Способ определения резидентного стафилококкового бактерионосительства

(5)5 С 12 ЕТЕ 2 едицинской зоваться для лококкового гических отьных домах, населения в СО С) большая нфекций, филококтные баклактики а важным ие бактеющей састно, что СУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ И ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(71) Оренбургский государственный медицинский институт(56) "Справочник по микробиологическим ивирусологическим методам исследования",под ред. М,О.Биргера. М.: Медицина, 1982,с. 251-253.Терновская Л,Н. "Стафилококковое носительство", Методические рекомендации,Свердловск, 1983, с. 16,Авторское свидетельство СССРМ 1449587, кл, С 12 С 1/04, 1987,(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗИДЕНТНОГО СТАФИЛОКОККОВОГО БАКТЕРИОНОСИТЕЛЬСТВА Изобретен микробиологи выявления рез бактерионосит делениях и б при массовом экологическомСтафилоко роль в этиолог Основным ист ковой инфекци терионосите стафилококко является свое рионосителей нацией. Кром ие относится к м и и может исполь идентного стафиельства в хирур ольницах, родил обследовании мониторинге.ккам принадлежит ической структуре и очником гнойной ста и являются резиден ли, Для профи вой инфекции весьм временное выявлен этого типа с последу е того, стало изве(57) Использование; медицинская микробиология. Сущность изобретения: резидентное стафилококковое бактерионосительство определяют путем посева исследуемого материала на питательные среды с последующим выделением чистых культур, их идентификацией и тестированием. Выделенные чистые культуры тестируют по антииммунглобулиновой активности и по ее величине определяют резидентное стафилококковое бактерионосительство, При значении антииммуноглобулиновой активности 170 мг% и выше определяют резидентное бактерионосительс 1 ьо, обусловленное ЯтарЬуососсцз аигецз, а при 280 мг% и выше Ясар)уососсиз ераеггпбз. 2 табл,формирование высокого уровня резидентного стафилококкового бактерионосительства происходит в результате техногенного загрязнения окружающей среды, Поэтому этот показатель может служить микробиологическим тестом экологического мониторинга.Учитывая сказанное, очевидна необходимость эффективного способа диагностики резидентного стафилококкового ба ктерионосител ьства.Известен бактериологический способ выявления носителей стафилококков, Он требует больших затрат питательных сред, лабораторной посуды, рабочего времени (72 ч) что ограничивает его использование в прак 1761809тике, особенно при необходимости единовременного обследования большого количества лиц. Кроме того, этот способ непозволяет дифференцировать "резидентных" постоянных) и "транзиторных" (временных) бактерионосителей, тогда какименно первый тип представляет наибольшую эпидемиологическую значимость, Чтоб ы выявить "резидентных" бактерионосителей, необходимо не менее, чем 10трехкратное бактериологческое обследование с временным интервалом. Т.е. способимеет низкую точность диагностики резидентного стафилококкового бактеоионосительства. 15Известен способ выявления стафилококковых бактерианосителей, заключающийся в определении у выделенныхстафилококков уровня антилизоцимной активности. В нем по наличию у золотистого 20стафилококка антилизоцимной активности,а у эпидермального по превышению ееуровня б мкг, дифференцируют носительские штаммы от контаминирующей микрофлоры, Способ основан на наличии у 25резидентных штаммов особого свойства -антилизоцимной активности, то есть способности к ингибиции лизоцима клеток, чтоприводит к длительному сохранению микроорганизмов в клетках хозяина, Этот способ позволяет проводить однократноеобследование при диагностике резидентного стафилококкового бактерионосительства.Однако известный способ имеет недостаточную точность диагностики резидентского стафилококкового бактерионосительства. Указанный способ не выявляет "резидентные" штаммы золотистого стафилококка, обладающие антилизоцимной 40активностью в 1-2 мкг, Кроме того, затруднека дифференцировка штаммов на "резидентные" и "транзиторные" эпидермального стафилококка, ошбладающие антилизоцимной активностью 4 и 5 мкг. Следствием является то, что с помощью этогоспособа часть резидентных бактерионосителей не выявляется,Целью изоберетения является повышение точности способа диагностики резидентного стафилококкового бактерионосительства.Поставленная цель достигается тем, чтов известном способе диагностики, включающем посев исследуемого материала на питател ьные среды с последующимвыделением и идентификацией чистых культур, у выделенных штаммов стафилококковопределяют антииммуноглобулиновую активность, по ее наличию диагностируют резидентное стафилококковое бактерионосительство. Резидентное бактерионосительство диагностируется в том случае, если штамм золотистого стафилококка обладает антииммуноглобулиновой активностью 170 мгои выше, а штамм эпидермального стафилококка - 280 мгои выше,Новыми признаками заявляемого способа являются:определяют антииммуноглобулиновую активность у выделенных штаммов стафилококков;по ее величине у золотистого стафилококка 170 мг% и выше диагностируют резидентное стафилококковое бактерионосительство;по ее величине у эпидермального стафилококка 280 мгои выше диагностируют резидентное стафилококковое бактерионосительство,Наличие первого нового признака в заявляемом способе позволяет выявить новый, более информативный признак резидентного стафилококкового бактерионосительства, что в итоге позволяет повысить точность диагностики данного бактерионосительства в диапазоне значений определяющего показателя, расширяя чувствительность способа на нижней границе показателя.Второй новый признак позволяет снизить порог чувствительности диагностики ба ктерионосител ьства до 170 мг о , в резул ьтате чего повышается точность диагностики бактерионосительства при наличии штамма золотистого стафилококка, и, практически, выявляются "резидентные" бактерионосители среди обследуемых лиц.Третий новый признак позволяет снизить порог чувствительности диагностики бактерионосительства до 280 мго , что позволяет в итоге повысить точность диагностики бактерионосительства при наличии штамма эпидермального стафилококка и, практически, выявить всех бактерионосителей данного класса из обследуемых лиц.Эти признаки в известных технических решениях не обнаружены.Обнаружена статистически достоверная зависимость между способностью стафилококков длительно персистировать в макроорганизме и его свойством деградировать иммуноглобулины в биологических жидкостях,Применение заявляемых признаков предполагает определение антииммуноглобулиновой активности стафилококков, являющейся тестом персистирующих характеристик штамма и позволяющей диф 176180910 15 20 заявляемого способа 25 30 35 40 45 50 55 ференцировать "резидентное" и "транзиторное" бактерионосительство.Т.о,заявляемое техническое решение соответствует критерию "существенные отличия, а совокупность его известных и отличительных признаков обеспечивает получение нового положительного эффекта - повышение точности способа. Предложение данного способа стало возможным после того, как авторами была выявлена с помощью экспериментально разработанной методики антииммуноглобулиновая активность стафилококков, т.е. их способность нейтрализовать иммуноглобулины различных классов в биологических жидкостях, Высказано предположение о возможности роли этого свойства в персистирующей способности микроорганизма, где антииммуноглобулиновая активность представляет фактор, целенаправленно нейтрализующий защитные механизмы макроорганизма. Это послужило основанием для определения антииммуноглобулиновой активности наряду с другими характеристиками, в частности, антилизоцимной активностью штаммов стафилококков, выделенных у 560 обследованных лиц с целью выявления бактерионосителей. Анализ полученных данных выявил прямую зависимость между величинами антилизоцимной и антииммуноглобулиновой О и М активностями. Причем, наиболее четко такая зависимость прослеживалась в отношении антииммуноглобулиновой 6 активности микроба (табл, 1).Выяснилось, что штаммы стафилококков, обладающие высокой антилизоцимной активностью, а, следовательно, и персистирующими свойствами, обладают и высокой антииммуноглобулиновой активностью. Но при этом высокая антииммуноглобулиновая активность обнаруживалась и в части случаев, когда у штаммов эпидермального стафилококка антилизоцимная активность была 4 мкг или 5 мкг, а у золотистого стафилококка - 0 мкг или 2 мкг. Было решено провести трехкратное бактериологическое обследование группы лиц, у которых со слизистой носа выделены эпидермальные стафилококки с антилизоцимной активностью 4,5,6 мкг и золотистые стафилококки с антилизоцимной активностью О, 2, 3 мкг.Трехкратное обследование показало, что штаммы резидентных бактерионосителей могут обладать различной антилизоцимной активностью - 7, 6, 5, реже 4 мкг - эпидермальный стафилококк, 3, 2, О мкг - золотистый стафилококк (табл. 2), То есть штаммы эпидермального стафилококка, имеющие 4 и 5 кг, а золотистого - 0; 2 мкг не могут быть однозначно определены как трднзиторные.Антииммуноглобулиновая активность в этом отношении оказалась более информативным показателем, так как выделенные у бактерионосителей резидентного типа штаммы эподермального стафилококка обладали антииммуноглобулиновой активностью от 289,24 ч 5,7 м г% до 352,41 ч,4 мг%, золотистого - от 178,28 + 6,4 до 190,31,7,5 мг%, "Транзиторные" штаммы эпидермального стафилококка имели антииммуноглобулиновую активность 112,86 - + 6,8-198,31 4,7 мг%, а "транзиторные" штаммы золотистого стафилококка,64 + 9,1-148,41 + 5,8 мг%.Сделан вывод, что антииммуноглобулиновая активность является более информативным показателем персистирующих свойств микроба, нежели антилизоцимная, и может использоваться в качестве диагностического теста резидентного бактерионосительства. Это было положено в основу Способ осуществляется следующим образом. У обследованных со слизистой носа при посеве на питательные среды выделяют чистые культуры золотистых эпидермальных стафилококков бактериологическим способом с определением общепринятых свойств - плазмокоагулазы, гемолизина, лецитовителазы и др. Вместе с тем, у этих штаммов определяют антииммуноглобулиновую активность, Для этого берут суточную взвесь стафилококков, стандартизированную на ФЗК-М Д,50, кювета М. 2, зеленый светофльтр). Именно такая плотность взвеси была экспериментально подобрана как выявляющая максимальное проявление антииммуноглобулиновой активности микроба. 0,1 мг этой взвеси вносят в. пробирку, куда добавляют 0,1 мл сыворотки крови с известным количеством 9, определенных по методике Манчини, Пробирку со смесью ставят в термостат на инкубацию при 37 С в течение 30 минут. По истечение времени смесь центрифугируют при 6000 об/мин в течение 10 минут и супернатант используют для повторного определения уровня иммуноглобулинов с учетом предварительного разведения в 2 раза. Затем высчитывают разницу между уровнями иммуноглобулинов в контрольной и опытных пробах сыворотки и по ней судят об антииммуноглобулиновой активности микроба, Если уровень антииммуноглобулиновой активности золотистого стафилококка оказывается 170 мг% и выше, а эпидермального стафилококка - 280 мг% и выше, тосчитают эти штаммы "резидентными" и диагностируют резидентное стафилококковое бактерионосительство,П р и м е р 1. При обследовании на стафилоко кковое бактерионосительство у больного П.А,Д, был выделен эпидермальный стафилококк, обладающий АЛА - 5 мкг, А 96 - 283,4 мг . Было предположено резидентное бактерионосительство. Многократные повторные посевы идентичного стафилококка подтвердили резидентный характер бактерионосительства. При атом титр бактериальной обсемененности возрастал.П р и м е р 2. У больного М,С,К. выделенный эпидермальный стафилококк имел следующие характеристики АЛА - 5 мкг, А 196 - 156,2 мг о,Повторные посевы не дали аналогичного результата,П р и м е р 3. У больного Д.И,И, выделен золотистый стафилококк - АЛА - 0 мкг, А 96 - 171,2 мг оПредположение резидентного бактерионосител ьства подтвердилось трехкратньчм высевом идентичных стафилококков (фаготип 3 С). Титр бактериальной обсемененности возрастал до 10 -10 КОЕ/тампон,П р и м е р 4. У больного К,Н,О. выделенный штамм золотистого стафилококка обладал АЛАмкг, А 190 - 121,3 мг . При повторных высевах идентичные стафилококки не выявлялись, отрицая транзиторное бактерионосительство, как и было предполокено по тесту А дб.Сравнивая точность диагностики заявляемого способа и прототипа примем за 100 количество резидентных бактерионосителей, выявленных трехкратным бактериологическим способом при обследовании 560 человек,. Трехкратное бактериологическое обследование выявило 198 резидентных бактерионосителей - 100%, Способом прототипа удалось выявить 124 бактерионосителя - 63,2 , заявляемым способом - 195 чел, или 98,4 , что на 35,2% больше нежели способом прототипа. Следовательно заявляемый способ позволяет повысить точность способа диагностики резидентного бактерионосительства на 35,2 , что позволяет проводить своевре менную и целенаправленную санацию бактерионосителей, Кроме того, заявляемый способ обладает дополнительными преимуществами - он более прост, чем способ прототипа, Упрощение проявляется в том, что 10 антииммуноглобулиновую активность различных уровней можно регистрировать на одной чашке Петри, т.е. одновременно исследовать до 45 штаммов с минимальными затратами материала и рабочей силы. Опре деление же антилизоцимной активности поспособу прототипа гораздо более громоздко, так как предполагает использование нескольких чашей Петри с питательным агаром, включающим различную концентра цию лизоцима с целью выявления различных уровней антилизоцимной активности исследуемых штаммов.Таким образом, использование способапозволит повысить точность диагностики 25 резидентного стафилококкового бактерионосительства, а, следовательно, и достичь положительного аффекта,Формула изобретения 30 1. Способ определения резидентногостафилококкового бактерионосительства путем посева исследуемого материала на питательные среды с последующим выделением чистых культур, их идентификацией и 35 тестированием, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью повышения точности способа, выделенные чистые культуры тестируют по антииммуноглобулиновой активности и по ее величине определяют резидентное ста филококковое бактерионосительство,2, Способ по п.1, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что при значении антииммуноглобулиновой активности 170 мги выше определяют резидентное бэктерионосительство, 45 обусловленное Ясарпу ососсцв а о герлз, а и ри280 мги выше - ЯтарЬуососсозербегтбз.10 1761809 Таблица 1 Таблица 2 Составитель О.БухаринТехред М.Моргентал Корректор М.Максимищинец Редактор Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 Заказ 3236 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5