Способ определения зоокумарина

(50 4 С 01 И 21/6 Й КОМИТЕТ СССР РЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙГО АРСТВЕККЛАМ ИЗ ПИСАНИЕ Б К АВТОРСКОМ В ИДЕТ 04 ПРЕДЕЛЕНИЯ 3 ние относитс в частности а (3-(а-атев субстанцояде 54) СПОСО57) Изобреской кимиию з аналити- определеилбензил)У 1 арствоокумикум рин ин) ктахзду объ я и в ого происхзоны. С целности и из иологи а рабо увстви нализи овьппенияельности.8)анские технтвенные срецина, 1963,Туркевичов. М.: Хими ск тывают ода мо в этил с пос сти фл пр е 433.1астворами сида кали доватерида,те и рмамид тенсив спир димющим измереноресценции п ствительност 0,001 мкг 7 мл не вьппе 1 мг Чу нного р оба составлястного спосо6 табл.аюЬ(7 Ф) Курский госский институтИзобретение относится к аналитической химии, а именно к способамопределения зоокумарина (3-(а-атетонилбензил) -4-оксикумарина) в субстан 5ции, объектах биологического проис-.хождения и воздуха рабочей зоны,Целью изобретения является повышение чувствительности и избирательности,способа. 10Способ осуществляют следующим образом,Исследуемую пробу растворяют в967.-ном этиловомспирте и добавляютк полученному раствору 10%-ныл этанольный раствор йода монохлорида,207-ный этанольный.раствор гидроксида калия, диметилформамид, Интенсивность флуоресценции полученного раствора измеряют на флуориметре по отношению к стандартному с известнымсодержанием эоокумарина. Расчет содержания зоокумарина в анализируемойпробе проводят по калибровочному гра.фику. 25П р и м е р 1, Качественное определение зоокумарина в субстанции ибиологических объектах.К 1-2 мг субстанции или 0,1-0,2 млэкстракта и биологического материала 30прибавляют последовательно 1 мл 96 ного этилового спирта, О, 1 мл 107 ного этанольного раствора йода монохлорида, 0,2 мл 20 -ного этанольногораствоРа гидроксида калия, перемешивают и прибавляют 9 мл диметилформамида, перемешивают. В ультрафиолетовом свете со светофильтром УФСнаблюдают яркую голубую флуоресценцию,что свидетельствует о присутствии в 40исследуемой пробе зоокумарина.П р и м е р 2. Количественное определение зоокумарина в субстанции.0,01 г (точная навеска) порошказоокумарина помещают в мерную колбувместимостью 100 мл и прибавляют 7080 мл 967-ного этилового спирта, перемешивают и доводят спиртом дометки, 0,5 мл полученного раствора мерной пипеткой перенбсят впробирку и прибавляют О, 1 мл50107-ного этанольного раствора йодамонохлорида, 0,2 мл 20 .-ного этанольного раствора гидроксида калия, 9,2 мл диметилформамида, переме шивают. Измеряют интенсивность флуоресценции полученного. раствора по отношению к стандартному, содержащему 5 мкг/мл зоокумарина. Измерение про-. водят на флуориметре модели "Виан"или ЭФМА. Содержание зоокумаринарассчитывают по калибровочному графику,П р и м е р 3. Количественное определение зоокумарина в тканях отравленных животных и биологических жидкостях,В фарфоровой ступке измельчают10,0 г биоматериала с 50 мл 967-ногоэтилового спирта. Полученную смесьпереносят в склянку с притертой пробкой и через 30 мин фильтруют в делительную воронкуПри исследовании крови образец 510 мл центрифугируют, прибавляют 50 мл967.-ного этилового спирта, подкисленного соляной кислотой, и помещают вделительную воронку на,100 мл. Приисследовании мочи образец объемом 510 мл помещают в делительную воронкуна 100 мц и прибавляют 50 мл 967-ного подкисленного этиловрго спирта.Далее все операции проводят аналогично, как при определении в тканях,К содержимому делительной воронкиприбавляют 25 мл диэтилового эфира ивстряхивают 1-2 мин, эфирную вытяжкусливают, Экстракцию повторяют дваждыпорциями эфира по 25 мл. Полученныеэфирные вытяжки объединяют в выпарительной чашке и упаривают на водянойбане до сухого остатка. К полученномуостатку после выпаривания прибавляют1 мл 967-ного этилового спирта, и полученный раствор переносят в пробирку, куда добавляют последовательноО, 1 мл 107-ного этанольного растворайода монохлорида, 0,2 мл 207-ногоэтанольного раствора гидроксида калияи 8,7 мл диметилформамида. Измеряютинтенсивность флуоресценции полученного раствора по отношению к стандартному с известным содержанием зоокумарина, Расчет концентрации зоокумарина в анализируемой пробе проводятпо калибровочному графику.П р и м е р 4. Количественное определение зоокумарина в воздухе рабочей зоны.Исследуемьп воздух с объемным расходом 20 л/мин аспирируют через фильтрАФА в течение 15 мин, Для определения1/2 ПДК следует отобрать 300 л воздуха, Вещество с фильтра смывают 1 мл96 .-ного этилового спирта в пробиркуи к полученному раствору прибавляют0,1 мл 107-ного этанольного раствора1385039 В табл. 2 представлена зависимость интенсивности Флуоресценции зоокумарина от количества 107-ного этанольного раствора йода монохлорида (С5 мкг/мл)Таблица 2 Количество раствора йода монохлорида, мл тносцтельная нтенсивность луоресценции, 7. 75-8095 10095-10090-95 80-85 80-85 0,05 0,10 0,15 . 0,20 0,25 0,30 Наличие флуоресценции Вещество В табл, 3 представлены зависимосЗ 0 ти и интенсивности Флуоресценции зоокумарина от количества 207-ного этанольного раствора гидроксида калия (С = 5 мкг/мл) и диметилформаиида соответственно,Яркая голубая ЗоокумаринКумаринСинкумарНитрофарин Нет Т а блица 3 Нет 35 Нет Относительная Количество раствора гидроксида 40 калия, мл Нет интенсивность Флуоресценции,7. НеодикумаринДикумарин Нет Нет фепромаронВиснадин 0,05 Бледно-фиолето" 45вая, быстро затухающая 0,10 0;15 Нет Фенол 0,20 50 Нет КверцетинРутин 0,26 Нет 0,30 Нет Карбохромен Слабая зеленая Количества и концентрации реактивов выбраны исходя из максимального значения интенсивности Флуоресценцни,Псорален йода монохлорида, 0,2 мл 207-ного раствора гидроксида калия в этаноле и 8,7 мл диметилформамида, перемешивают, Измеряют. интенсивность флуорес ценции полученного раствора по отношению к стандартному, с известным содержанием зоокумарина, Расчет концентрации зоокумарина в воздухе рабочей зоны проводят (в мг/мз) по ка либровочному графику или общепринятой формуле.Способ имеет высокую избирательность: подобной реакции не дают кумарин, синкумар, нетрофарин, неодикумарин, фепромарон, Фенолы, хромоны и ряд других близких по структуре соединений.Данные о флуоресценции зоокумарина и близких по структуре соединений при определении по предлагаемому способу представлены в табл, 1Таблица 125 30-35 40-50 70-80 90-100 90-100 90-1001385039 Прямолинейная зависимость между Продолжение табл.5 0,008 0,009 0,010 72 81 90 Относительная интенсивность Флуоресценции,Е Количество диметилФормамида,мл 2, 0,01 10 0,02 19 0,03 27 Нет 0,04 36 Нет 0,05 Нет 0,06 54 Нет 0,07 63 10-20 10-25 30-35 80-92 95-100 95-100 0,08 72 0,09 81 0,10 90 10 0,2 10 19 0,3 27 Таблица 5 ф 0,4 36 45 0 51385039 Продолжение табл.6 Продолжение табл,5 О,О 110 0,0112 О, 0118 0,0121 0,01094 0,01119 0,01178 0,01210 72 81 90 Та блица 625 0,012 изобретен м 12 Способ определения з отличающийся с целью повышения чувст окума 01 0,01180 О, 011480,011950,01130 тем, что,ительности 0;0115 0,0120 и изби бу обр ворами ости ют п л зируемую про ательно раст гидроксида и диметилФор мерением ини полученноанал ле атыв ода эти онохлвом следующилуоре ид рт к 13 с пости мамидо тенсив енци 0,01,01 раство Составитель Л.Русановдура Техред М.Ходанич едактор М ректор Л Пилипенк Заказ 1407 Тираж 847НИИПИ Государственного к по делам изобретений и о 035, Москва, Ж, Раушс Подписноемитета СССРкрытийая наб., д.4/5 Производственно-полиграФическое предприятие, г,ужгород, ул,Проектная,4 5В табл, 6 приведены результаты определения зоокумарина в субстанции,Чувствительность способа составляет 0,001 мкг/мл, ранее известного - не выше 1 мг/кл.20 Предлагаемый способ определения зоокумарина может быть использован для качественного и количественного определения его в субстанциях родентицидных приманках на основе зоокумарина, тканях отравленных животных, биологических жидкостях и воздухе рабочей зоны предприятий-изготовителец,Способ найдет широкое применение в контрольно-аналитических лабораториях, санитарно-гигиенических и ток- сикологических лабораториях при определении в объектах биологического происхождения.