Противоаллергический препарат

(53)5 А 61 К 37/02 Комитет Российской Федерации по патентам и товарным знакам(57) Использование:медицина. фармакология.Сущность изобретения; гексапептид формулы Тир-Д-Ала-Фен-Лей-Глю-ОН применяется в качестве противоаллергического препарата, Препарат обладает более высокой эффективностью, 3 табл.(71) Институт питания АМН СССР, Всесоюзный научный центр экспертизы лекарственных средств(72) Мазо В,К., Кржечковская В,В., Марокко И.НВиноградов В.А., Полонский В,М. (73) Полонский В.М,ЬЭ О О О О Г) Изобретение относится к области медицины, а именно к лекарственным средствам, применяемым в аллергологии, и может найти применение для лечения и профилактики аллергических реакций.Проблема разработки новых эффективных лекарственных средств для лечения и профилактики аллергических заболеваний, в частности пищевых аллергий, продолжает оставаться достаточно актуальной. В настоящее время отмечается устойчивая тенденция к повышению частоты аллергических заболеваний, различными формами которых страдает до 25(, населения. При этом наблюдается и усилие тяжести аллергических реакций, которые становятся поливалентными (Маслинский Ц. Патогенеэ аллергических процессов в клинике и эксперименте. ММедицина, 1979, с, 132 - 140; Лопаткин Н,А Лопухин Ю.М. Эфферентные методы в медицине. М.: Медицина, 1988, с.6-21). Повышение частоты и усилению тяжести пищевых аллергий способствует широкое применение всевозможных химических веществ в сельском хозяйстве и пищевой промышленности, нивелировка сезонных и климатогеографических особенностей пита ния различных групп населения, а также недостаток белковых пищевых продуктов в рационе у 75 населения во всем мире (Маслинский Ц. Патогенез аллергических процессов в клинике и эксперименте. - М.: Медицина, 1979, с. 132 - 140; Покровский А. Метаболические аспекты фармакологии и токсикологии пищи, - М.: 1979, с. 183; ДжДик. Иммунологические аспекты инфекционных заболеваний. - М,: Медицина, 1982, с,574).В настоящее время для лечения различных аллергических заболеваний широко применяются различные антигистаминные препараты, Типичным представителем этого класса лекарственных средств является супрастин (гидрохлорид й-диметиламинозтил-й-(парахлорбенэил)-аминопиридина), Супростин характеризуется не только антигистаминными свойствами, но применяется также в острых случаях анафилактицеских реакций, Высшие дозы супрастина для взрослых при применении внутрь составляют: разовая - 25 мг, суточная - 75 мг, в отдельных случаях - до 150 мг. При внутри- мышечном применении разовая и суточная дозы супрастина составляют 20 и 40 мг со 2000119Данный препарат является синтетическим аналогом эндогенных опиоидных пептидов. Представители этого класса соединений обладают выраженным иммуномоделирующим действием (Мог 1 еу З.Е.ес в 1 йеигорерсбез: сопбцссогз о 1 йе 1 сптцпе огсЬезсга. Юе Яс 1, 1987, ч.41. р. 527-544).В то же время в доступной литературе отсутствуют сведения об использовании эндогенных опиоидных пептидов и их синтетических аналогов в качестве 50 55 чответственно (Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М,: Медицина, 1984, ч,1,с.307 - 320; Клюев М,А. Лекарственные средства, применяемые в медицинской практикео СССР, - М,: Медицина, 1989, с. 369). По 5сравнению с другими противоаллергическими препаратами (димедрол, дипразин, таоегил и т.д.) супрастин отличается меньшимспектром побочных реакций и противопоказаний. В то же время оказываемый супрастином седатионый эффект,проявляющийся в сонливости и общей слабости, сграничивает его использование улиц, профессиональная деятельность которых требует быстрой доигательной и психическОй реакции.Необходимо отметить, что среди многочисленных препаратов, используемых длялечения аллергических заболеваний, отсутствуют лекарственные средства, являющиеся производными и аналогами эндогенныхбиологических актионых соединений.Целью изобретения является созданиепрепарата для лечения и профилактики (ввиде пищевой добавки) оллергических реакций, обладающего повышенной активностью, низкой токсичностью и невызывающего нежелательных побочных реакций.Поставленная цель достигается применением в качестве средства для подавленияаллергических реакций гексапептида ТирД-Ала-Гли-фен-Лей-Глю-ОН.Синтез предлагаемого препарата производился из двух Фрагментов, полученных 35методом последовательного наращиваниявминокислотной цепи. Препарат предстаоляет собой порошок белого цвета, хорошорастворимый в дистиллированной воде, физиологическом растворе, спирте и не растворимый о эфире, этилацетате, бенэоле,гексане, Применение препарата не сопровождалось изменениями в клеточном составе крови, основных гемодинамическихпоказателях и поведении экспериментальных животных. При изучении острой токсичности препарата ЛД 50 составляет 250мг/кг,противоаллергических лекарственных препаратов,Изучение противоаллергического действия заявляемого препарата о сравнении с супрастином было проведено на 659 морских свинках самцах с массой тела 250-300 г. Пищеоую сенсибилизацию животных осуществляли с помощью мегода, разработанного в институте питания АМН СССР (Шатерникоо В.А., Морокко И,Н., Пятницкий Н.Н. и др, Экспериментальное воспроизведение пищевой анафилаксии, Вопросы питания, 1982, 1+ 2, с. 27-31). В качестве пищевых аллергенов использовали куриный ооальбумин (ОВА) иги цельное пастеризованное коровье молоко (ЦПКМ). Сенсибилиэацию животных с помощью ОВА(50 мг) или ЦПКМ (3 мл) проводили о течение 3 дней, Через 7 дней состояние сенсибилизации у жиоотнь,х оценивали путем воспроизведения активного анафилактического шока (ААШ), который вызывали внутривенным введением разрешающей дозы гомологичного белка: 5 мг ОВА о 0,5 мл физиологического раствора или 0,5 мл ЦПКМ, содержащего 7 мг белка, ЦПКМ предварительноо цетрифугировали и для внутривенного введения испольэовали его фракцию, свободную от липидоо и клеточных элементов. Тяжесть ААШ оценивали по уровню летальности и числу животных с судорожными проявлениями, а также по величине анафилактическго индекса (ЧЧе 191 е Вl., Сосагапе СОхоп 1=АпарЬуассоцепс ргорегс 1 ез оФ зоЬЫе апсцеп-апс 1 Ьобу соврехез и йе с 1 и 1 пеа-р 1 цз апб гаЬЫсз, Иттопооцу, 1960, ч.85, р. 469-477),Предлагаемый препарат (10 и 100 мкг/кг) или супрастин (100 и 1000 мкг/кг) вводили морским свинкам ежедневно внутрибрюшинно в течение трех дней в физиологическом растворе или внутрь в физиологическом растворе или ЦПКМ также в течение трех дней, При выборе доз супрастина исходили из того, что доза 100 мкг/кг близка к его максимальной разовой дОзе для человека.В связи с тем, что гистамин является основным медиатором аллергических реакций немедленного типа и воспаления (Юасп О., Н 1 зсав 1 п аз Мебасог бег аИегц 1 зсЬеп ВеаИ 1 оп, АИегцо 1 оц 1 с, 1985, Ьб, 5, з.47-50), оценивали, кроме того, влияние препарата и супрастина на чувствительность к гистамину, с целью чего предварительно определяли ЛД 50 гистамина по форМуле Г.Н,Першина(Кудрин А.Н Пономарева Г.Т, Применение математики в экспериментальной и клинической медицине. - М,: Медицина, 1967, с,312). В этом эксперименте40 45 50 55 исследуемые препараты также вводились внутрибрюшинно и внутрь в течение трех дней до гистамина.Изучение влияния предлагаемого препарата и супрастина на развитие пищевых аллергических реакций было проведено в двух сериях экспериментов. В первой серии препараты вводились одновременно с проведением пероральной сенсибилизации ОВА и ЦПКМ. Во второй серии препараты вводились уже после окончания введения аллергонов сенсибилиэированным животным в течение трех дней перед воспроизведением ААШ.Во всех экспериментах контрольным группам животного вместо предлагаемого препарата и супрастина внутрибрюшинно или внутрь вводились физиологический раствор или ЦПКМ.Определение достоверности различий между группами по тяжести ААШ и гистаминового шока проводили по методу углового преобразования Фишера (Гублер Е,В. Вычислительные методы анализа и распознавание патологических процессов. - М., Наука, 1978, 365 стр.),В табл. 1 представлены данные о влиянии предлагаемого препарата и супрастина, применяемых в период сенсибилизации, на развитие тяжести пищевых аллергических реакций, вызываемых ОВА и ЦПКМ,При сенсибилизации ОВА одновременное внутрибрюшинное введение предлагаемого препарата приводило к зависимому от дозы снижению летальности и частоты судорожных проявлений при ААШ. Уже в дозе 10 мкг/кг препарат достоверно снижал частоту судорожных проявлений (с 82,2 до 62,5). В дозе 100 мкг/кг препарат вызывал выраженное и статистически значимое снижение летальности (в 3,2 раза) и частоты судорожных проявлений ААШ (в 2,2 раза). При этом анафилактичекий индекс снижался на 46,7, Супрастин в 10 раз более высокой дозы также достоверно снижал летальность и частоту судорожных проявлений ААШ, Однако если по влиянию на летальность (снижение в 2,9 раза) эффективность супрастина приближалась к эффективности предлагаемого препарата, то по влиянию на частоту судорожных проявлений супрастин значительно уступал последнему. При этом анафилактический индекс снижался под влиянием супрастина в дозе 1000 мкг/кг лишь на 27,4. При использовании супрастина в дозе 100 мкг/кг он снижал анафилактический индекс всего на 176, т,е. еще более резко уступал по эффективности предлагаемому препарату, Добавление препарата в ЦПКМ эначитель 5 10 15 20 25 30 35 но ослабляло выраженность аллергических реакций при сенсибилизации последним. При этом уже в дозе 10 мкг/кг препарат достоверно снижал частоту судорожных проявлений ААШ, В дозе 100 мкг/кг заявляемый гексапептид снижал летальность и частоту судорожных проявлений в 2,2 и 2,5 раза соответственно,В табл. 2 представлены данные о влиянии предлагаемого препарата и супрастина, применяемых после окончания сенсибилиэации, на развитие тяжести пищевой аллергической реакции, вызываемой ОВА.В. этих экспериментальных условиях препарат обладал выраженным противоаллергическим действием как при внутрибрюшинном, так и при пероральном введении. При внутрибрюшинном введении препарат уже в дозе 10 мкг/кг обладал выраженным противосудорожным действием, хотя вызываемое им снижение летальности при ААШ не являлось статистически значимым, В дозе 100 мкг/кг препарат при внутрибрюшинном введении достоверно снижал как летальность, так и часготу судорожных проявлений(в 2,4 и 2,1 раз соответственно), При пероральном введении препарат не влиял на тяжесть ААШ в том случае, если он вводился в физиологическом растворе, В то же время при пероральном введении в ЦПКМ препарат оказывал даже более выраженное нротивоаллергическое действие, чем при внутрибрюшинном введении. При этом он снижал летальность и частоту судорожных проявлений ААШ в 3,2 и 3,4 раза соответственно, а анафилактический индекс на 63,20, Одно ЦПКМ даже несколько увеличивает частоту судорожных проявлений ААШ при вызываемой ОВА сенсибилизации. В отличие от предлагаемого препарата супрастин в этих экспериментальных условиях усиливает тяжесть проявлений ААШ как при внутрибрюшинном, так и при пероральном в веден ии.В табл. 3 представлены данные о влиянии предлагаемого препарата и супрастина на чувствительность морских свинок к гистаминовому шоку, вызываемому внутривенным введением ЛД 50 гистамина,При введении внутрибрюшинно препарата в дозах 10 и 1090 мкг/кг вызвал достоверное снижение летальности при введении животным ЛД 50 гистамина. При внутрибрюшинном введении не отмечено зависимость антигистаминного эффекта препарата от дозы, Максимальный эффект наблюдался при введении препарата в дозе 10 мкг/кг, в которой его терапевтическая эффективность была сходна с эффективностью супрастина в дозе 1000 мкг/кг, т.е, предлагаемый пре2000119 тв 0 личв 1 контрольными группэлия с в 05фР0 Разли парат был в 100 раз активнее супрастина, При пероральном введении супрастин не оказывал антигистаминного действия. В то же время предлагаемый препарат в дозе 100 мкг/кг при пероральном введении в цПКМ снижал уровень летальности более чем в 2 рава; При пероральном введении в физиологическом растворе препарат не обладал антигистаминной активностью. Однако ЦПКМ также не влияло на тяжесть вызываемого гистамином шока.Таким образом, предлагаемый препарат вызывает выраженное повышение толерантности животных к ААШ и гистамину. Прортивоаллергическое действие препарата проявлялось как при его одновременном введении с аллергенами, так и при введении уже на фоне развившейся сенсибилизации. При одновременном введении с аллергенами препарат и супрастин сходным образом преотвращали летальность при ААШ. но по активности он в этом случае приблизительно в 10 раз превосходил супрастин. Кроме того, по сравнению с супрастином препарат значительно более эффективно блокировал развитие судорожных проявлений ААШ, В экспериментальной модели гистаминового шока препарат в 10-100 раз превосходил супрастин по активности, В отличие от супрастина. который не оказывал терапевтического действия в условиях уже развившейся сенсибилизации, предлагаемый препарат и в этих условиях обладал высокой противоаллергической активностью. Важнейшим до стоинством препарата является его высокаяпротивоаллергическая эффективность при пероральном введении в молоке, что позволяет существенным образом расширить возможности его применения.10 Результаты проведенных исследованийпозволяют сделать вывод, что предлагаемый препарат может быть успешно применен для лечения и профилактики (в виде пищевой добавки) аллергических реакций, 15 прежде всего пищевого генеза. Разовая доза препарата может составлять 1-10 мг. Для инъекционного введения препарат может выпускаться в ампулах и флаконах. где в качестве растворителя могут быть испольэо ваны дистиллированная вода. Физиологический раствор или 5-ный раствор глюкозы, Для перорального применения препарат может выпускаться в таблетках или капсулах, в которых в качестве наполни теля возможно использование сухого молока или его ингредиентов.Формула изобретения Применение гексапептида формулыТир-Д-Ала-Гли-Фен-Лей-Глю-ОН в качестве 30 противоаллергического препарата.