Способ получения тромбоконцентрата

Сфез СфввтекмкСфцмалмстмкккмкРклубллк ОП ИСАНИ ЕИЗЬВРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕ ИЛЬ СТВУ и 833246(22) Заявлено 01.10,79 (21) 2823541/2 51) М. Кл,с присоединением заявки-А 5/14 ящйт 6 НВЙ квнвтэтВСЮлема вмрвтвек етевмта 1. (23) Приоритет -Опубликовано 30.05,81. БюллетеньДата опубликования описания 31,05.81) АвтоРыизобретеиняИ. Л. Лисовская и В. А. Аграиенко Центральный ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знаменинаучно-исследовательсйий институт гематологии и переливания крови(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТРОМБОКОНЦЕНТРАТ 3Изобретение относится к медицине, аименно гематологии и касается полученияпрепаратов из крови для лечения нарушенийгемостаза,Известен способ получения тромбокон-.,центрата путем смешивания кр 6 ви с анти-"агрегатом и центрифугирования ,Однако известный способ позволяет получить тромбоконцентрат с повышенной адгезивно-агрегационной активностью тромбоцитов.Цель изобретения - снижение адгезивно. агрегационной активности тромбоцитов,Указанная цель достигается тем, чтоспособ получения тромбоконцентрата осуществляют путем смешивания сырья с антиагрегантом и центрифугирования, кровьили обогащенную тромбоцитами плазмусмешивают с тетрациклином гидрохлоридомв конечной концентрации 100 - 300 мкМ,Способ осуществляют следующим образом.Кровь или обогащенную тромбоцитамиплазму (ОТП) перед центрифугированиемобрабатывают тетрацикл ином гидрохлоридом в конечной концентрации 00 - 300 мкМ 2в течение 0,5 - 1 ч. 150 мг кристаллического тетрациклина . гидрохлорида растворяют в 50 мл физиологического раствора, а затем к полученному раствору добавляют еще 50 мл 1/15 М раствора ХаНРО. Раствор тетрациклина гидрохлорида концентрации . 1,5 мг/мл, рН 7,2 добавляют в пластикатныемешки с цельной кровью или ОТП, добиваясь конечной концентрации тетрациклина от 0,07 до 0,2 мг/мл (100 - 300 мкМ), Время преинкубации тромбоцитов с тетрациклином 10 до начала центрифугирования составляетот 30 мин до 1 ч, Центрифугирование производят при обычном режиме. Осажденные тромбоциты не размазываются по стенкам мешка, не слипаются между собой и легко ресуспендируются в оставшейся плазме, З Оставляя малые объемы плазмы, можно.получать очень высокие концентрации тром боцитов (например, Оф кл/мл). Выход клеток составляет 75 - 100 О/О. Способ позволяет готовить тромббконцентраты из крови, хра.нившейся в холодильнике до 6-ти сут. При этом выход клеток составляет 50 - 00% от количества, содержащегося в ОТП, а зависимости от срока хранения крови и применяемой концентрации тетрациклина.833246 Таблица 1 Идуктор ОТП в присутствии 0,2 мг/мл тетрациклина-НСБ,% ередением олучен- суспенди П, полуная ресу- ндироваем тромчен спе ная рерованиецитов,етрациклиа-НС 8,% м тромбо- осажден- етрацик- НСЬ,% ных с итов, осажьх без иномде те трац иклиа-НСБ контроля, го АДф200 мкМ 75 77 Дф мк 70 2 4 Арахидоноваяк-та 160 мкМ Пример 1, 250 мл свежей крови, заготовленной на растворе ЦГф, центрифугируют 10 мин при 200 д. К 100 мл ОТП (350000 кл/мм) добавляют 6 мл раствора тетрациклина гидрохлорида.,Конечная концентрация тетрациклина равняется.0,20 мг/М; или 300 мкМ. После 40-минутной инкубации при комнатной температуре тромбоциты осаждают центрифугированием при 1200 д в течение 8 мин. Для сравнения из той же крови готовят контрольный тромбоконцентрат по обычной методике, при тех же . режимах центрифугирования, но без применения тетрациклина. Выход клеток состав- ляет с тетрациклином 80%, а без него 60/о. Для исследования агрегации, реакции на ги патон ический шок и ретракции сгустка оба тромбоконцентрата разбавляют аутологичной плазмой, не содержащей тетрациклина, до концентрации 350000 кл/ммз и инкубируют в течение 1 ч при 37 С.Агрегация тромбоцитов, индуцированная различными концентрациями АДФ и арахидоновой кислотой (свежая кровь), приведена в табл. .Ретракция сгустка после ресуспендирования выделенных с помощью тетрациклина тромбоцитов сохраняется полностью. Реакция на гипотонический шок снижается на 20 - 30%. Процедура приготовления тромбоконцентратов с помощью тетрациклина не влияет на количество малонового диальдегида, образующегося под действием тром- бина (1 ед/мл), а также на ПОЛ (перекисное окисление липидов), индуцированное ге". Исследование формы тромбоцитов пос-, ле их выделения в присутствии тетрациклина и последующего ресуспендирования методом фазовоконтрастной микроскопии показало, что клетки остаются, в основном, дисковидными.Пример 2, Кровь, заготовленная на кои.серванте ЦОЛРПК 7 б, хранится во флаконах при 4 С в течение 5 сут.,Надосадочную ОТП (450000 кл/мм) отсасывают водо-.струйным насосом, переводят в пластикат-.ный мешок и добавляют тетрациклин гидрохлорид в конечной концентрации 0,07 мг/м (100 мкМ). Инкубируют 1 ч, центрифугируют при 1200 д в течение 8 мин, удаляют бесклеточную плазму и ресуспендируют клет 1 з "кг в аутологичной плазме, не содержащейтетрациклина до концентрации 420000 мл/мм Выход тромбоцитов составляет 60%.Агрегация тромбоцитов, индуцированнаяразличными концентрациями АДФ (кровь, хранившаяся при 4 С в течение 5 сут) приведена в табл. 2. Ретрация сгустка до и после осаждениятромбоцитов составляет 80%, Реакция на гипотонический шок в обоих случаях оту 5 сутствует. ПОЛ, индуцированное тромбиномн Ге+1 не изменяется форма тромбоцитов, согласнО оценке методом фазовоконтрастной микроскопии, 6 обоих случаях сферическая.Предлагаемый способ позволяет значительно снизить адгезивно-агрегационную ак- ЗВ тивность тромбоцитов, увеличить выход кле ток и улучшить их качество.833246 Таблица 2 перед добавлететрациклинаСб,ъ присут07 мгlмклинан тор АДФ200 мкМ 7 2 Дф0 мкМ А 4 мкМ 4 мула изобретения с тетрациклином гид концентрации 100 -Источники принятые во вним 1. Вес 4 ег б. А Е 1 п ргерагабоп а сопсеп 1 га 1 ев. - с 1 еп 539.рохлоридом300 мкМинформации,ание при экспертизее 1 а. РгоМаапс 1 п пд йогате о фа 1 ее 1 се, 1972, 75, р. 538 Составитель Техред А. Бо Ги раж.687 ПИ Государственного делам изобретений Москва, Ж - 35, Ра П Патент, г. Ужго. Способ получения тромбоконцентрата путем смешивания сырья с антиагрегантом и центрифугирования, отлачающййся тем, что с целью снижения адгезивно-агрегационной активности тромбоцитов, кровь или обогашенную тромбоцитами плазму смешивают. ас КорреПодпикомитета СССРи открытнйшская нвб, дрод, ул, Проект олученная ресуванием тром- осажденных с лииом-НС,%