Способ определения 4-оксикумарина

(5) ОСУДАРСТ 8 ЕННЫЙ КОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯРИ ГННТ СССР 1"592 Г ИЗОБРЕТЕНИИДЕТЕЛЬСТВ У(54) СПОСО РИНА (57) Изобр ти аналити 28венный меди химии ко ния 4-окс достоверн А, А. Хабаров П с зиробу в среде ме-. батывают посленым водным раство концентрировани 20-25%-ным - . аммония с посния, Анализируемую тилового спирта обр довательно 0,3-0,5% ром перйодата калия ной соляной кислото иза о нении растител Ашхабад, Ылым ьство СССР 21/64, 19 идроксид мерением раствороледующимфпуоресц7 табл. нтенсивнос ченному раствору 1 мл 0,5%-ного водного раствора перйодата калия, 0,5 млконцентрированной соляной кислоты,1,5 мл 25%-ного раствора гидроксидааммония и измеряют интенсивность флуоресценции полученного растворана флуориметре "Квант" или "ЭФ ИА" по отношению к стандартномураствору с известным содержанием 4-оксикумарина. Расчет содержания 4-оксикумарина в анализируемой пробе проводят по калибровочному графику.Чувствительность способа состав ляет 0,01 мкг/мл, что в 1 О раз выше ранее известного.Способ имеет достаточно высокую селективность, так как подобной реакции не дают кумарин, синкумар,обретение относится к фармацев кой и аналитической химии, а о к способам определения 4-ок-. арина, и может быть применено ачественного и количественного еления этого соединения как в м в и в виде примеси вчно е при фармацевтихф гических и санитар мен л иде, такм материалтоксиколо разл ческ х, ен ных исследованиЦелью изобрешение достовернпроиэводимостиределении 4-оксконцентраций О,Способ осущеобразом.Исследуемуюметиловом спирт ляется по вос ости и улучшенипри количествен м оп- азоне марина в ди 10 мкг/мл. вляют следующим астворяюавляют полуе и СПИ САНИ А ВТОРСКОМ(56) Георгиевский В.ко-химические методьчески активных соединого происхождения.1976, с. 45.Авторское свидетеР 1182348, кл. 0 01 ПРГДЕПЕНИЯ 4-ОКСИКУ 1 У етение относится к обласческой и фармацевтическойкретно к способам определе кумарина. Цель - повышениести и улучшение воспроизколичественного определеии полученного раствнеодикумарин, фепромарон, нитрофарин, фурокумарины и ряд других близких по структуре соединений, что проверено на достоверных образцах данных ве 5 ществ, Сведения о флуоресценции 4- оксикумарина и "родственных" соединений при определении по предлагаемому способу приведены в табл.1,Найдены оптимальные значения концентрации реагентов (см.табл.2). В качестве оптимальных по величине максимальной интенсивности флуоресценции и растворимости реагентов выбраны следующие их концентрации: 0,3; 5 0,5 -ный водный раствор перйодата калия, концентрирования (35-38%) соляная кислота и 20-257-ный раствор гидр- оксида аммония, В качестве растворителя выбран метиловый спирт (табл .3) . 20Определены оптимальные условия количественного анализа 4-оксикмарина. В табл.4 представлена зависимость интенсивности флуоресценции 4-оксикумарина от количества 0,57- 25 ного водного раствора перйодата калия. В табл,5 и 6 представлена ана - логичная зависимость от количества концентрированной соляной кислоты и 257,-ного раствора гидроксида аммо ния соответственно, Количества реактивов выбраны исходя из максимального значения интенсивности флуоресценции. При использовании запредель - ных значений количества реактивов желаемый результат не достигается,Прямолинейная зависимость между интенсивностью флуоресценции и концентрацией 4 - оксикумарина сохраняется в области 0,01 вмкг/мл (табл.7), 40Спектр возбуждения фпуоресценции 4-оксикумарина с выбранными реактивами находится в области 270- 400 нм с максимумом 346 нм, спектр излучения 375-515 нм с максимумом 45 418 нм. Величина Стоксового смещения для продукта реакции 4-оксикумарина составляет 72 нм.Способ применен для количественного определения примеси 4-оксику 50 марина в лекарственных средствах группы антикоагулянтов непрямого типа действия и зоокумарине, а также для анализа 4-оксикумарина в чистомвиде.55П р и м е р 1, Количественноеопределение 4-оксикумарина в субстан"ции. 0,01 г порошка 4-оксикумарина(точная навеска) помещают в мерную колбу на 100 мл и растворяют в 8090 мл метилового спирта, доводятобъем раствора до метки метанолом,К 0,5 мл полученного раствора добавляют 6,5 мп метилового спирта, 1 мп0,57.-ного водного раствора перйодатакалия, 0,5 мл концентрированной со-,ляной кислоты (35-387) и через 1 мин1,5 мл 257-ного раствора гидроксидааммония, перемешивая раствор последобавления каждого реактива. Флуориметрируют полученный раствор по отношению к стандартному, содержащему4-оксикумарин в концентрации 5 мкг/мл,Содержание 4-оксикумарина в проберассчитывают по калибровочному графикуП р и м е р 2. Количественное определение 4-оксикумарина в лекарственных средствах и зоокумарине.0,1 г (точная навеска) порошка измельченных таблеток или субстанциизоокумарина помещают в мерную колбуна 100 мл и растворяют в 80-90 мпметилового спирта, доводят объем.раствора до метки метанолом. К 0,5 мпполученного раствора добавляют метанол и реактивы в том же количествеи последовательности, как в примереФлуориметрируют полученный раствор по отношению к стандартному с содержанием 4-оксикумарина 0,5 мкг/мл.Расчет содержания примеси 4-оксикумарина в пробах проводят по калибровочному графику,В результате проведенных исследований нами обнаружено, что в таблетках неодикумарина, фепромарона инитрофаоина содержится в качествепримеси 031% 4-оксикумарина, в"Синкумаре" - 0,187. Зоокумарин содержит в среднем 0,965% примеси 4 оксикумарина,Таким обпазом, предлагаемый способ по сравнению с ранее известнымявляется более чувствительным (чувст.вительность способа 0,01 мкг/мл) ипозволяет проводить количественноеопределение 4-оксикумарина.Предлагаемый способ найдет применение в фармацевтических и контрольно-аналитических лабораториях дляколичественного определения 4-оксикумарина в субстанции и примеси егов лекарственных средствах антикоагулянтного действия, производных этогосоединения (согласно требованиям технической документации), в централь1497527 Продолжение табл,1 ных заводских лабораториях дпя контроля качества и производства данных препаратов, в сельском хозяйстве и агрохимии для определения 4-оксику 5 марина в родентицидных приманках (зоокумарине и др.), а также в санитарно-гигиенических исследованиях для определения остаточных количеств 4-оксикумарина н воздухе производст О венных помещений, сельскохозяйственных продуктах, воде, пбчве и тканях отравленных животных.Обладая высокой достоверностью (чувствительностью и избиратель ностью), способ позволит улучшить воспроизводимость (точность) анализа 4-оксикумарина. ЗоокумаринФепромаронНитрофаринСинкумарПсораленБергаптенКсантотоксинВиснадин и арбокромен Т аблица 2 ОтносиОбъем Реактив центия,7 тел ьнаяинтенсивностьФлуоресценции, 7. рмула из обретени Способ определения 4-оксикумарина, включающий растворение пробы в спиртовой среде, последовательную обработку химическими реактивами, возбуждение и регистрацию флуоресценции, полученного раствора, по которой проводят определение, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения достоверности и улучшения воспроизводимости при количественном определении 4-оксикумарина в диапазоне концентраций 0,01-10 мкг/ пробу растворяют в метиловом спирте и обрабатывают О 57-ным водным раст вором перйодата калия, концентрированной 35-387-ной соляной кислотой и 257.-ным раствором гидроксида аммония при их объемном соотношении 1:0,5:1,5, возбуждение проводят при длине волны 346 нм, а регистрируют фпуоресценцию при 418 нм, по величине которой определяют концентрацию. 41 63 71 98 0,1 0,2 0,3 0,5 Раствор 1 перйодат а 1 калия в 1 воде 1,0 ,0 Соля на 8 2 15 4 25 7 Кон цент риронанная(35-38) 0,2 0,2 0,2 0,2 кислот мл 54 73 84 95 1,0 51,0 101,0 . 201,0 25 Раствор гидрокида амония 4 Таблица Табл 5 ркая фиолеовая Спирты-Оксикумарин Яркаяйиолет Слабая фиолетоная тананол Кумарин6-ИетилкумаринДикумаринНеодикумарин Нет 111497527 Продолжение табл.3 0,9 1,0 9 миловый спир Эфиры лацетатблиц КетоныАцетон оличествооляной сло 15 О,Азотсодержащие соединенионитрил 0 Форамид О,О,78 73 очи расти 0 орител иоксан фоксид Т абл метилсу од Количество4 раствора Т 30 сидаЯ ьная тноси нтенсифлуоре ост 15 85 1 31497527 10 Продолжение табл.7 Составитель О. БадтиеваРедактор Ю. Середа Техред Л.Олийнык Корректор Л. Патай Заказ 4437/45 Тираж 789 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101 007 07 7 0,08 0,8 8 009 09 9 0 10 1 0 10 708090100 70 70 80 80 90 90 100 100