Способ изготовления вакцины для профилактики дерматофитозов домашних и лабораторных животных

(51)5 А 61 К 39/00 ГО СУДА Р СТВЕ ННЫ Й КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ ПРИ ГКНТ СССРОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ц 9912 1, .с.г у % 4 Ой Ф М(56) Авторское свидетельство СССРМ 1632031, кл. А 61 К 39/00, 1986.(54) СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ДЕРМАТОФИТОЗОВ ДОМАШНИХ И ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ(57) Изобретение относится к ветеринарноймикологии, в частности к профилактике деИзобретение относится к ветеринарной микологии, в частности к профилактике дерматофитозов животных.Цель изобретения - повышение иммуногенности вакцины и создание иммунитета одновременно к трихофитии и микроспории,Поставленная цель достигается тем, что в качестве вакцинных штаммов используют вирулентные культуры грибов Мсгозрогав сапз, Мсгозрогов дурзеощ, Тгспорйутоп гпепсадгорпутез, после их гомогенизации концентрацию микроконидий взвеси Т, гпептадгорпутез доводят до 1 млрд 200 млн - 2 млрд в 1 мл, М, сапз 600 млн - 1 млрд в 1 мл, М. дурзецщ - 600 млн - 1 млрд в 1 мл, после чего их смешивают в равных объемах (1:1;1), инактивируют добавлением 0,5 - 0,6%-ного раствора формалина из расчета 1:1 по объему в течение 3 - 4 сут в термостатей. 1734762 А 1 рматофитозо в жи вот н ых. Цел ь изобретения - повышение иммуногенности вакцины и создание иммунитета одновременно к трихофтии и микроспории, Это достигается тем, что в качестве вакцины используют инактивированные микроконидии вирулентных грибов Т, гпептадгорпутез, М. сапз, М. дурзецгп при следующем соотношении; Т, гпемадгорпутез с содержанием микроконидий 1 млрд 200 мм - 2 млрд в 1 мл, М. сап з и М. дурзеоп с содержанием каждой культуры по 600 мм - 1 млрд микроконидий в 1 мл, взятых в соотношении 1:1:1 - 25 - 26%, 0,5 - 0,6%-ный раствор формалина - 25 - 26%, 0,8 - 0,9%-ный раствор нуклеината натрия - 48 - 50%, Вакцину вводят внутримышечно двухкратно с интервалом 10 - 14 дней в зоне 0,9 - 1,2 мл. 3 табл,при Т+ 37- 38 С, затем добавляют иммуномодулятор - 0,8 - 0,9%-ный раствор нуклеината натрия в количестве 1:1 по объему, после чего взвесь расфасовывают и лиофилизируют.Для изготовления вакцины используют вирулентные штаммы грибов Т. вептадгорпутез, М, сапз и М. дурзеощ, которые обладают следующими свойствами.Штамм гриба Т, тептадгорпуез.Морфологические свойства. Штамм культивируется на сусло-агаре. При высеве уколом на чашку Петри с сусло-агаром и инкубировании при 24 - 28 С образует белую, бархатистую, с резко очерченными краями колонию, которая к 20 - 25 дню занимает всю поверхность среды, С обратной стороны колонии возможно образование коричневого пигмента. При высеве споровой взвеси культуры в матрасы с питательной55 средой к 10 - 15 дню развивается сплошная ровная бархатисто-пушистая, слегка порошистая пленка белого цвета.Вирулентные свойства, При нанесении на скарифицированную кожу кролика элементов гриба на 10 - 15 день образуются корочки, плотно сросшиеся с кожным покровом, на 20 - 25 день часто образуются толстые астбестовидные корки, некротические поражения кожной ткани, изъязвления, Самовыздоровление наступает на 45 - 50 день.Реактогенные свойства. Подкожное и внутримышечное введение инактивированного корпускулярного антигена из культуры Т, Фепсадгорйу 1 ез не приводит к изменению клинического состояния животных,Антигенные свойства, Титры антител в РНГА на 20 - 25 день после иммунизации составляют 1:320, 1:640.Иммуногенная активность. Иммунизация морских свинок, кроликов, собак и кошек инактивированным антигеном из культур гриба Т, гпептадгорйу 1 ез создает у них невосприимчивость к заражению длительностью не менее 12 мес.Была испытана иммуногенная активность трех штаммов гриба Т, гпептадгорпу 1 еэ, обладающих вышеуказанными свойствами. Данные представлены в табл, 1.Таким образом, иммунологическая активность инактивированных антигенов из вышеуказанных штаммов не отличается, поэтому для изготовления вакцины можно использовать штаммы, обладающие вышеуказанными свойствами.Штамм гриба М. сапэ.Морфологические свойства, 18-дневная культура представлена множеством палочковидных микроконидий с утолщением на одном из концов размером 3,0 - 6,0 х 0,7 - 2,1 мкм ровными, прямыми, извилистыми и обильноветвящимися гифами толщиной 0,7 - 2,6 мкм, Часто встречаются 3-8 камерные макроконидии.Культуральные свойства, Штамм культивируется на сусло-агаре, При посеве уколом на чашку Петри с сусло-агаром и инкубировэнии при 24 - 28 С образует белую бархатисто-пушистую колонию, которая к 20 - 25 дню занимает всю поверхность среды, Возможно образование желтого пигмента с обратной стороны колонии,Вирулентные свойства, При помещении на скарифицированную кожу кроликов элементов гриба на 7 - 10 день наблюдается гиперемия и легкое шелушение на месте заражения, На 15 - 17 день образуются крошащиеся астбестовидные корки, плотно 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 сросшиеся с кожной поверхностью, На 20 - 25 день наблюдения образуются корки,.некротические поражения кожной ткани, изаязвления, Самовыздоровление наступает на 35 - 60 день.Реактогенные свойства, При подкожном и внутримышечном введении инактивированного корпускулярного антигена из культуры М. сапа клиническое состояние животных не изменяется,Антигенные свойства, Титры антител в РНГА на 20 - 25 день после иммунизации с оста вля ют 1:160 - 1: 640.Иммуногенная активность, Иммунизация морских свинок, кроликов, собак и кошек инактивированным антигеном из культуры гриба М, сапа создаету них невосприимчивость к заражению длительностью не менее 10 мес.Была испытана иммуногенная активность инактивированных антигенов из трех штаммов гриба М. сапшз, обладающих вышеуказанными свойствами. Данные представлены в табл, 2,Таким образом, иммуногенная активность инактивированных антигенов из вышеуказанных штаммов не отличается, поэтому для изготовления вакцины можно использовать штаммы, обладающие вышеуказанными свойствами,Штамм М, дурзецп 1,Морфологические признаки. Зрелая 18- дневная культура представлена множеством палочковидных, овальных и круглых микроконидий размером 2,9-7,0 х 0,8-2,9 мкм, прямыми, извилистыми и обильноветвящимися гифами толщиной 0,7 - 2,6 мкм. Встречаются 3 - 7-камерные сигаровидные макроконидии,Культуральные свойства, Штамм культивируется на сусло-агаре, При посеве уколом на чашку Петри с сусло-агаром и инкубировании при 24 - 28 С образует белесоватую и белую бархатисто-пушистую колонию, которая к 15 - 20 дню занимает всю поверхность среды, Возможно образование коричневого пигмента с обратной стороны колонии, При весеве споровой взвеси культуры в матрасы с питательной средой к 10 - 12 дню развивается сплошная розовая бархатисто-пушистая пленка,Вирулентные свойства. При нанесении на скарифицированную кожу кролика элементов гриба на 7-10 день наблюдается гиперемия и образование корок, На 20 - 22 день наблюдается образование астбестовидных корок, при отделении которых образуются эрозии кожи, .Самовыздоровление наступает на 35-55 сут,Реактогенные свойства. Подкожное и внутримышечное введение инактивированного корпускулярного антигена из культурыгриба М. цурзецв не приводит к изменению клинического состояния животных,Антигенные свойства, Титры антител в РНГА на 20 - 25 день после иммунизации составляет 1:160-1:640.Иммуногенная активность, Иммунизация морских свинок, кроликов, собак и кошек инактивированным антигеном из культуры гриба М,цурзецв создает у них невосприимчивость к заражению длительностью не менее 12 мес.Была испытана иммуногенная активность инактивированных антигенов из трех штаммов гриба М, цурзеогп, обладающих вышеуказанными свойствами. Данные представлены в табл. 3,Изобретение иллюстрируется следующими примерами.П р и м е р 1. Культуру штаммов Т, тепацгорутез, М. сапв и М. цурзецв выращивают в течение 15 - 20 дней на сусло-агаре при 26 - 28 С. Затем грибную массу каждой культуры снимают с поверхности питательной среды, помещают в отдельный гомогенизатор, добавляют 200 - 250 мл стерильной дистиллированной воды на грибную массу с 8-10 матрасов .и гомогенизируют, Затем гомогенаты культур Т. вептацгорйутез, содержащей 1 млрд 200 млн микроконидий в 1 мл, М, сапв и М. цурзецв, содержащих по 600 млн микроконидий в 1 мл смешивают по 83,3 мл, После смешивания гомогенатов добавляют 250 мл 0,5 о -ного раствора формалина и полученную взвесь помещают в термостат п ри 37 С на 3 сут, Затем к гомогенату добавляют 500 мл 0,8 О- ного раствора нуклеината натрия, расфасовывают по 2,1 мл. замораживают в течение 50 ч при -40"С и высушивают в сублимационной установке в течение 30 ч, При контроле вакцины установлено, что при высеве на МПА, МПБ, агар Сабуро, среду КиттТароцци она не содержит живых клеток грибов и микробной контаминации, остаточная влажность была 2,0 , концентрация в 1 мл - 200 млн микроконидий, при введении кроликам, морским свинкам, кошкам и собакам не вызывала местных и общих побочных реакций и обеспечивала создание иммунитета длительностью не менее 12 мес.П р и м е р 2. Для изготовления 1 л вакцины берут антигены Т, вепсацгорпу 1 ез, М, сапв и М. цурзеов из живой культуры, приготовленные гомогенизацией грибницы в миксере с добавлением дистиллированной воды, Затем гомогенаты культуры Т.510 15 20 иммунитета длительностью не менее 12 25 55 30 35 40 45 50 вептацгорпу 1 ез, содержащей 1 млрд 600 млн микроконидий в 1 мл, смешивают по 83 мл, После перемешивания гомогенатов культур добавляют 251 мл 0,5 о -ного раствора формалина и полученную взвесь помещают в термастат при 37 С на 4 сут, Затем к гомогенату добавляют 500 мл 0,8 о -ного раствора нуклеината натрия, расфасовывают по 2,0 мл, замораживают в течение 10 ч при -45 С и высушивают в сублимационной установке в течение 32 ч. При контроле вакцины установлено, что при высеве на МПА, МПБ, агар Сабуро и среду Китт-Тароцци она не содержит живых клеток гриба и микробной контаминации, остаточная влажность 2,2 о , концентрация в 1 мл 220 млн микроконидий и при введении в организм животных не вызывает местных и общих побочных реакций и обеспечивает создание мес,П р и м е р 3. Для изготовления 1 л вакцины берут антиген М, сапв, Т. вептацгорпутез, М. цурзенв из живой культуры, приготовленной гомогейизацией грибницы в миксере с добавлением дистиллированной воды, Затем гомогенаты культуры Т. вептацгорпусез, содержащей 1 млрд 600 мл микроконидий в 1 мл, культуры М. сапв и.М. цурзеов, содержащие по 1 млрд микроконидий в 1 мл, смешиваются по 83 мл,. После перемешивания гомогенатов культур добавляют 250 мл 0,5 о -ного раствора формалина и полученную взвесь помещают в термостат при 37 С сроком на 4 сут. Затем к гомогенату добавляют 500 мл 0,8%- ного раствора нуклеината натрия, расфасовывают по 1,9 мл, замораживают в течение 15 ч при -50 С и высушивают в сублимационной установке в течение 36 ч, При контроле вакцины установлено, что при высеве на МПА, МП Б, агар Сабуро и среду Китт-Тароцци она не содержит живых клеток грибов и микробной контаминации, при введении кроликам не вызывает местных и общих побочных реакций, остаточная влажность составляет 2,5 , концентрация в 1 мл 240 млн микроконидий и при введении в организм животных обеспечивает создание иммунитета длительностью не менее 12 мес. Для профилактической цели используют вакцину против дерматофитозов. ресуспензированную в 1,9 - 2,1 мл физиологического раствора, которую вводят в область бедренной группы мышц двукратно с интервалом 10 - 14 дней в дозах - лабораторным животным, собакам и кошкам независимо от возраста 0,9-1.2 мл (200-250 млн микроконидий).П р и м е р 4. Пять морских свинок,четыре кролика, пять собак, три кошки иммунизированы против дерматофитозоввнутримышечно в область ягодичной группы мышц, двукратно в дозе 1 мл с содержанием 250 млн микроконидий.При исследовании сыворотки крови вРНГА через 20 дней после второй иммунизации титры антител не выявлены, При накожном заражении культурами Т. 10вептадгорЬу 1 ез, М. сапв и М. дурзеца через 30 дней после второй иммунизации иммунизированные животные заболели.Две морские свинки, два кролика, двесобаки и две кошки, не иммунизированные 15против дерматофитозов и одномоментнозараженные вирулентными культурами Т,гпеп 1 адгорпутез, М. сапв и М. дурзецв вразличные участки кожи так же, как и иммунизированные, заболели дерматофитозами. 20П р и м е р 5. Четыре морские свинки,три кролика, три собаки и три кошки иммунизированы внутримышечно в область бедренной группы мышц двукратно в дозе 0,9мл с содержанием микроконидий 75 млн. 25При исследовании сыворотки крови в РНГАчерез 20 дней после второй иммунизациититры антител не превышали 1:80, При заражении культурами М. дурзецв,М. сапв и Т. аептадгорпутез через 30 дней 30после второй иммунизации накожно не заболели дерматофитозом 2 иммунизированные морские свинки, две собаки, однакошка, Две морские свинки, два кролика,две собаки и две кошки, не иммунизированные против дерматофитозов и зараженныевирулентными культурами Т.пеп 1 адгорпутез, М. сапэ и М. дурзеоп в теже сроки и в тех же дозах, что и иммунизированные животные, заболели дерматофитазом с характерными клиническимипризнаками,Длительность переболевания составила 35 - 65 дней (срок наблюдения),П р и м е р 6. Восемь морских свинок, 45пять кроликов, четыре собаки и три кошкибыли проиммунизированы вакциной противдерматофитозов внутримышечно двукратнов область бедренной группы мышц в дозе1,1 мл с содержанием 200 млн микроконидий. При исследовании сыворотки крови вРНГА через 20 дней после второй иммунизации титры антител составили 1;160 - 1;320,При накожном заражении культурами М,дурзеот, Т, тептадгорйутез, М, сапэ через 5530 дней после второй вакцинации лабораторные животные, собаки и кошки не заболели.Три морские свинки, два кролика, трисобаки и две кошки, не иммунизированные против дерматофитозов и зараженные вирулентными культурами грибов Т,. вептадгорпусез, М. сапв и М. дурзеца в те же сроки в тех же дозах, что и иммунизированные животные, заболели дерматофитозами с характерными клиническими признаками, Длительность переболевания составила 37 - 45 дней (срок наблюдения),П р и м е р 7. Пять морских свинок, четыре кролика, пять собак и три кошки были иммунизированы вакциной против дерматофитозов внутримышечно, двукратно в область бедренной группы мышц в дозе 1,1 мл с содержанием микроконидий 250 млн, При исследовании сыворотки крови в РНГА через 20 дней после второй вакцинации титры антител составили 1:320 - 1;640, При накожном заражении культурами Т. пептадгорпутез, М, сап з и М, дурзецгп через 30 дней после второй иммунизации лабораторные животные, собаки и кошки не заболели.Две морские свинки, два кролика, две собаки и две кошки, не иммунизированные против дерматофитозов и однократно зараженные вирулентными культурами М. сапэ, М, дурзецгп и Т. пеп 1 адгорйусез в различные участки кожи так же, как и иммунизированные животные, заболели дерматофитозом с характерными клиническими признаками заболевания, Длительность переболевания составила 35-49 дней (срок наблюдения),Таким образом, изготовленная предлагаемым способом вакцина позволяет создать напряженный иммунитет у собак, кошек, кроликов и морских свинок без каких-либо побочных эффектов. Формула изобретения Способ изготовления вакцины для профилактики дерматофитозов домашних и лабораторных животных, преимущественно собак, кошек, кроликов, морских свинок, включающий подбор штаммов, выращивание культуры грибов, приготовление гомогената,лиофилизацию препарата; о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью повышения иммуногенности вакцины и создания иммунитета одновременно к трихофитии и микроскории, в качестве штаммов используют вирулентные культуры грибов вида Мсгозрогцв сагыз, Мсгозрогоа дурзецт, Тгспорпутоп щепсадгорпутез, выращивание культур осуществляют раздельно, гомогенаты смешивают в равных объемах, полученную смесь дополнительно инактивируют 0,5 - 0,6 -ным раствором формалина в течение 3 - 4 дней при 37 - 38 С и добавляют 0,8 - 0,9 о-ный раствор нуклеината натрия в количестве 1;1,