е,"133)К:0,05 х НС Лма, =259 ллк (ГС 138)0,05 И хаОН Л, =262 ллк (Есм 109)1.: 0,05 х НС 1 Л ,=259 ллк (Ес, 170)0,05 х УаОН Л,=262 ллк (Е,132).В результате исследований выяснено, чтопоглощение дляпроисходит вследствие наличия в молекуле хромофора тимина. и что 50поглощение , К и . происходит вследствиеналичия хромофора урацила в их молекулах. Инфракрасный спектр поглощения: инфракрасные спектры поглощения для , К и . 55 измерены на таблетках бромистого калия. Основное поглощение идет при длинах волн: , 3300 в 34, 1680, 1600, 1475, 1408, 1350, 1278, 1125, 1060, 783, 572 слК 3300 3400 1690, 1640, 1470, 1378, 1315, 1283, 1127, 1058, 60 780, 565 сл 1; 1. 3300 в 34, 1670, 1600, 1460, 1412, 1350, 1275, 1120, 1060, 770, 570 сл 7.Величины х определены путем проявления системой растворителей бутанол в уксусн Кислота - вода (4: 1; 2) с помощью фильтро 8вальной бумаги Х 51 (Тойо Роси КО):0,08;К 0,22; 1. 0,08. В этом случае величина х 1 дляА в качестве стандарта равна 0,19.Растворимость: , К и 1. легко растворимыв воде, но трудно растворимы в метаноле,этаноле, ацетоне, хлороформе, бензоле иэфире.Цветные реакции: , К, 1. дают положительную нингидринную и диазо-реакции и реакцию То 1 епз и отрицательную реакцию ГеЬ 11 прна 2,4-динитрофенилгидразин, Мо 1 зЬ, нитропрусид натрия хлористого железа и на реакцию ЯаадцсЫ.Величина Рк:, К, 1. являются амфотерными соединениями, каждое из них имеет потри титруемые группы. Их величины Рк равны:3,0; 7,1; 9,9; К 3,0; 7,2; 9,3; 1. 3,0; 7,1; 9,4.Стойкость: , К и 1. несколько нестойки вщелочных растворах, но чрезвычайно стойкив кислых и нейтральных растворах, При нагревании при 100 С в течение 15 лин не происходит разложения при рН от 2,0 до 7,0.., К и. также стойки к ультрафиолетовомуосвещению. Их фунгицидное действие сохраняется после облучения;растворов на расстоянии 30 сл ультрафиолетовой лампой мощностью 20 вг в течение 24 час.Ниже описана биологическая активность полиоксинов , К и 1Антимикробные спектры. В табл, 1 показанантимикробный спектр полиоксинов , К и 1Минимальную подавляющую концентрациюопределяют через 48 час инкубирования всреде из картофельно-сахарозного агара указанных микроорганизмов,Эффективность: полиоксины , К и Е высокоэффективны против А 11 егпага йцсЬ 1 апа,С 1 асозрогцгп ц 1 хшп, бццпагйа 1 аг 1 спа,СосЬ 1 оЬо 1 цз пнуаЬеапцз, Яс 1 его 1 п 1 а с 1 пегеа.Фитотоксичность и токсичность. При испытаниях на растениях риса и различных растениях полиоксины , К и 1. нефитотоксичны вконцентрации 200 ч,/млнн. и выше, Следовфитотоксичности не обнаружено даже приконцентрации 800 ч./млн. на растениях риса иконцентрации 200 ч./млн для других растений,например яблони, груши и томатов.При испытании на токсичность на мышахполиоксины К и 1. нетокси зны: при внутреннем влиянии 500 лг/кг, при приеме внутрь15 г/кг.При испытании на токсичность на кроликахрастворы 400 лг/лл не давали раздраженияпри введении в коньюгтивный мешочек кролика.Не обнаружено кожной токсичности.При испытании на токсичность на рыбахполиоксины , К и 1. при концентрации10 ч./млн нетоксичны,при экспозиции в течение 75 час.Суммируя вышеуказанное, можно сказать,что полиоксины , К и 1. являются антибиотиками с предохранительными и лечебнымисвойствами и эффективны против различныхболезней, вызываемых фитопатогенами, безТаблица 1 Антимикробный спектр полиоксинов 1, К и 1. Минигяальная подавляющая концентрациялскг,мл Тест-обьект 253,121001,561.5612,51,565025(5050 5050 5050 50 50 50 50 50 , 50 50 1 50 5050 50 , 50 5050 50 50 50 50 50 50 50 50 50, )505050 50 50 50 50 50 50 50 50 50 5050 , 50 5050 фитотокспчного и токсичного действия. Эти антибиотики полезны в качестве ссльскохозяй ственных фунгицидов для зашиты растений.П р и м е р 1. Готовят культур иъю среду следующего состава, Г:глюкоза 15крахмал 50соевая мука 20сульфат аммония 5сухие дрожжи 10хлористый натрий 5карбонат кальция 2вода 1000 млрН среды доводят до 7,6 и стерилизуют при температуре 120 С в течение 20 мин.Штамм 8. сасао айаг. азоепзз, тип 1, АТСС 19093 вносят в питательную среду и ферментируют в ней при 27 С при перемешиванип, которое продолжают до достижения максимального выхода антибиотиков. Проводят анализ, используя в качестве тест-организмов А(егпага КсцсЫапа, СосИюЬо 1 цз гпуаЬеапцв. При выращивании Я. сасао 1 аг. азоепзв, тип 1 в 300 мл колбе Эрленшейера, содержащей 70 мл среды, максимальный выход достипнут через 72 - 96 час. При внесении выращенного бульона в течение 48 час в ферментаАНегпапа 1 с 11 сцсЬ 1 апаСосЬИоЬо ца гпуаЬеапцаРе 1 йсц 1 апа аава 1 сйРгсц ага огугаебцдпагда 1 агспаСогйсцгп гойайЯс егопа спегеаС 1 ас 1 оарогцгп цвюп 11 е 1 гпп 1 Ьовропшп врподецгпТгс 1 юрЬуоп аа 1 сгодевТпсюрЬу 1 оп п 1 егдд 1 айаТгсЬорйу 1 оп гцЬгцгпСапйда аЬсапаСапйда горссаивСапс 1 Ыа сгцаеСгурососсцв пео 1 огспой 1 вЛарегр 11 ца шп 1 яацвАарегрИ ив еггецаМцсог гасегповцвХосагдв аа 1 егодевТпсЬогпопав чарпайаЯарЬуососсца ацгецв 209 рМсгососсцацецаВас 11 ца ацЫйвМусоЬас 1 епцгп агперпа 1 вМусоЬас 1 егцгп 607МусоЬас 1 епшп рЬ 1 еМусоЪасепцгп ЕССЕасЬегсЬ 1 а со 1Раецдогпопаа аегцрпоааЯегга 1 а гпагвсепвРгоеца чц 1 дагвХапйоспопаа огугае 506,2510012,51,561006,2512,56,255050505050505050505050505050505050505050505050505 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 ционный резервуар, содержащий 400 л такойже среды, и ферментации при,перемешиваниисо скоростью 200 обмпн и аэрации 400 и/минполучают максимум антибиотика через 96 -120 час ферментации,Выход 1800 мка/мл в пересчете на полиок.син В.Выделение и очистку проводят следующимобразом.430 л фсрментированиого бульона подкисляют до рН 2,0 0/е-ной соляной кислотой,затем нагревают до 70 С и добавляют 9 кгдиатомовои земли, затем фильтруют нафильтр-прессе. Фильтрат обрабатьваот 8: аактивированного угля и 8 кг диатомной земли, перемешивают и фильтруют. Активироваииый уголь промывают 350 л воды. Активныесоставляющие элоируют дважды по 100 л60% -ного, водного ацетона. Элюированныйраствор выпариваот в вакууме. Таким образом, получают 4 л жидкости. содержащейнеюжный проди кт.Добавляют 50 л ацетона, полученный осадок сушат при пониженном давлении и получают 920 г сырого порошка коричневого цвета. 300 г этого порошка растворяют в воде иподкисляют до рН 2,0. Подкисленный растворпрои скают через колонку, заполненную 4,5 лЛоуекс ГХ 8 (50 - 100 меш, форме Н). Послепромывания водой антибиотики элюируют5 э/,-ным водным раствором хлористого натрия.Активные элюаты собирают и обрабатываютактивированным углем для удаления неорганических солей. После упаривания элюатовпосле обработки угля получают 60 г свстлокоричневого порошка.Его снова хроматографируют на ДоуексГХ 8. Порошок растворяют в 0,1 М растворсфосфатного оуфера (рН 2,0) и сорбируют колонкой, заполненной 2 л Доуекс 50 11 Х 8(00 - 200 меш), которая была буферироваиафосфатным оуфером (рН 2,0), Антибиотисиэлюируют 0,1 М фосфатным буфером 1 РН4,3). Активные элюаты обрабатывают углемдля удаления неорганических солей. Получают 35 а светло-нселтого порошка. Его очищаютхроматографически с помощью сульфоэтилсефадекса, представляющего собой сильно кислую ионообмсниуо смолу сульфоэтильноготипа. Этот порошок помещают в 50 г колонкус сульфоэтилсефедексом (ЯЕ - С - 25), заранее промытую буферным 0.01 Ч фосфатиымбуфером (рН 2,0). Антибиотики элюируютпоследовательно, повышая концентрацию буфера до 0,1 М. Таким образом получают 18 аочищенного белого порошка полиок:иновогокозилекса.Разделяют полиоксины 1, К и 1 следующимооразом.Полученный полиоксновыи комплекс растворяют в воде, раствор. пропускают через колонку, заполненную 500 л Лмоерлита 31 с -4 В - С (100 - 200 мсш.).Вьходяьций раствор соединяют с воднымипромывками. Полученный раствор уиаривают10 15 20 Р - СОСОНМСН1Н,МСН НОСН СОО 50 55 пересчете на полиокна микрооргани ме под пониженным давлением, и получают 10 г белого порошка, представляющего собой смесь полиоксинов Л, В, С, Н, 1, К и 1., (В этом, случае полиоксины В, Е и Г сорбируются на смоле).Для:разделения полиоксинов 1, К и 1. применяют роматографирование на колонке с целлюлозой. Используют распределителыную хроматографию на колонке с целлюлозой (55 - 100 мм) с помощью системы растворителей бутанол - уксусная кислота - вода (4: 1: :2). Сначала элюируют полиоксин Н, затем полиоксины К, А, 1, 1. и В.Если они не по.тностью разделились, то снова проводят хроматографирование на колонке с целлюлозой с помощью 75%-ного фекола в качестве растворителя для полного разделения полиоксинов 1, К и 1Из 10 г полиоксинового,комплекса получают 0,1 г полиоксина Л; 0,06 г полиоксина К и 0,08 г полиоксина 1Наконец, проводят кристаллизацию из водного этанола. Полиоксины Л, К и 1. получают в виде бесцветного порошка.П р и м е р 2, Готовят культуральную среду следующего состава, г:сахароза 60глюкоза 15сухие дрожжи 35соевая мука 15фосфат калия 2карбонат кальция 4вода 1000 млрН среды не регулируют и ведут ферментацию по примеру 1. Концентрация полиоксина достигает 3 л 1 г/мл в пересчете на активность полиоксина В через 72 - 96 час после инокуляции штаммом типа 1.При использовании в качестве испытательного микроорганизма АИегпаг 1 а 1 йцсЬ 1 апа выход составляет 300 мкг/мл в пересчете на полиоксин В.Полиоксины Я, К и 1 выделяют из питательной среды по примеру 1, Выход; полиоксин 1 0,5 г, полиоксин К 0,3 г и полиоксин 1. 0,4 г из 28 г полиоксинового комплекса.П р и м е р 3, Готовят 1 питательную среду следующего состава, г:растворимый крахмал 70глюкоза 5соевая мука 15хлористый натрий 2карбонат кальция 4вода 1000 млрН среды доводят до 7,0 и ведут ферментацию по примеру 1, за исключением того, что проводят инокуляцию штаммом типа 2 (АТСС 19094) .Концентрация полиоксинов достигает 7 юг/мл в пересчете на активность полиоксина В за время от 72 до 96 час после ичокуляции среды.Выход 7000 мкг/мл всин В при испытанииА 11 егг 1 ага 1(1 сцс 111 апа,Полиоксины д, К и 1. выделяют из питательной среды по примеру 1. Выход: полиоксин 1 1,2 г, полиоксин К 0,65 г и полиоксин 1. 0,8 г из 62 г полиоксинового комплекса. Предмет изобретения1. Способ 1 получения антибиотиков, включающий культивирование гриба-продуцента из класса Ягер 1 огпусев на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральных элементов, при температуре предпочтительно 25 - 35 С в течение времени, достаточного для достижения максимального выо. да готовых, продуктов, и выделение последних, отличающийся тем, что, с целью получения комплекса полиоксинов Л, К и 1. общей фор- мулы СН,ОСОК Нкоторой К - гидроксил, когда п=1 или 0; К означает С 11- СН = Н -когда а=О; в качестве гриба-продуцентаберут Ыгер 1 огпусез сасао 1 ъаг. азоепз 1 з штаммы АТСС 19093 и АТСС 19094, и полученнуюсмесь полиоксинов 1, К и 1. разделяют.2. Способ по п. 1, отличающийся тем, чтокультивирование штаммов АТСС 19093 иАТСС 19094 ведут в аэробных условиях глубинным методом при перемешивании питательной среды,3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что вкачестве источника углерода используют крахмал, декстрины, глюкозу, глицерин, мальтозуи фруктозу,4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что вкачест 1 ве источника азота применяют мясныеэкстракты, пеитон, кукурузный экстракт, соевую муку, размолотый арахис, хлопковыйжмых и дрожжи.5. С 1 пособ по п, 1, отличающийся тем, что вкачестве источника минеральных элементовберут хлористый натрий, хлористый калий,карбонат кальция и фосфаты.6, Способ по п. 1, отличающийся тем, чторазделение полиоксинов Л, К и 1. производятс помощью хроматографии на,колонках с целлюлозой с использованием смеси растворителей бутанола, уксусной кислоты и воды.7. Спосоо по п. 6, отличающийся тем, чторастворители берут соответственно в соотношении 4:1:2,