Средство для снижения агрегации тромбоцитов

Н 2 К-С - С - ОННч-О сн=снН 2-С СН (1 15), сн-сн ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССР(21) 4445509/14 (22) 18.04,88 (46) 15;08.93. Бюл, М 30 (71) 2-.й Московский государственный инсти. тут им.Н,И.Пирогова, Научно-исследова,: тельский физико-химический институт (72) М,А.Мурина, В.И.Сергиенко и Д.И,Ро- щупкин (73) М.А,Мурина, В,И.Сергиенко и Д.И.Рощупкин (56) В,И.Метелица, Справочник кардиолога по клинической фармакологии, М 1987,293-294,Изобретение относится к медицине., в частности к лекарственным веществам, воздействующим на систему крови, а именно к веществам, снижающим агрегацию тромбоцитов.Цель изобретения - изыскание отечественного лекарственного вещества, по эффективности не уступающего тренталу.Эта цель достигается тем, что для ослабления процесса агрегации тромбоцитов и стимуляции дезагрегации агрегированых тромбоцитов используется соединение; относящееся к Й-хлорпроизводным природных Омино- и иминокислот:й-хлораминокислоты общей формулы де й обозначает Н(1.1), СНЗ (1.2),2(54) СРЕДСТВО ДЛЯ СНИЖЕНИЯ АГРЕГАЦИИ ТРОМБОЦИТОВ(57) Изобретение относится к медицине, в частности к лекарственным веществам, воздействующим на систему крови, э именно к веществам, снижающим агрегацию тромбоцитов. Предлагается использовать Й-хлорпроизводные амино- и иминокислот в качестве средства для снижения агрегации тромбоцитов, 3 табл,СН-СН 2-СНз 0 Й 1 СН СН 2СНзСН 2-ОН (1.7) сн сн ОНОгде 81 обозначает Н(2,1) или ОН (2,2).На фиг,1 представлены типичные кинетические кривые агрегации тромбоцитов кролика в контроле и при дезагрегирующем действии хлораланина; на фиг.2 - типичные кинетические кривыв АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов человека при действии хлораланина.Изобретение поясняется следующими конкретными примерами.П р и м е р 1. й-Хлор- а -аланин(И-хлораминопропионовая кислота) был приготов 10 15 20 лен следующим образом;(1) готовили раствор аланина в физиологическом растворе в концентрации 200 мМ путем. растворения 0,178 г в 10 мл 0,9 ораствора хлористого натрия; . 25(2) при интенсивном перемешивании к 18 мл гипохлорита натрия в концентрации 200 мМ добавляли 2,2 мл полученного раствора (1). При этом молярная концентрация аминокислоты превышает концентрацию гипохлорита примерно на 10%.Выход М-хлор- а -аланина контролировали спектрофотометрически.В опытах исследовалась обогащенная тромбоцитами плазма (ОТП) крови кролика. 35 Для получения ОТП кровь, взятая из краевой вены уха кролика, смешивалась с 3,8% раствором цитрата натрия, приготовленном на физиологическом растворе, в соотноше- . нии 9;1 по объему, затем центрифугирова лась при 100-200 ц в течении 20 минут при комнатной температуре, Супернатант, представляющий собой ОТП, использовался в дальнейшей работе после 1 часовой инкубации при комнатной температуре, 45 Бремя работы с ОТП данного выделения не превышало 4 часов с момента забора крови,Агрегация тромбоцитов вызывалась добавлением аденозиндифосфата (АДФ) и регистрировалась турбидиметрическим 50 методом Борна, После введения индуктора агрегации светопропускание образцов ОТП возрастает за счет их агрегации. Количественным показателем способности тромбоцитов к агрегации служила разница 55 светотпропускания (Л Т) образца до и после достижения максимальной агрегации; в дальнейшем будем называть эту величину степенью агрегации: й-Хлораланин добавляли в объеме О,1 мл на 1 мл ОТП при ее интенсивном перемешивании. При введении И-хлоранилина в ОТП (примерно эа 1 мин до АДФ) агрегация тромбоцитов ослабляется,Противоагрегационное действие И-хлораланина усиливается при возрастании его концентрации; степень агрегации тромбоцитов снижалась соответственно примерно с 80 до 20 опри повышении конечной концентрации хлораланина от 0,25 до 1 мМ (табл.1),Аналогичным действием обладает йхлор- ф -аланин,На фиг.1 представлены типичные кинетические кривые агрегации тромбоцитов, индуцируемой 50 мкМ АДФ (стрелка 3 указывает момент введения индуктора), а обогащенной тромбоцитами плазме кролика, По оси ординат - изменение светопропускания (Т, в относительных единицах), По оси абсцисс - время (т, мин).Хлораланин в конечной концентрации 1 мМ, введенный в ОТП кролика после полной агрегации клеток (этот момент указан стрелкой 5), оказывает сильное дезагрегирующее действие(кривая 2). В контрольный образец ОТП (кривая 1) в момент полной агрегации тромбоцитов (стрелка 4) добавлялся 0;1 мл физиологического раствора.П р и м е р 2. По способу, описанному в примере 1, получали М-хлорглицин. Это соединение испытывалось на обогащенной тромбоцитами плазме крови кролика, методом, описанным в примере 1.Введение Й-хлорглицина в концентрации 1 мМ за 1 мин до введения АДФ в ОТП вызывает ингибирование агрегации тромбоцитов. Степень агрегации составляет 3 + 0,6 по отношению к контролю (в контрольные образцы ОТП вводился глицин в конечной концентрации 1 мМ), В используемой концентрации сам глицин не вызывает изменения агрегации тромбоцитов,П р и м е р 3. По способу, описанному в примере 1, получали М-хлорвалин. Его вводили в обогащенную тромбоцитами плазму крови кролика за 1 мин до добавления 10 мкМ АДФ. Агрегация регистрировалась способом, описанным в примере 1. В конечной концентрации 1 мМ хлорвалин ингибировал агрегацию тромбоцитов примерно на 50 ,П р и м е р 4, По способу, описанному в примере 1, получали М-хлорлизин. Изучение агрегации тромбоцитов методом, описанным в примере 1, показало, что М-хлорлизин вызывает сильное подавление АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов в составе ОТП кролика. Так, при введении в ОТП 110 15 20 полной агрегации тромбоцитов человека(стрелка 7 - момент введения 2 мМ хлорала-,нина) наступает частичная дезагрегация 35 40 мМ хлорлизина степень агрегации составляла 9 опо отношению к контрольному образцу ОТП, куда добавлялся лизин в конечной концентрации 1 мМ,П ри м е р 5, Получали й-хлорпролин по способу, описанному в примере 1. Агрегация тромбоцитов регистрировалась описанным в примере 1 методом, Иминокислота пролин, добавленная в ОТП кролика в конечной концентрации 1 мМ, не влияет на АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов. При введении й-хлорпролина в конечной концентрации 1 мМ степень агрегации тромбоцитов составляла 22 + 2 опо отношению к контролю. П р и м е р 6. В опытах исследовалось влияние й-хлор- а -аланина на агрегациютромбоцитов человека, Хлораланин добавляли в ОТП человека до введения АДФ, Агрегация тромбоцитов регистрировалась поописанному выше способу. Получено, что хлораланин значительно снижает максимальную степень агрегации тромбоцитов человека (табл.2), На фиг,2 представлены типичные кинетические кривые агрегации тромбоцитов человека, индуцированной 2 мкМ АДФ (стрелка 5- момент введения индуктора), Обозначения по осям те же. что и на фиг.1, При действии хлораланина (стрелки 8 и 9- момент введения соответственно 1 и 1,5 мМ хлораланина). Через 1-3 мин после добавления АДФ наблюдается значительная дезагрегация (кривая 3 и 4). При введении хлораланина после(кривая 2), В контрольном образце (кривая1) стрелка 6 указывает момент введения 0,1мл физиологического раствора,П р и м е р 7. Кролику М 1 в краевую вену уха медленно вводился й-хлораланин в объеме 6 мл на 1 кг массы. Концентрация й-хлораланина в вводимом растворе составляла 10 мМ. Исследовали агрегацию тромбоцитов по описанному выше методу, Через 5 мин, 1 и 24 часа после окончания введенияхлораланина степень агрегации составлялаоколо 90, 40, 70 оот степени агрегации довведения препарата. В контроле (вливание аланина в физиологическом растворе в концентрации 10 мМ, в объеме 6 мл на 1 кг массы) степень агрегации тромбоцитов через 5 мин и 24 ч составляла около 90 степени агрегации до вливания,П р и м е р 8, Кролику М 2 в краевую вену уха вводился М-хлораланин (в количестве, как в примере 7), Агрегация тромбоцитов в 50 55 обогащенной тромбоцитами плазме измеряли через 15 мин, 1 и 24 часа; ее степень составляла соответственно около 65, 35 85.П р и м е р 9, Кролику ММ 3 в краевую вену уха вводился Й-хлораланин (в количестве, как в примере 7), Способность тромбоцитов к агрегации в ОТП измеряли через 30 мин и 24 часа после окончания введения й-хлораланина. Степень агрегации составляла соответственно около 40 и 70 от степени агрегации до введения препарата, Таким образом, внутривенное вливание хлораланина вызывает быстрое и резкое ослабление агрегации тромбоцитов,П р и м е р 10. По способу, описанному в примере 1, получали й-хлорпроизводные различных классов аминокислот. Их противоагрегационная активность испытывалась на обогащенной тромбоцитами плазме крови кролика методом, описанном в примере 1. Значительное подавление агрегации имеет место при действии хлорпроизводных многих аминокислот(табл.З). Исключением являются хлорпроизводные триптофана и серосодержащих аминокислот, Их слабая противоагрегационная способность обусловлена тем, что хлораминовая группа реагирует с индольным кольцом или с атомами серы, Это следует из того, что й-хлораланин в смеси с триптофаном или метионином утрачивает способность подавлять агрегацию тромбоцитов (табл,З). Таким образом, в качестве средства для ослабления агрегации тромбоцитов могут быть использованы й-хлорпроизводные всех природных аминокислот кроме триптофана и серосодержащих аминокислот,Сейчас в клинике с целью ослабления агрегации тромбоцитов используется трентал. Трентал обладает умеренной противоагрегационной способностью. У многих пациентов он слабо подавляет агрегацию тромбоцитов. В наших опытах степень агрегации тромбоцитов после введения трентала в ОТП кролика в конечной концентрации 0,7 мМ (в такой концентрации трентал используется в клинике) составляла 84 + 6 от контроля.Более сильный эффект подавления агрегации тромбоцитов получается при действии ряда Й-хлораминокислот (см.примеры 1,2,7).Таким образом, предлагаемое средство имеет важное народно-хозяйственное значение.Формула изобретение Применение й-хлорпроизводных амино- и иминокислот в качестве средства для снижения агрегации тромбоцитов.1834659 Табл ица 1 Таблица боцитов человека в составе ОТП, Агрега 10 мкМ АДФ ияние й- а -аланина на агрегацию ция индуцироваТаблиц лияние й-хлораминокислот на агрегацию тромбоцитов в ОТП. Агрегация индуцировал 10 мкМ АДФ.Степень агрегации, ь от конт- роля пользуеманцентрация едине омер Формулы азвани 1,4 1,5 1,6 й - хлорлейцинй - хлоризолейцинй - хлорнорлейцинй - хлорсеринй - хлортреонинй - хлораспарагиновая кислота й - хлораспарагинй - хлорглютаминовая кислота й - хлорглютаминй - хлораргининй - хлорфенилаланинй - хлортирозинй - хлороксипролинй - хлортриптофанй - хлорменионинй - хлораланин в смеси с триптофаном( мМ)й - хлораланин в смеси с метионином (1 мМ) 61 ч 4 74 4 54 ф 11 57+ 3 66 + 1748 +3 1,8 1,9 1,10 1,11 1,12 69 + 13 74 ф 10 44 + 6 53+7 110,5 1,14 1,15 1,162,2 70 1378+893 +7 5 аа 0 0 Влияние й-хлор- а -аланина в разных концентрациях на агрегацию тромбоцитов кролика в составе ОТП, Агрегация индуцировалась 10 мкМ АДФ.1834659 Г Составитель М,МуринаТехред М.Моргентал ктор О.Мандзи Редактор и ГКНТ СССР зводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Г Заказ 2693 Тираж .ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открыти113035, Москва, Ж, Раушская наб., 45