Способ качественного обнаружения трипсина

(57) Изобретение отн ситспроизводства эндокринно-. ферментныхпрепаратов и может быть использованопри качественном обнаружении трипси"д.на. Цель изобретения -,:;ускорениепроцесса. Обнаружение трипсина прово-дят путем нагревания раствора испытуемого образца в присутствии 503-ного раствора гидроксида калия, а затем в реакционную массу добавляютрастворы парафенилендиамина и железоаммониевых квасцов. 7 ил,Бюл. М 26айджанскнй государств нститут им. Н. Нар нныймака СРГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР пО елАм изОБРетений и ОтнРыт2;НС)+Н 18 ф 6 Р -ф ВГ +НН+ БН + й; 35 ртохиноидная Парах Фиолетовое Лаута идная Образовавшийся краситель имеет максимум поглощения при 600 нм (фиг. 1, кривая а). Из фиг. 2 и 3 следует, что нагревание раствора, содержащего 0,05 мг/мл трипсина, при 100 С (фиг. 2) в течение 1 мин.(Фиг, 3) в присутствии 1 мл 50 Х-ног раствора гидроксида калия способствует максимальному разрыву дисульфидных связей,в его молекуле с образованием сульфида, который при взаимодей" ствии с парафенилендиамином в при сутствии железоаммониевых квасцов приводит к синтезу фиолетового Лаута ( иг. ,-кривая б). ф Изобретение относится к производству эндокрионно-ферментных препаратов и может быть использовано при качественном обнаружении трипсина.Цель изобретения - ускорение процесса.На фиг. 1-7 приведены зависимости, поясняющие предлагаемый способ.Способ заключается в том, что раствор трипсина нагревают в. присуто ствии гидроксида. калия при 100 С в течение 1 мин. После охлаждения и добавления растворов парафенилендиамина и желеэоаммониевых квасцов воз никает красно-фиолетовое окрашнвание,Возникновение фиолетового окрашивания связано с образованием основного тиаэинового красителя - окисленной формы 3,7-диаминопроизводного 20 (фиолетового Лаута). Синтез красителя, индуцируемый окислительным каталитическим действием ионов трехва. лентного железа, осуществляется с участием парафенилендиамина и серо водорода, отщепляемого из трипсина в процессе его щелочного гидролиза,Структура хромофора, которая может быть представлена в виде двух мезомерно-стабилизированных предельных формул - орто- и паразиноидной - приведена в суммарном уравнении синтеза красителя;мула изобретен нного обнаружения тривающий приготовпробы Фермента, тку и оценку реействия .о т л итем, что, с целью качеств предусм едуемой ую обраб Способтрип сина,ление исслтермическзультатов взаимо й с я ч ающ Иэ фнг. 4 и 5 видно, что нагревание раствора трипсина в присутствии1 мл 50 Х-ного раствора гндроксида калия способствует достижению цели. Придобавлении к гидролизуемым растворамтрипсина 1 мл раствора парафенилендиамина (этот раствор приготовленрастворением 0,5 г порошка парафенилендиамина в смеси 50 мл воды и100 мл концентрированной серной кислоты) и 1 мл 5 Х-ного раствора железоаммониевых квасцов получаются стабильно окрашенные растворы красно-фиолетового цвета (фиг. 6 и 7).Способ обнаружения трипсина заключается в том что в колбу на 25 иппомещают раствор 0,05 г трипсина., в1 мл воды, туда же добавляют 1 мл50%-ного раствора гидроксида калияОи нагревают в течение 1 мин при 00 С,В охлажденную смесь добавляют 1 млраствора 0,5 г парафенилендиамина всмеси 50 мп воды и 100 мл концентрированной серной кислоты, 1 мп 5 Х-иогораствора железоаммониевых квасцов.Затем раствор доводят водой до метки,возникает красно-фиолетовая окраска,Предел обнаружения: 0,01 мг трипсина,П р и м е р 1. В колбу на 25 млпомещают 0,05 г трипсина в 1 мп воды,далее нагревают щелочью, добавляют0,5 мп раствора парафенилендиамина,1 мл 5 Х-ного раствора железоаммониевых квасцов. Объем раствора доводятводой до метки; возникает слабая красно-фиолетовая окраска, Это объясняется малымколичеством добавляемогораствора парафенилендиамина.П р и м е р ы 2 и 3, В колбуна 25 мл помещают раствор 0,05 гтрипсина в 1 мл воды, далее растворнагревают щелочью, добавляют 1 млили 1,5 мл раствора парафенилендиамина, 1 мп 5 Х-ного раствора железоаммониевых квасцов, Объем раствора доводят водой до метки; возникает краснофиолетовая окраска. Оптические ппотности растворов с добавками 1 мл или1,5 мл раствора парафенилендиаминаиМеют одинаковое значение, 409932ускорения процесса, в исследуемую пробу вводят 50 Х-ный раствор гидроксида калия, термическую обработку ведут на водяной бане при 00 С в тече 5 ниемин, полученную смесь охлаждают, добавляют растворы парафеннлен."диамина и келезоаммониевык квасцов,а оценку результатов ведут по изменению окраски до появления красно-фномлетового окрашивания,1409932 Орисов оставитель Л, Б аехред М.Дрык Корректор А, Тя Редактор И. Касарда Заказ 3474 40 Подписноеого комитета СССРний и открытийаушская наб., д, 4 113 оизводственно-полиграфическое предприятие, г ул. Проектная,. Тираж ВНИИПИ Госуд по делам 035, Москва