Способ прогнозирования течения острых распираторных инфекций у детей раннего возраста

(51)5 6 01 Й 1/ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР Я АНИЕ ИЗОБРЕТЕН МУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ПИ К АВТО(71) Ленинградстут усове ршенст рова(56) Чернина Л.М. Иммунологические аспекты острых воспалительных заболеваний респираторного тракта у детей раннеговозраста. - Педиатрия, М 9, с,105 - 106,(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ ОСТРЫХ РЕСПИРАТОРНЫХ ИНФЕКЦИЙ У ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА .(57) Изобретение относится к педиатрии иможет быть использовано для прогнозиро-вания течения острых респираторных инфекций у детей раннего возраста. Цель - повышение точности способа. Способ осуществляется следующим образом: в пупоретение относится к медицине и ыть использовано в педиатрии. стен способ прогнозирования часолеваний острыми респираторнМ- кциями (ОРИ) в первом полугодии детей, основанный на вычислении ического коэффициента по данным а и исследования крови беременворожденного. Изоб может б Извеостатками способа являются с обходимость в дородовом обс еременной, невысокая дост бусловленная неизбежным су м при сборе анамнеза, а также лож- ледо- овер- бьек- краттоты заб ми инфе жизни у прогност анамнез ной и ноНед ность, не вании б ность, о тивизмо%30й государственный инстиования врачей им. С,М, Ки Юц 1755101 А винной крови ребенка и в его периферической крови на 4-й день жизни определяются количество лейкоцитов с подсчетом содержания форменных элементов, и абсолютное количество Тту и Ттч лимфоцитов с определением их соотношения Тту/Ттч, При количестве Тту менее 0,613 + 0,138 х 10 /л и соотношении Тту/Ттч менее 1,64 + 0,48 в обоих анализах прогнозируется риск развития частых острых респираторных заболеваний в возрасте до 1 года. При определении этих же параметров у тех же детей в возрасте старше 1 года и до 2,5 лет, в случае сохранения указанных параметров нижеприведенных значений прогнозируется сохранение риска развития повторных ОРВИ сроком на 6 мес, а при их нэрастании и одновременном превышении ими указанных значений прогнозируется уменьшение степени риска. Предложенный способ повышает достоверность прогноза. 3 табл. ковременность прогноза, ограниченного первым полугодием жизни,Цель изобретения - упрощение известного способа, повышение его достоверности, сокращение сроков, необходимых для проведения прогноза, а также увеличение срока прогнозирования до 1 года жизни.Поставленная цель достигается определением содержания лимфоцитов в пуповинной крови новорожденного и в его периферической крови на 4 день жизни с определением количества теофиллинустойчивых (Тту) и теофиллинчувствительных (Ттч) лимфицитов и вычислением соотношения Тту и снижении Тту/Ттч в обоих анамнезахпериода новорожденности прогнозируется возможность развития частых ОРИ в возрасте до 1 года;Известно, что у детей с частыми ОРИ, формирующими группу так называемых "часто болеющих детей",(ЧБД), наиболее характерные изменения в иммунной системе заключаются в уменьшении содержания Т- активных клеток и в снижении соотношения, 1 В.Тту/Ттч (субпопуляций, осуществляющих соответственйбМелперную и супрессорную функции), причем изменения их содержания выявляются как на фоне ОРИ, так и в течение длительного времени после вь 1 здоровления,,Для решения этого вопроса нами проводилось обследование новорожденных с определением указанных параметров (Такт, Тту, Ттч) и последующее наблюдение за ними до возраста 3 лет с повторными иммунологическими обследованиями. Всего было обследовано 320 новорожденных - 220 от нормально протекавшей беременности ( гр,) и 100 - от беременности с токсикозами 1 половины (2 гр.), Результаты определения содержания субпопуляций Т-лимфоцитов и их соотношения представлены в табл,1,Как видно у детейгр, содержание субпопуляций лимфоцитов при 1 и 2 обследованиях не менялось, а соотношение Тту/Ттч несколько снижалось, У детей 2 группы впупоаинной крови содержание обеих субпопуляций было повышенным, вероятно зй счет антигенной стимуляции и гипоксии, но соотношение Тту/Ттч менялось незначительно. Однако к 4 дню жизни содержание субпопуляции нормализовалось, а ТтуТтч стремилось к норме. Эти средние значения с недостоверными колебаниями сохранились у большинства обследованных детей на протяжении первых 3 лет жизни.При последующем наблюдении за обследованными детьми выяснилось, что частые ОРИ на 1 году жизни отмечены у 68 из 320 обследованных детей (21,30). Критериями частых ОРИ были: до 1 года 4 и более ОРИ в год, 1 - 3 года 6 и более ОРИ в год, 54 из 68 детей до 1 года жизни находились дома и лишь 14 посещали детские дошкольные учреждения (ДДУ) с 6-9 мес, При ретроспективном анализе результатов иммунблогическогообследования часто болеющих детей в периоде новорожденности у 58 из них (85,3 ф 4) было найдено достоверное снижение количества Тту/Ттч как в пуповинной крови, так и на 4 день жизни. Достоверных различий в их содержании у детей 1 и 2 групп не отмечалось, что позволило обьединить эти группы. Отсутствие достоверных различий в содержании приведенных параметров при 1 и2 обследованиях позволили объединить их вместе. Характерно, что ни в одном случае 5 оба приводимых параметра одновременноне превышали средних значений, отмечаемых у этих детей в период новорожденности (т,е. Тту/Ттч -1,64 + 0,048, Ту,613 + 0,138 х х 10 /л), Все это явилось основанием для 10 введения указанных параметров в качествеограничений в формулу изобретения.При повторных иммунологических обследованиях, проведенных у 62 из 68 часто болеющих детей в возрасте 12,18 и 24 мес.15 (.+ 1 мес.) не ранее чем через 1 мес, послеперенесенных ОРИ, выяснилось, что у большинства из них количество Ту/Тч и Ту повышалось, причем во всех случаях превышение ими параметров периода ново рожденности непосредственно предшествовало уменьшению частоты ОРИ (табл.3),У 16 детей из 58 содержание Тту иТуу/Ттч за время наблюдения не повысилось, и частота ОРИ не снизилась (8,4 + 2,3 25 в год).Выявленная зависимость между повышением указанных иммунологических показателей и частотой ОРИ явилась основанием для введения в лечение этих детей 30 иммуностимуляторов, 8 детей группы ЧБД с18 мес. получали нуклеинат натрия (НН) - 0,1 х 3 р, в день - 2 курса по 10 дней с интервалом 2 недели, Через 2-3 недели после 2 курса НН отмечалось достоверное по вышение содержания Ту и .Тт/Ттч(соответственно до 1,011 + 0,168 х 10 /л и 2,20 + 0,17).Частота ОРИ после этого снизилась с8,2 .+. 2,3 до 3,2 + 0,8 раз в год (в пересчете 40 на год), Р0,05, Это также свидетельствовало о роли снижения количества Тту и нарушениисоотношения Тту/Ттч в возникновении повторных ОРИ у детей,Что касается биологического смысла 45 приводимых параметров, то количество Тактивных лимфоцитов и особенно Ту, в значительной степени отражающих содержание Т-хелперов, является одним из важнейших параметров иммунной системы, 50 во многом определяющих резистентностьпротив инфекции, Количество Тту и Ттч лимфоцитов может варьировать в различных пределах, но соотношение Т,у/Ттч, называемое также иммунорегуляторным индексом, 55 является наиболее информативным показателем, отражающим хелперную активность лимфоцитов. Под влиянием различных неблагоприятных факторов, действующих во время беременности, количество Ту иТту/Ттч могут меняться, отражая изменение активности иммунной системы. На этом выявлении индивидуальных темпов восстановления сниженных при рождении функций и основан предлагаемый способ.Следует отметить, что всего из 320 обследованных новорожДенных группу ЧБД составило 68 детей, причем у 10 из них указанные иммунологические параметры были выше приведенных, Вероятно, повторные ОР у этих детей были обусловлены иными механизмами (патологией носоглотки, снижением функций нейтрофилов и пр,), Предлагаемый способ позволяет выделять из группы ЧБД тех детей, у которых развитие ОРИ обусловлено конкретными иммунными механизмами, что открывает возможности для проведения патогенетически обоснованной терапии.П р и м е р 1. Ребенок Н,С., родился 4 июля 1988 г. В родильной комнате в стерильную силиконизированную пробирку с 75 ед. гепарина было взято 5 мл крови из пуповины. Было подсчитано количество лейкоцитов в камере Горяева (7,46 х 10 /л) и сделан мазок крови с окраской по Романовскому-Гимза с подсчетом количества лимфоцитов (32) и вычислением их абсолютного числа (2,388 х 10 /л), 1 мл крови из пробирки развели в 2 раза средой 199 (рН 7,2 - 7,4) с 5% эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС), смесь подслоили тонкой пипеткой под 2 мл смеси фиколл-верографин с плотностью 1119 г/см . Пробирку с содерзжимым центрифугировали 40 мин при 3609 беэ охлаждения, Кольцо лимфоцитов на границе градиента плотности собрали пипеткой, перенесли в силиконизированную пробирку и дважды отмыли средой 199 в течение 10 мин при 1209. Подсчитали количество клеток в 1 мл в камере Горяева и добавлением среды 199 довели концентрацию до 2 х 10 мл, 0,1 мл этой смеси мешали с 0,05 мл ЭТС, добавили 0,1 мл 1% эритроцитов барана и в силиконизированной пробирке выдержали при 4 С в течение 1 ч, Затем процесс фиксировался добавлением 5 капель 50%-ного раствора глютаральдегида. Иэ смеси приготовили мазки, высушили, фиксировали метанолом и окрасили по Романовскому, Препарат исследовали под малым увеличением, Было подсчитано 100 лимфоцитов как с эритроцитами, так и без. Розеткой считались лимфоциты, присоединившие 4 и более эритроцита, Их количество составило 48(1,146 х 10 /л). Это отразило общее количество Т-лимфоцитов.Для определения теофиллинустойчивых Т-лимфоцитов (Ттфф к смеси лимфоцитов концентрации 2 х 10 мл добавили 0,1 мл ЭТС и 0,1 мл 0,5%-ного раствора теофиллина, Смесь выдержали при 37 С 1 ч, добавилик ней 0,1 мл 1 -ной взвеси эритроцитовбарана, центрифугировали при 200 д 5 мин и5 выдержали 1 ч при 4 С. Количество лимфоцитов, образовавших розетки, составило25% от общего количества лимфоцитов (от2,388 х 109/л), т,е. 0,597 х 109/л (менее ограничения, приведенного в формуле, т,е. 0,61310 х 10 /л). Количество теофиллинчувствитель 9ных клеток (Т,фч) определялось по разностиТобщее - Ттфу = 1,146 - 0,597 = 0,549 х 10 /л,9Соотношение Ттфу,Ттфч = 0,597;0,549 = 1,09(менеес 1,64).15 На 4 день жизни утром из пятки этогоже ребенка было получено 1 мл крови встерильную пластиковую пробирку обьемом 1,5 мл, содержащую 15 ед, гепарина,Последующие манипуляции по подсчету об 20 щего количества лейкоцитов, приготовлению и окраске мазков крови, выделениюлимфоцитов, определению количества Тлимфоцитов, Ттфу, Ттфч полностью аналогичны проведенным с пуповинной кровью,25 Количество лейкоцитов составило 12,200 хк 10 /л, количество лимфоцитов - 32 13,904 кх 10 /л, Т-лимфоцитов - 1,054 х 10 /л, Ттсу- 0,590, Ттфч = 1,054 - 0,590 = 0,464 х 10 .Соотношение Ттфу/Ттфч = 0,590:0,464 = 1,27,30 На основании того, что значения Ттфу и соотношения Ттфу/Ттфч в обоих анализах былиниже приведенных в формуле ограничений,был дан неблагоприятный прогноз по развитию повторных ОРИ. С 5 до 12 мес. ребе 35 нок перенес 5 ОРИ, что подтвердило прогноз.П р и м е р 2, Ребенок П,П, В пуповинной кРоаи: Тту 0,776 х 10 в/л ( 0,613), Ттч -0,145 х 10 /л, Тту/Ттсч - 5,35 ( 1,64), На 440 день: Тту - 1,280 х 10 /л (0,613), Ттч - 0,280 хх 10 /л, Тту/Ттч = 4 57 (1,64), На основаниипревышения содержания Тту и Тту/Ттч ограничений, приводимых в формуле изобретения, был дан благоприятный прогноз по45 развитию ОРИ. На протяжении первых 12мес. жизни перенес ОРИ 2 раза, течение -без осложнений. При обследовании в 12мес. Тту - 1,329 х 10 /л ( 0,613), Ттч - 0,306 хх 10 /л, Тту/Ттч = 4,3 1,64). Благоприятный50 прогноз подтвержден, С 16 мес. посещаетдетские ясли: в течение 20 мес. (с 16 до 36мес.) перенес ОРИ 6 раз (3,6 раз в год, 6 разв год), течение неосложненное. В приводимом примере высокие уровни Тту и Тту/Ттч в55 периоде новорожденности позволили датьблагоприятный прогноз по заболеваниямОРИ, а высокие уровни в 12 мес. - подтвердить его, На основании этого было рекомендовано посещение детских яслей, гдеребенок болел редко,П р и м е р 3, Ребенок М.В, В пуповинной крови: Тту 0,565 х 10 л ( 0,613), Ттч - 0,560 х 10 /л, ТтТтч =1,0( 1,64), На 4 день; Тту - 0,580 х 10 /л ( 0,614), Ттч - 0,342 х х 10 /л, Тту/Ттч = 1,48 ( 1,64). На основании сниженных по сравнению с ограничениями количеством Тту и Тту/Ттц был дан неблагоприятный прогноз - повышенный риск развития частых ОРИ. Ребенок не посещал ясли, однако до 12 мес, перенес 5 ОРИ, на основании чего был отнесен в группу ЧБД. В 12 мес.: Тту 0,923 х 10 /л ( 0,614), Ттч 0,241 х х 10 /л, ТуТтч = 3,8 ( 1,64), На основании превышения иммунологическими показателями установленных ограничений было установлено улучшение прогноза - ожидаемое снижение частоты ОРИ. В следующие 6 мес. (до 12 мес.), находясь дома, перенес 2 ОРИ(т,е,4,0 в пересчете на год). С 20 мес. посещает детские ясли, и с 20 до 36 мес, перенес ОРИ 4 раза (3,0 в пересчете на 1 год), чтоменьше критерия ЧБД для данного возраста, На данном примере виден. следующий положительный эффект предлагаемого способа: прогнозирование риска ОРИ в периоде новорожденности, проведенное на протяжении короткого срока (первых 4 дней жизни) на основании обьективных данных, с высокой степенью достоверности, выявило риск развития частых ОРИ сроком на 1 год, что было невозможно при использовании прототипа. На основании этого были даны рекомендации отложить посещениДДУ до 1 года жизни, т,е, посещение их иучащение контактов с инфекциями способствовало бы более частым заболеваниям,5 препятствующим восстановлению функцийиммунной системы, Несомненно, что в этомслучае ребенок оставался бы в группе ЧДБбольшее время, что увеличило бы числодней временной нетрудоспособности роди 10 телей по уходу,Повторное иммунологическое обследование в 12 меспроведение которого квпозволяет осуществить прототип, выявилоснижение степени риска ОРИ и позволиле15 рекомендовать посещение ДДУ, в котором,несмотря на возросшее число контактов синфекциями, частота ОРИ снизилась,Формула изобретенияСпособ прогнозирования течения ост 20 рых респираторных инфекций у детей раннего возраста путем биохимическогоисследования крови, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью повышения точности способа, определяют в пуповинной крови ново 25 рожденного и в его периферической кровина 4 дейь жизни количество Т-теофиллинустойчивых и Т-теофиллинчувствительныхлимфоцитов, их соотношение и при содержании Т-теофиллинустойчивых лимфоцитов30 менее 0,613 .+ 0,138 х 10 /л и соотношениименее 1,64 . 0,48 прогнозируют неблагоп.рйятное течение заболевания,Таблица 1.10 Таблица 2 Количество Тту, Ттч и соотношение ТГуЛГч У часто болеющих детей в периоде новорожденностиа 3 Средняя частота ОРИ у обследованных детей до и после повышениЯ соДеРжаниЯ Т 1 у и Т,у/Туч- в пересчете на год жиз актор Ю,Сере орректор П Гереа каз 2885 ТиражВНИИПИ Государственного комитета по изобретения113035, Москва, Ж, Раушская наб изеодстзенно-нздтательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 1 Составитель И,Меле Техред М. Моргента Подписное м и открытиям при ГКНТ СССР