Способ обработки спермы быка

(191 (11) 6 1 Р 7 / ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ тоб но Бюл,31 зоотехничут н, Б,Н,Аве Б,П,Сомлев куриных Пот е раэко-вет ндека- спермь сян БЦ) м сп 96 С ермупослеприваниястабиенност ССС 983 Ы Б ния к животия являеткой полие ее оплоОСУДАРСТВЕКНЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(54) СПОСОБ ОБРАБОТКИ СПЕР (57) Изобретение относится новодству. Целью изобретен ся стабилизация биологичес ноценности спермы и повышен дотворяющей способности. ранную сперму разбавляют средой. Содержание желтка яиц в разбавителе 4-5 мл. бавления в сперму добавля лин в дозе 1-10 ед. на 1 Обработанную таким образо хранят при 2 С или при -1 зквилибрации в течение 3- 2-4 С и последующего эамо в парах жидкого азота. Сп лизирует биологическую по спермиев, в рЕзультате че ется результативность осе жаютс я затраты желтка куриньх яиццели искусственного осеменения.абл.331499 Глюкоза, г 3,0 3,0 3,0 3,0 Натрий лимоннокислый, г 1,4 1,4 1,4 1,4 Желток куриныхяиц, мл 5,0 2,0 6,0 4,0 Спермосан,тыс.ед,75-90 75-90 75-90 75-90 Вода дистиллированная, мл 100 100 100 100 1 1Изобретение относится к способам обработки и хранения спермы и может быть использовано на станциях искусственного осеменения и госплемстанциях.Цель изобретения - стабилизация биологической полноценности спермы и повышение ее оплодотворяющей способности.П р и м е р 1. Свежеотобранную сперму разбавляют защитной средой и сразу после этого на каждый 1 мл спермы добавляют андекалин в дозе 1-10 ед. Обработанную таким образом сперму хранят при 2 С и при -196 С после эквилибрации в течение 3-4 ч при 2-4 С и последующего эамораживаВ табл, показано влияние различного содержания желтка куриных яиц на качественные показатели спермы. Сразу после разбавления защитной средой в опытные группы добавляют андекалин для инъекций в следующих количествах,1 една 1 мл спермы: 1(а); 5 (б); 10(в) .Раствор андекалина готовят непосредственноперед применением, растворяя содержимое флакона в дистиллированной воде (в одном флаконе 40 ед.)В табл,2 показано влияние различного содержания апдекалина на качественные показатели спермы.Биологическую полноценность спермы, обработанной предлагаемым и известным способами, оценивают по показателям подвижности спермиев,по утечке аспартат-трансаминазы (АсТ), по состоянию акросомы.Подвижность спермиев определяют согласно ГОСТУ в раздавленной капле ния в парах жидкого азота. Контрольные пробы, предназначенные для хранения при 2-4 и в196 С, разбавляют 5глюкозо-цитратно-желточной и лактозожелточно-глицериновой средами.Каждый эякулят делят на две про"бы, одну из которых сразу после разбавления обрабатывают андекалином,т,е. по предлагаемому способу, а другую - по известному способу. П р и м е р 2. Пробы спермы разбавляют защитной средой. Опытные пробы спермы, предназначенные для кратковременного хранения при 2-4 С, разбавляют защитной средой следующего состава: спермы под микроскопом в Проходящем свете при увеличении 100 х 180 раэ с использованием нагревательного стоолика при 40-41 С. Оценку подвижности спермиев производят по 10-балль ной шкале, Аспартат-трансаминазу определяют в плазме спермы после центрифугирования при 3 000 об/мин в те" чение 20 мин по Рейтману и френкелю с использованием набора химических 45 реактивов для определения активнос"ти АсТ и АлТ в сыворотке крови методом колориметрирования, который основан на изменении преломления света ,при боковом освещении раздавленной капли семени с помощью конденсора темного поля. В зависимости от состояния акросомы оптическая плотность ее изменяется и это обнаруживается по наличию или отсутствию ее светяконтура,П р и м е р 3. Опытные пробы спермы, предназначенные для длительного хранения при -96 С, разбавляют защитной средой следующего состава:11,5 Лактоза, гЖелток куриных яиц, мл 5,0Глицерин, мл 5,0Спермосан-З,5тыс.ед.Вода-дистиллированная, мл 100Контрольную и опытную пробы спермы, предназначенные для длительного хранения, после разбавления защитной средой и обработки андекалином в дозе 1 ед, охлаждают в холодильнике до 2 С в течение 4 ч, после чего эамораживают в виде гранул0,2 мл на фторопластовой пластинев парах азота и хранят в жидком азоте при -196 С.Биологическую полноценность спермы, обработанной известным (контроль) и предлагаемым (опыт) способами, оценивают по подвижности, посостоянию акросомы (акроскопическийметод) и по оплодотворяемости после 25ректального исследования коров,В табл.З дана биологическая полноценность спермы, обработанной известным и предлагаемым способами. 50,0 30 Таким образом, данные, приведенные в примерах, свидетельствуют отом, что по сравнению с известным,являющимся базовым способом, обработ.ка спермы предлагаемым способом35улучшает подвижность спермиев (вдень получения на 9,07., через 3 дняхранения при 2 С на 12,57., табл.2,а после замораживания-оттаивания на207., табл.З) . Процент спермиев с целой неповрежденной акросомой такжевыше в предлагаемом способе как прихранении при 2-4 С (в день получения на 987 через 3 дня храненияна 1863 табл.2), так и после эамораживания-оттаивания (на 24,67.,табл.3), что свидетельствует о том,что обработка спермы предлагаемымспособом способствует замедлению деструктивньм процессов, неизбежныхпри хранении спермы вне организма,т.е. способствует стабилизации биологической полноценности спермы,Наблюдается также упрочнение цитоплаэматической мембраны спермиев, чтопроявляется не только в сохранении акросомы, но и в малой утечке фермента АсТ (в день получения на 507., через 3 дня хранения на 1007., табл.2),которая выполняет важную роль в сохранении контроля над моторикой спермиев. И наконец, оплодотворяемостькоров при использовании спермы,обработанной предлагаемым способом,посравнению с известным повышается на13,87,В табл. 4 и 5 представлены данныео биологической полноценности спермыв зависимости от дозы андекалина иколичества желтка в разбавителе.Как следует из табл, 4 и 5 наилучший эффект достигается при строгоопределенном соотношении андекалинаи желтка.Как видно иэ данных, обработкаспермы предлагаемым способом даетдвойной практический эффект: во-первых, стабилизирует биологическуюполноценность спермиев, замедляятем самым деструктивные процессы,неизбежные при хранении спермы внеорганизма, и упрочняет цитоплаэматическую мембрану спермиев, что способствует сохранению акросомы, которая является носителем ферментов и антигенов, участвующих в оплодотворении, и малой утечке фермента аспартат-трансаминазы, которая выполняетважную роль в сохранении контролянад моторикой спермиев, в результате повышается результативность осеменения во-вторых, позволяет значительно снизить (с 20 до 57 ) затратыценного и дорогого пищевого продукта - куриных яиц на цели искусственного осеменения,Формула изобретенияСпособ обработки спермы быкавключающий ее разбавление средой, содержащей желток куриного яйца, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью стабилизации биологической полноценности спермы и повышения ее оплодотворяющей способности, сперму разбавляют средой, содержащей 4-5 мл желтка, а после разбавления к сперме добавляют андекалин в дозе 1-10 ед, на1 мл спермы.1331499 Т а б л и ц а 1 Через 3 дня хранения Через 1 ч после получения Среды с разным количеСпермии с целойакросомой, 7. Подвижностьспермиев Спермии с целой акросомой, 7. Подвижностьспермиев ством желтка,мл 75,9 + 2,2 80,3 + 2,0 82,1 + 2,9 78,5 + 3,3 75,6 1 31 7,2 + 0,33 45,0 1 2,03 Таблица 2е ю Температура хранения спермы 2 С а анде ФЬСпернни с целойакросомой,Способ обработки спермычерез 3 дняхранения через 1 чпосле лучения лучення получения Ю Ф Е 0,125 1 0,004,1331499 Таблица 3 Температура хранения спермы - 196 С Показатели До замораживания После оттаи- вания Способобработки 5,4 + 0,19 4,5 ф 0,22 8,3 ф 0,22 7,6 + 0,31 Подвижностьспермиев,балл Предлагаемый Известный 20 9,2 Разница 7 Р с О,О Р с 0,1 Достоверность 55,6 + 2,346,41,85 79,2 + 3,3 73, 1 2,7 Предлагаемый Известный 24,6 Разница, 7 16,2 Р СО 01 Р0,01 Достоверность 85,2 Оплодотворяемость коров, 7 Предлагаемый 71,4 Известный 85,2 Предлагаемый Известный 71,4 Таблица 4 Подвижность балл Концентрация андекалина в ГЦЖ-среде вд/мл спермы Количестножелтка через 1 ч черездняпосле по- хранениялучения в среде,мл 8,00,17 9,0 + 0,17 9,0 + 0,158,5 + 0,16 4,5 + 0,2 7,5 + 0,2 0 (Контроль) 20 7,40,15 8,0 + 0,159,0 ф 0,29,0 + 0,11 Спермии с целой акросомой, 7Отелились, 7. 9,0 + 0,19 7,0 + 0,14 7,4+ 013 4,0 ф 0,22 7,0+ 0247,0 ф 0,1810 1331499 Продолжение табл.4 Подвижность, балл Количествожелтка Концентрация андекалина вГЦЖ-среде,вд/млспермы через 3 дняхранения через 1 чпосле получения в среде,мл 6,0+ 0,16 7,3 + 0,14 0 (Контроль) 20 5,0+. 0,19 7,0 + 0,12 7,5 + 0,13 10 7,0 + 02 0 (Контроль) 20 7,50,14 Таблица 5 и е ееПроцент спермиев с неповре)кдениой акро- сомой Количество)келтка Концентрация аиде"квлиив вГЦВ-средевд,/млспермы Утечка АсТ, мкмоль в сре де,мл череэ 3 дняхранения череэ 1 ч после почереэ 3 дняхранения череэ 1 чпосле получения лучения 0)ЭТ 0,004 0,11 Т 0,003 80,0 Т 1,9 80,5 Т 2,0 80,5 Т 2,4 81,0 Т 2,2 0)09 Т 0,002 0,131 Т 00050,08 Т 0002 0,12 Т 0,004 0,08+ 0,006 0,18 Т О,ООЭ 0,12+ 0,004 0,23 Т 0,006 О (Контроль) 20 74,4 Т 2,2 2 0 (Контроль) 20 10 О, 12 Т О, 004 О, 18 Т О, 002 0,125+ 0,005 0,25 Т 0,002 73,0 + 1,65 44,0 Т 1,2 0 (Контроль) 20 Внц 11 ПИ Заказ 3749/4 Тираж 594 Поддисное Произв,-полигр. пр-тне, г, Ужгород, ул. Проектная, 4