Способ диагностики активной фазы ревматического заболевания

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИН 1 И 33/49 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИН А ВТОРСЯОМУ С 8 ИДЕТЕЛЬСТВУ стит 14 92), при обнаруже брина диагностиревматических заИзобрет ной диагно зовано для сится к лабораторожет быть испольики активной фазы ев аний.- повышение точние от ик нии рую бол иагн ревматиче Цель и ности споих забо бретени ба. ой бестромбои крови прибаваствора протафосфатном буфемесь перемешимин при 25 С, руют 15 мин при й осадок дважраствором хлоПоста что, в б ной кров ген осаж рифугиру комплекс,послибриего и сп чего кол ество растворимо о ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АКТИВНОЙФАЗЫ РЕВМАТИЧЕСКОГО ЗАБОЛЕВАНИЯ(57) Изобретение относится к области медицины, в частности к кардиологии. Целью изобретения является повышение точности. Для этого бестромбоцитарную плазму крови обрабатываютпротаминсульфатом, Смесь перемешивают и выдерживают при температуре ленная цель достигается тем, стромбоцитной плазме венозкомплекс фибрин - фибриноают протаминсульфатом, центт, промывают осажденный с последующим растворением ктрофотометрированием е еляют из соотношения фибри 25 С в течение 30 мин, после чегоцентрифугируют, осадок промывают раствором хлорида натрия; растворяютв уксусной кислоте и спектрофотометрируют при длинах волн 280 и 320 нм.Затем проводят расчет концентрациикомплекса растворимого фибрин - фибриногена в мг/л с учетом объема взятой крови, объема спектрофотометрированного раствора, разницы экстинкций раствора при 280 и 320 нм н коэффициента экстинкции фи риногена вкислой среде и при сго наличии диагностируют активную фазу ревматического заболевания. Способ позволяет повысить точность за счет увеличенияна 433 частоты положительных результатов в активной фазе этого заболевания и уменьшения на ЗЗЕ ложно-положительных результатов в неактивнойфазе заболевания. 3 табл. к осадку 1:(2,80-2,растворимого фит активную йазуеваний.Способ осуществляетобразом.К 0,5 мл исследуемцитной плазмы венозно"ляют 0,5 мл 17.-ного рминсульфата в 0,06 Мре, рН 7,4, М 0,15. Свают н выдерживают 30после чего центрифуги2500 об/мин. Полученньды промывают 0,97.-нымрида натрия и после второго промывания выдерживают пробирку 5 мин з перевернутом виде. Натем осадок растворяют в 3 мл 1,5%-ного раствора уксусной кислоты и. спектроФотометрируют при 280 и 320 нм, Расчет концентрации растворимого Фибрина осуоТествляют из соотношения Фибрина к осадку 1 : (2,80-2,92).Расчет концентрации Фибрина (мг/л) производят по Формуле:АЕ У 10000; 7 Кгде С - концентрация комплекса растворимый Фибрин - Фибриногенмг/л;Е = 2,86 - коэФФициент, учитывающш Отношение белка в осадке к Фибрину;3,Ч - обьем Взятой плазмы, ммЧ - Объем спектройотометриезрованного раствора, мм- зло Разница экстинкдиийоор я с тв ор а при длинах в олн280 и 320 нм;15,0 - коэФФИ 1 иент экстинкцииФибриногена в кислой среде.Например, если 7 = 0,5 мл, /= 3,0 мл, то Ь Г = 0,290-0,0240,266,Следовательно, С = 372 мг/л.При обнаружении растворимого Фибрина в плазме крови диагностируютактивнуо Фазу ревматических заболеваний,У всех 28 обследованых здоровыхлиц растворимый Фибрин в плазме кро-,ви не определялся,П р и м е р 1, Больной Л 32 лет.Клинический диагноз: Ревматоидныйартрит, серонегативный, быстропрогрессирующее течение, активность ТТ 1степени, с множественным поражениеммелких и крупных суставов верхнихи нижних конечностей, ФНС ТТ степени,Исследование при поступлении в стационар: К 0,5 мл цитратной плазмывенозной крови больного, Лишеннойтромбоцитов, центрифугированием при3000 Об/мин в течение 20 мин, прибавили 0,5 мл 1%-ного растзора протаминсульФата в 0,06 М ФосФатном буФере, рН 7,4, М 0,15. Смесь переме.ошали и выдержали 30 мин при 25 С,после чего центриФугировали 15 минпри 2500 Об/мин. Полученный осадокдважды промь 1 пи 0,9/-ным раствором хлорица натрия, затем выдержали пробирку 5 мин в перевернутом виде.Оса-док растворили в 3 мл 1,5%-ного раствора уксусной кислоты и спектроФотометрировали при 280 нм. После спектроФОтометриронания получили величину экстинкции раствора 0,405 при длине волны 280 нм и поправку на мутность 0,063 при длине волны 320 нм,Количество растворимого Фибринарассчитали по ФормулейЕ Ч 10000СХ ч(О 405-0 063)3 100002. 2.0,515,02,86478 мг/л.20Количество растворимого ФИбрина значительно повьпцено. Другие лабораторные данные :СОЗ 48 мм/ч, С-реактивный белок сыворотки 3 мм, концентрация сиЯловых кислот Оу 390 ммоль/л,К-глобулиы сыворотки2,4%,-глобулины 28,6%,В приводимом примере клиническиеданные и известные лабораторные данные соответствуют активности воспалительного процесса 1 ТТ. степени, Резкое повышение концентрации растворимого Фибрина в плазме адекватно клиническим и известным лабораторнымдянньм, Диагноз ТХТ степени активности ревматоидного артрита подтвержден.П р и м е р 2. Тот же больной,чтои в примере 1, Исследование последвухнедельного лечения в стационаре,сопровождавшегося значительным клиническим улучшением, Ход исследования идентичный описанному в примере 1. После спектроФотометрированияполучили величину экстинкции раствора 0,210 при длине Волны 280 нм и45поправку на мутность 0,020 при длиневолны 320 нм,Расчет количества растворимогоФибрина в исследуемой плазмеАЕ М1000050 С -Ч К(О 210-0 020) 3 10000А0,5 152,86266 мг/л.Таким образом, концентрация раст-воримого Фибрина в плазме крови больного значительно снизилась, что со14711326 ответствует клиническому улучшению.В то же время СОЯ у больного продолФжает оставаться резко повышенной(46 мм/ч), С-реактивный протеинпо-прежнему 3 мм, а концентрацияглобулинов в сыворотке повысиласьдо 31,47 Известные лабораторные показатели активности ревматическогопроцесса оказались менее динамичными, чем концентрация растворимогоФибрина в крови,П р и м е р 3. Больной Б., 39 лет.Клинический диагноз: Остеоартроз(остеоартрит) коленных суставов,ФНСТ степени,Ход исследования тот же, что и впредыдущих примерах. После спектрофотометрирования получили величинуэкстинкции раствора 0,050 при длиневолны 280 нм и поправку на мутность0,050 при длине волны 320 нм. Расчетконцентрации растворимого Фибрина висследуемой плазме;Ь Е Ч 10000ХЧ К 510 15 20 25 30 Растворимый Фибрин в испытуемой плазме не обнаружен, что позволило исключить диагноз остеоартрита (т.е. активную Фазу воспалительного процесса) и подтвердить диагноз остеоартроэа (т.е, неактивной Фазы воспалительного процесса).Для проверки диагностической ценности предлагаемого метода проведены параллельные исследования растворимого Фибрина и ПРФ (известный способ) в плазме крови у 28 здоровых лиц, у 49 больных ревматическими заболеваниями в активной Фазе (2 больной ревматоидным артритом, 3 - остеоартритом, 9 - системной красной волчанкой, .2 - системной склеродермией, 2 - геморрагическим васкулитом, 2 - интестинальным полиартритом) и у 18 больных ревматическими заболеваниями в неактивной Фазе (4 больных ревматоидным артритом, 13 - остеоартрозом, одна больная склеродермией).Как видно из табл.1, частота обнаружения в плазме растворимого фибрина у больных ревматоидным артритом, остеоартритом и ревматическими заболеваниями в целом достоверно (соответственно на 48-77,) превышает 35 40 45 50(О 050-0,050) 3 1 0000 Д Ф О, 0,5152,86 частоту обнаружения ПГФ у тех же лип. Следовательно, точность диагностики с использованием предлагаемого способа вьшяе по сравнению с известным - опр ед ел е ни ем ПРФ .В табл. 2 сравнивается частота обнаружения растворимого фибрина и ПРФ в плазме крови одних и тех же больных ревматическими заболеваниями в зависимости от активности процесса (49 больных активной и 18 больных в неактивной Фазе),Таким образом, наличие растворимого Фибрина в крови является достоверно (на 33-437) более точным критерием активности процесса при ревматических заболеваниях, чем наличиеПРФ,В табл.З сравниваются абсолютныезначения концентрации растворимогофибрина, ПРФ и концентрации фибриногена в плазме крови у 12 больных ревматоидным артритом до начала леченияи через 2 недели после начала лечения.Концентрация Фибриногена выбрана какизвестный показатель активности ревматического процесса,Из приведенных в табл,З данных следует, что концентрация растворимого фибрина в крови является более лабильным критерием активности ревматоидного артрита, чем концентрация фибриногена и ПРФ. У одного из 12 больных, у которого двухнедельное лечение было неэффективным, концентрация растворимого Фибрина существенно не изменилась (соответственно 508 и 483 мг/л). У. остальных 11 больных концентрация растворимого Фибрина в крови существенно снизилась, но не достигла нормы, поскольку активность воспалительного процесса при эффективном лечении ревматоидного артрита снижается, но не ликвидируется в двухнедельный срок, Снижение концент.рации растворимого Фибрина в крови,таким образом, является ранним лабораторным признаком снижения активности ревматического процесса и можетслужить надежным объективным критерием эффективности проводимого лече 55 ния, что имеет несомненное практическое значение.Использование предлагаемого способа обеспечивает повышение точности лабораторной диагностики ревма8 1471132 тических заболеваний (по сравнениюс известным) за счет увеличения (на43%) частоты положительных результатов в активной Фазе этих заболеваний, уменьшения (на 33%) - практически устранения - ложноп оложительныхрезультатов в неактивной Фазе заболеваний и более адекватного (статистически достоверного) отражения динамики активности ревматическогопроцесса. хлорида натрия, растворяют в уксусной кислоте, спектрофотометрируютпри 280 и 320 нм, затем рассчитываютсодержание комплекса растворимый 5Фибрин - Фибриноген по формуле Ь Е" 710000С - Г. Ч К где С - концентрация комплекса,мг/л,Ч - объем взятой плазмы, мм;Ч - объем спектрофотометри-:3,рованного раствора, мм= гво -го разница экстинк 15 ций раствора при 280 и320 нм;- 15,0 - коэффициент экстинкцииФибриногена в кислой среде;К = 2,86 - коэффициент, учитывающийотношение белка в осадке кФибрину,и при обнаружении растворимого фибрина диагностируют активную Фазуревматического заболевания,Таблица Группа обследо" Растворимый Фибрин ПРФ в анных Растворимый Фибирин обнаружен ПРФ обнаружены число р 4. пц)больных число р+ ирбольных РевматоидныйартритОстеоартрит Другие ревматические забо 21 21 1 Г) 0-5 21 13 13 10013 13 93+7 15 13 87+ 9 15 14 леванияРевматическиезаболевания 98 й 2 49 27 55+7 0,001 49 48 суммарно Т а б л и ц а 2 Группа обсле- Растворимый Фибрин ПРФ цованных Растворимый Фибрин обнаружени ПРФ обнаружен число р+ шрбольных Ревматические заболевания в активной Фазе Ревматические заболевания в неактивной фазе 49 27 55+ 7 "0,001 49 48 92+2 18 6 33+ 11 . (0,05 18 О 0+6 Формула из обретения Способ диагностики активной фазы ревматического заболевания путем биохимического исследования крови, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, отделяют бестромбоцитарную плазму крови, обрабатывают ее протаминсульФатом, полученпую смесь центрифугируют, осадок промывают раствором 11 52+ 11 (0,001 3 23+ 12 (0,00110 1471132 Та блиц а 3 Больные ревматоидным артритом Здоровые лицаСравниваемыепоказатели До лечения После двухнедельноголечения 12217,8 + 62,2иМ+р%.у.Ф.- сравнение соответствующих величин с группой здоровых лицфф - сравнение средних величин соответствующего показателя до и после лечения,Составитель Л.О 1 илинаТехред А,Кравчук ,Корректор А.Обручар Редактор Е.Папи Подписное Заказ 1603/47 Тираж 788 ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5