Способ определения стадий адапта-ционного синдрома у животных

щ 8523 3 ОЛИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Сока Советских Социалистических Республик(22) Заявлено 01.12.77 (21) 2549814/30-15 М КлзА 61 В 10/О 6 01 Х 33/1 рисоединением зая Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытий23) Приоритет43) Опубликовано 07,08.81, Бюллетень45) Дата опубликования описания 07.08.81(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИАДАПТАЦИОННОГО СИНДРОМА ДИЙВОТНЫХ еричеказыИзобретение относится к области биологии, в частности к патологической физиологии, токсикологии, и может быть использовано для определения стадий адаптационного синдрома при стрессовых ситуациях у 5животных.Известны экспериментальные способыопределения стадий адаптационного синдрома по морфо-физиологическим критериям состояния внутренних органов и систем 1 Оорганизма 1.Сущность известных экспериментальныхспособов определения стадий адаптационного синдрома сводится к изучению натрупном материале следующих морфо-физиологических параметров состояния внутренних органов и систем. В стадии тревогиотмечают резкое расширение и переполнение кровью синусоиды между тяжами клеток пучковой зоны, в клетках пучковой зоны редуцируются липиды и аскорбиноваякислота, в цитоплазме клеток корковоговещества надпочечников отмечают накопление РНК,Стадия резистентности характеризуетсяувеличением объема коркового слоя надпо.чечников за счет гиперплазии железистыхклеток,В пучковой зливаются липидь оие надпочечников иакап1, сначала во внутреннем 30 слое, а затем в центральных и периф ских отделах, Пучковая зона вновь о вается насыщенной липидами.В цитоплазме клеток пучковой зоны возможно содержание липидов большее, чем до стресс-реакции.В стадии истощения отмечают глубокие дистрофические изменения, которые приводят к появлению участков цитолиза в корковом веществе, которые являются результатом гиперфункции коры надпочечников, вызванной чрезмерной стимуляцией АКТГ,Определение вышеизложенных стадий адаптационного синдрома производят после воздействия на животных химического, биологического или других видов стресса, после чего через каждые 30 - 60 мин проводят забой животных и по появлению морфологических изменений судят о стадии стресс-реакции. Наиболее близким к предлагаемому является способ определения стадий адаптационного синдрома, основанный на том, что экспериментальную группу животных подвергают стрессовому воздействию токсиче. ским агентом и затем, после поочередного забоя животных путем морфологического изучения их органов, определяют стадии адаптационного синдрома 2.3Так, в стадии тревоги в лимфоидных органах отмечают уменьшение количества клеток, их пролиферацию, лизис клеток и их миграцию, В костном мозге наблюдают уменьшение количества зрелых гранулоцитов, увеличение количества лимфоидных органов, увеличение количества КОЕ, (колониеобразующих единиц), активизацию миело- или эритропоэза.В стадии резистентности отмечают восстановление лимфоидных органов и переходящую гиперплазию костного мозга.В стадии истощения наблюдают вторичную инволюцию лимфоидных органов и гиперплазию костного мозга.Недостатком способа является невозможность определения в ходе эксперимента всех стадий адаптационного синдрома на одном животном. Для определения стадии тревоги, а также стадий резистентности и истощения необходимо проводить забой животных с целью изучения изменений его внутренних органов, по которым судят о наступлении какой-либо стадии адаптационного синдрома. Кроме того, способ является трудоемким, так как требуют анализа большого морфологического материала, а также дорогостоящим вследствие необходимости для проведения эксперимента большого количества животных.Цель изобретения - повышение точности определения стадий адаптационного синдрома в ходе эксперимента на живых животных, ускорение процесса проведения эксперимента, а также снижение его стоимости.Для этого в качестве токсического агента используют дихлорбутен, а при анализе патоморфологических изменений устанавливают динамику количества эозинофилов.Динамику количества эозинофилов определяют через каждые 2 - 3 ч. При определении стадии адаптационного синдрома используют животных, у которых количество эозинофилов в 8 и 17 ч суток равно 220 - 380 кл/мм крови.На фиг. 1 и 2 изображены графики, поясняющие предлагаемый способ.П р и м е р 1. Для проведения эксперимента отбирают б животных - самок белых беспородных крыс весом 200 - 250 г, с числом эозинофилов в периферической крови в 8 и 17 ч, равным 220 - 380.После отбора каждому животному вводят по 310 мг/кг дихлорбутена и затем через каждые 3 ч у каждого животного из хвостовой вены берут кровь и подсчитывают число эозинофилов в 1 мм крови в камере Горяева. После подсчета устанавли. вается динамика числа эозинофилов у этих животных (см. табл. 1). На основе усредненных данных табл. 1 для более наглядного и точного определения стадий адаптационного синдрома строят график (см. фиг. 1), на котором стадия тревоги соответ. о 15 20 95 зо 35 4 О 45 50 55 бо 65 ствует периоду от начала первого падения эозинофилов в количестве более 500/, от их общего числа до момента появления их первого максимального количества, Исследуют контрольную группу животных в количестве 9 б шт., подобранных по тем же данным, что и первая группа,Во всех случаях кровь для исследования берут из хвостовой вены. После отбора одновременно каждому из двух групп животных однократно вводят по 310 мг/кг дихлорбутена.После этого через каждые 3 ч подсчитывают количество эозинофилов в периферической крови обеих групп животных.При этом, после подсчета количества эозинофилов у контрольной группы животных, проводят забой по б животных через каждые 3 ч.Из забитых животных извлекают надпочечники, взвешивают, определяют их объем и проводят морфологические и гистохимические исследования, а именно определяют величину зон надпочечников, их морфологию, количество аскорбиновой кислоты, РНК, количество липидов, Все исследования экспериментальной и контрольной групп животных проводят до совпадения колебаний количества эозинофилов в периферической крови с их суточным биоритмом.При анализе полученных данных по коррелятивной зависимости нарушения биоритма количества эозинофилов в периферической крови от морфологического и гистохимического состояния надпочечников этих животных при химическом стрессе, вызванном введением в организм хлоропрена и дихлорбутена, и литературных данных о состоянии надпочечников в различные стадии стресса, приходим к выводу, что стадии тревоги соответствует период между началом первого падения числа эозинофилов в количестве более чем на 50% от их общего числа и концом увеличения эозинофилов до первого максимального их числа в периферической крови. Этот период на графике (см. фиг. 1) расположен между точками 1 и 4, фазе же шока стадии тревоги соответствует период от начала падения числа эозинофилов до момента начала первого их максимального увеличения (период фазы шока расположен между точками 1 и 3), а фазе антишока соответствует период между началом первого максимального увеличения числа эозинофилов и его концом (до начала падения их числа после максимального увеличения). На графике период фазы антишока расположен между точками 3 и 4 (см. фиг. 1),Стадии резистентности соответствует пе. риод между началом падения числа эозино. филов после первого их максимального увеличения с последующими эозинопеиия. ми и эозинофилиями до момента совпаде.852313 Динамика количества эозинофилов в1 мм крови у больных крыс, подвергнутыхдихлорбутоновой интоксикации, приведенав табл. 1. При проведении морфологиче 5 ских и гистохимических исследований состояния надпочечников установлено, что встадии тревоги в надпочечниках отмеченорезкое расширение и переполнение кровьюсинусоидов между тяжами пучковой зоны,10 а в клетках пучковой зоны редуцируютсялипиды и аскорбиновая кислота,ния их числа с суточным биоритмом количества эозинофилов в периферической крови (на графике период фазы резистентности расположен между точками 4 и 5).Стадии истощения соответствует период с момента полного исчезновения эозинофилов в периферической крови до начала их появления после введения,в организм хлоропрена. Этот период расположен на графике (см. фиг. 2) между точками 2 и 3. Таблица 1 Количество эозинофилов в 1 ммз крови крыс за время, в часах интоксикации39 12 18 21 0 3 15 30 Зб 42 48 Динамика количества эозинофилов в 1 мм крови у крыс при хлорпреновой интоксикации приведена в табл, 2. Таблица 2 Количество эозинофилов в 1 ммз кр ови крыс за время,в часах интоксикациикрыс 22 1 О 24 27 ЗО 33 Зб 39 13 16 19 Морфометрия надпочечников крыс при в табл. 3. В цитоплазме клеток корковогодихлорбутеновой интоксикации приведена 15 вещества надпочечников накапливается Т абл ица 3 Время, в часах интоксикации Морфометрические характеристики% суданофобной зоны к,всему надпочечникуПлотность липидов, мг % Плотность аскорбиновой кислоты пучковой зоны, мг %Количество рНК пучковой зоны,мг% 35+3,2104+7 35,3+ О,б 144+6852313 ла во внутреннем слое пучковой зоны, а затем и в цитоплазме клеток центральных и периферических отделов.Динамика изменения морфометрии над почечников крыс при хлорпреновой интоксикации приведена в табл, 4. Таблица 4 Время, в часах интнксикации Морфометрические характерис- тики 420 24 42 63 58 53 60 42 41 47 Вес надпочечников, г 24 + 0,2248,30,63 14 0,1811,7 0,43 20 0,09 . 40 0,22 20 0,45 170,49 170,81 210,18 Плотность липидов, мг % 30 0,54 32,30,77 220,59 59,30,49 Плотность аскорбиновой кислоты, мг % Что касается колебания количества эозинофилов в стадии резистентности, то оно соответствует началу падения числа эозинофилов с первого максимального их чис О ла с последующими эозинопениями и эозинофилиями до совпадения их числа с суточным биоритмом (см. табл. 3 и фиг, 1). Если повреждающее воздействие было не столь сильным, как при введении дихлорбутена в 15 дозе 310 мг/кг веса, то у животных возникает стадия резистентности, а в более поздний период второй стадии вид и функция их органов практически возвращается к норме, Но если действие повреждающего 20 агента более сильное, а именно такое, как у хлоропрена в дозе 410 кг/кг, то возникает стадия истощения, которая характеризуется резким уменьшением коркового вещества надпочечников, пучковой зоны, а также ве са надпочечников. В корковом веществе отмечаются глубокие дистрофические изменения с появлением участков цитолиза, В пучковой зоне резко уменьшается количество липидов, аскорбиновой кислоты (см. 30 табл, 4 и фиг. 2). В крови отмечают полное исчезновение эозинофилов.По табл. 4 время 0 - 27 соответствует стадии тревоги, причем фазе шока соответствует время 0 - 24, а фазе антишока - 35 24 - 27,Стадии резистентности по табл. 3 соответствует время с 27 по 48, стадии же истощения - с 4 по 24.Приведенные примеры экспериментов на 40 группах опытных и контрольных животных РНК, что свидетельствует о стадии тревоги при проведении стресс-реакции, О стадии резистентности свидетельствуют следующие морфологические показатели надпочечников: увеличивается их вес, объем коркового слоя, накапливаются липиды сначаподтверждают, что указанные пределы изменений числа эозинофилов в периферической крови животных являются достоверными для быстрого и точного определения всех стадий адаптационного синдрома. Формула изобретения 1. Способ определения стадий адаптационного синдрома у животных, преимущественно крыс, включающий введение в организм токсического агента и последующий анализ патоморфологических изменений, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения стадий адаптационного синдрома, в качестве токсического агента используют дихлорбутен, а при анализе патоморфологических изменений устанавливают динамику количества эозинофилов.2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что динамику количества эозинофилов определяют через каждые 2 - 3 ч,3. Способ по п. 1, отлич а ющийся тем, что для определения стадий адаптационного синдрома используют животных, у которых количество эозинофилов в 8 и 17 ч суток равно 220 в 3 кл/мма крови.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1. Войткевич А. А. Современные вопросы эндокринологии. М., 1963, с. 240,2. Горизонтов П. Д, Общая характеристика и значение реакций стресса. Вестник АМН СССР, 1975,8, с. 81 - 83.652313 ьф 7 Р фи 1 Составитель А. Макар ехред А. Камышник едактор Т. Колодцева ректор О. Тюрина пография, пр. Сапунова, 2 Заказ 1563/2 Изд.464 Тираж 694 ПодписиНПО Поиск Государственного комитета СССР по делам изобретений н открыти113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5