Способ выделения неполовозрелых форм трематод из моллюсков

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИН 9) 01 К 67/00 А 6 О/ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ЬСТ К АВТОРСКОМУ Сви Абулад остике и озяйстве . 5-9.(54) СПОС ФОРМ ТРЕ Б ВЫДЕЛЕНИЯ НЕПОЛОВОЗРЕЛЬТОД ИЗ МОЛЛЮСКОВ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИИ(71) Винницкий филиал Украинскойсельскохозяйственной академии(56) фролова Е.Н. и др. Практикумпо зоологии беспозвоночных живот"ньм. - М., 1985, с.85-86,208. е К.И. Практикум по диагвазионных болезней сельско"ньм животных. - М., 1984(57) Изобретение относится к биоло-.гии, а конкретно к зоологии и паразитологии, Цель изобретения - обеспечение жизнеспособности моллюсков ипредотвращение их травмирования, Половозрелых моллюсков выдерживаютсначала 72-96 ч в первом трехкомпонентном растворе, содержащем нитраткалия, нитрит калия и гидроксиламин,каждого по 0,00025-0,00045 мас,Х, ос"тальке вода. Затем моллюсков переносят во второй трехкомпонентный раствор тех же солей при следукщем соотношении компонентов, мас.йф 0,0075 Ов 0095 Оэ 0045 Ов 0065 Ое 0075 Ов 0095остальное вода. Изобретение позволяет на 1007 сохранить жизнеспособностьмоллюсков. 4 табл.Изобретение относится к биологии,а именно к зоологии и паразитологии,а также к средствам обучения в качестве наглядного пособия в учебно-ме 5тодической и научно-исследовательскойработе,Цель изобретения - диагностика заражения моллюсков неполовозрелымиформами трематод с одновременным сохранением жизнеспособности моллюсков.П р и м е р 1. А. Берут 6 (1для контроля, остальные - для опытов)мерных колб, емкость каждой 500 мп,нумеруют их и в каждую наливают дометки дистиллированную воду. На аналитических весах взвешивают навескихимических веществ в количествах,указанных в табл.1, и вносят в колбы2 - 6 поочередно. Получают первыетрехкомпонентные растворы, состоящиез нитрита и нитрита калия и гидроксиламина,Затем нумЕруют 6 стеклянных банокемкостью 250 мл каждая, в первую банку наливают 100 мл дистиллированнойводы, а в остальные - по 100 мл соот-ветствующего раствора (табл,1), вкаждую банку - по одному половоэрелому прудовику. Сосуды закрываюткапроновыми крьппками (в каждой отверстие диаметром 4 мм для доступавоздуха в полость сосуда) и оставляют опять в помещении при 18 С. Ведутнаблюдения в течение 84 ч при помощилупы. Из табл,1 видно, что выдерживание моллюсков в первых трехкомпонентных растворах при заданньм концентрациях химических веществ в течение84 ч не сопровождается вьщелением изих организма церкариев. Появление врастворах опытных сосудов церкариевзамечают по их специфической форметела, похожей на головастиков, ибыстрой подвижности в растворах. Б, Берут 6 мерных колб, емкостькаждой 500 мл, нумеруют их и в каждую наливают до метки дистиллированную воду. Аналогичным образом получают вторые трехкомпонентные растворы (табл.2),По примеру 1 А через 84 ч крынкис банок снимают, моллюсков временнопереносят в другие сосуды, воду и55растворы удаляют, в банки наливаютпо 100 мл воды и растворов, приготовленных в колбах по примеру 1 Б(табл,2). В банки на 9 ч помещают моллюсков, закрывают крышками и ведут наблюдения.Количество церкариев, вьщеленных одним прудовиком, определяют следун щим образом: через 9 ч после помещения моллюсков во вторые трехкомпонентные растворы последние перемешивают стеклянной палочкой и с каждого опытного сосуда отбирают пипеткой 4 пробы раствора по 1 мп в каждой. Пробы наливают в 4 чашки Петри и при помощи лупы ведут учет количества вьщеленных церкариев. По 4 пробам выводят среднее. Среднее количество (содержимое в 1 мп) умножают на 100 (100 мп раствора) и получают среднее количество трематод, виделенное одним моллюском (табл.2).Из табл.2 следует, что выдерживание моллюсков в первых растворах в течение 84 ч с последующим переносом и вьщерживанием их во вторых растворах (эа исключением растворов в сосудах 2 и 6) сопровождается вьщелением иэ организма моллюсков церкариев.По примеру 1 А и Б растворы готовят из расчета использования нитрата и нитрита калия в возрастающих концентрациях от сосуда 2 до 6, а гидроксиламина - в убывающих.В. Последовательность выполнения технических операций аналогична А и Б, за исключением внесения во вторые растворы гидроксиламина в возрастаницих концентрациях (табл.З).Из табл.З видно, что выдерживание моллюсков 84 ч в первых растворах с последукицим их перенесением и выдерживанием в течение 9 ч во вторых растворах, приготовленных с добавкой гидроксиламина в возрастающих концентрациях 0,007-0,01%, не сопровождается вьщелением церкариев из организма моллюсков за исключением сосуда 4, где концентрации всех трех химических веществ аналогичны сосуду 4 табл.2.На основании проведенных исследований делают общий вывод граничными значениями концентраций нитрата калия в первых растворах являются 0,00025-0,00045%, нитрита калия - 0,00025-0,00045%, гидроксиламина - 0,00045-0,00025%, во вторых растворах - 0,0075-0,0095% для нитрата калия, 0,0045- 0,0065% для нитрита калия и 0,0095-0,0075% для гидроксиламина.з 13915 При таких концентрациях выдерживание моллюсков в первых растворах в течение 84 ч с последующим перенесением их во вторые растворы и выдерживание их на протяжении 9 ч сопровождается5 выделением церкариев из организма моллюсков. При этом для приготовления сложных трехкомпонентных растворов нитрат и нитрит калияприменяют в возврастакщих концентрациях, а гидроксиламин - в убывающих по отношению к концентрациям первых двух веществ.П р и м е р 2. Берут мерную колбу 15 емкостью 500 мл. Наливают дистиллированную воду до метки. Готовят первый трехкомпонентный раствор из вышеназванных веществ при концентрации каждого 0,000357. - табл.4, сосуд 4. 20 Методика проведения опыта аналогична примеру 1 (табл.4).Из табл.4 следует, что граничными значениями времени выдерживания моллюсков в первом растворе являются 25 72-96 ч, а во втором растворе 6-12 ч. При этих значениях времени и последовательности из организма моллюсков не выделяются церкарии.Выдерживание моллюсков во втором растворе в течение 5-13 ч без предварительного выдерживания их в первом растворе не сопровождается выделением из их организма церкарий.Изобретение дает возможность на 100% сохранять моллюсков живыми пос 35 ле получения от них церкариев и использовать их по другому назначению, проводить диагностические исследования на предмет видовой принадлежнос 40 ти заражения моллюсков зародышами фасциол и на этом основании прогнозировать возникнование у животных 574фасциолеза и предупреждение его возникновения, получать церкарии в нужном количестве и в нужное время, выделять церкарии из организма моллюсков естественным путем. Изобретение также характеризуется доступностью применяемых химических веществ и сосудов, простотой технического исполнения и гигиеничностью.Изобретение можно испольэовать в вивариях для дегельминтиэации моллюсков с целью оздоровления их и продления срока жизнеспособности, а также для предупреждения их гибели, и в педагогическом процессе обучения студентов и учащихся в учебньк заведениях биологических профилей, а также в лабораторной практике, особенно ветеринарных и медицинских профилей.Формула изобретенияСпособ выделения неполовозрелых форм трематод из моллюсков, включающий помещение моллюсков в раствор, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью обеспечения жизнеспособности моллюсков и предотвращения нх травмирования, в качестве раствора используют водные растворы, содержащие нитрат, нитрит калия и гидроксиламин, причем сначала моллюсков помещают на 72-96 ч в раствор, содержащий, мас.йзНитрат калия 0,00025-0,00045 Нитрит калия 0,00025-0,00045 Гидроксиламин 0,00025-0,00045 Вода Остальное, а затем на 6-12 ч переносят в раствор, содержащий, мас,7;Нитрат калия 0,0075-0,0095 Нитрит калия 0,0045-0,0065 Гидроксиламин 0,0075-0,0095 Вода Остальное0 0,004 0,0475 0 0,05 0,0095 0 0,01 Выделеноцеркариев, штук 0 0 50 125 Навески нитратана 500 мл воды, еКонцентрациянитрата в растворах, Е Навески нитритана 500 мл воды, гКонцентрации.нитрита в растворах, Е Навески гидроксиламина на500 мл воды, гКонцентрациигидроксиламинав растворах, Х Навеска нитратана 500 мл воды, гКонцентрациянитрата в растворах, 7. Навеска нитритана 500 мп воды, гКонцентрациянитрита в растворах, Х Навеска гидроксиламина на 500 мл води, г Концентрация гидроксиламина в растворах, 7. 0,00025 Нитрит калия О, 001251391557 Покаэатели12 3 Первые растворыНитрат калия 0,00175 0,00225 0,0025 0,00035 Оэ 00045 0)0005 0 0,001 0,00125 0 0,0002 0,00025 Нитрит калия 0 0,001 0,00125 Оэ 00175 Оэ 00225 Оэ 0025 0,00035 Оэ 00045 0,0005 0 0,0002 0,00025 Гидроксиламин 0 0,0025 0,00225 0,00175 0,00125 0,0010,00035 0,00025 0,0002 0 0,0005 0,00045 Вторые растворы Нитрат калия 0 0,035 0,0375 Оэ 0425 Оэ 0475 Оэ 05 Оэ 0085 Оэ 0095 Оэ 01 0 0,007 0,0075 Нитрит калия 0 0,02 0,0225 0,0275 0,0325 0,035 0,0055 Оэ 065 0,007 0 0,004 0,0045 Гидроксиламин 0 0,035 Оэ 6375 0 0,007 0,0075 0,0425 Оэ 0475 0,05 0,0085 0,0095 0,01 0 0 125 ТаЬдвца 4 Время юфарвива 1 растворие нопаеековэ а 97Звфелаао даркаф 3 мавю"фк С)1 72 В 4 96 97 О, О О О О Зрей ааварйкваюа нолнюсковэ чЬдалаяо церкаРмавэ штук П раствор 13 5 6 9 12 13 О О О О О Навеска на 500 млводы, гКонцентрация врастворе, 3 Навеска на 500 млводы, гКонцентрация врастворе, 7 Навеска на 500 млводы, гКонцентрация врастворах, Х Навеска на 500 мл воды, гКонцентрация врастворах, 7 Навеска йа 500 млводы, гКонцентрация врастворах, Е Навеска на 500 млводы, гКонцентрация врастворах, Х Выделено церкариев, штук Таблица.