Питательная среда для выделения патогенных нейссерий

(72) АвторыГ.Гаджиева, Н.Н. изоб етени стюкова и Дагестанский научно-ипо производству питателордена Трудового Краси микробиологии им. и следов ательс ьных сред и Н овательскийпидемиологии еи АИН СССР(71) Заяв го Знамени институ етного акад. Н.Ф.Г(54) 11 ИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ НАТОГЕННЫХ НЕЙССЕРИ 1 ЕНИ ержит аммонийную сол о-крезолсульфофталеи питательной основы о 5,5 диброма, в качестведержит као-дрожжевои гидем количествемпонентов, г/леиново-дрожкев иноедующ лиз ом соотношении к Ка-креалеин 005-0,0140,2-11,0унщим образоминово дрожэолАг реду готовят слолучение сухого уры чаИзобретение относится к медицинской микробиологии и касается питательной среды, которая может быть. использована для выделения патогеннык нейссерий: менингококка, гоно- кокка от больных и носителей, а также длякультивирования этих микроорганизмов и изучения их культурально-биохимических и серологических свойств.Известна питательная среда для деления патогенных нейссерий; содержащая питательную основу сыворот 1 ку крови, агар-агар и воду 1 .Однако известная питательйая среда не обеспечивает высоких ростовых свойств.Цель изобретения - повышение ростовых свойств среды.Эта цель достигается тем, что ннтательная среда для выделения патогенных нейссерий, содержащая питательную основу, сыворотку крови, агар-агар и воду, дополнительно сожевого.гидролизата.2 вес.ч. сухого казеина смешивают с 20 ч. воды. Разведение казеина ведут при постоянном перемеши ванин и температуре 70-80 С, при рН=8,4. Затем 107-ный вязкими раствор казенка охлаждают до температо48-50 С и вносят в него по одной сти кормовых дрожжей и фарша подже,8-44,0 ,2-11,0 3лудочной железы (активностью 20 ед/млпо Фульд-Гроссу). После тщательногоперемешива.щя устанавливают рН 7,27,4 с помощью 30%-ного раствора едкого натрия, Ферментативный гидролизпроводят в течение 4 ч при темперао,Этуре 48-50 С и при рН 7,2-7,4.После истечения указанного времени гидролизат подкисляют концентрированной соляной кислотой (уд. вес.1,14) до рН 3,6-3,8, затем доводятдо кипения и Фильтруют. После этогокислый гидролизат подщелачивают дорН 7,6-7,7, кипятят 10-15 мин и проводят вторую фильтрацию. В получен"ный фильтрат вносят хлористый натрийи углекислый натрий ( 80% и 13,4%, со.ответственно, к содержанию сухихвеществ в гидролизате). После раст-,ворения внесенных солей гидролизатФильтруют и при температуре бО Свысушивают на распылительной сушилке.Приготовление сухой основы среды.В шаровую трехлитровую мельницупомещают 10 Фарфоровых шаров, затем вносят 10,2-11,0 г тафуинско"го порошковидного агар-агара с прочностью 400-500 г/см, 40,8-44,0 г.сухого казеиново-дрожжевого гудролизата и 0,005-0,014 г аммонийнойсоли 5,5 дибром-о-крезолсульфофталеин добавляют еще 15 фарфоровыхи 1 металлический шар.Мельницу закрывают и прокручивают в течение 25-30 мин. Готовуюоснову расфасовывают,Приготовление среды.Навеску сухой основы 51-55 гперемешивают в 1000 мл дистиллироннои воды, ставят на медленньогонь, кипятят до появления крупных пузырей и разливают в склянки, автооклавируя при 115 С в течение 20- 30 мин. Затем основу остужают до 40-45 С и добавляют нормальную лошадиную или бычью сыворотку, 10- 15% для менингококка и 20% для гонококка, перемешивают и разливают по 20-25 мл в чашки Петри и по 5 мл в пробирки (для скошенного агара), Среда имеет светло-зеленоватый цвет.Содержание всех вышеперечисленных ингредиентов в среде в следующем соотношении, г/л:Казеиново-дрожжев70 б 9 Таблица 1 900 СЙ1 среднее арифства колоний нанах в двух опыта Приведенные в тическое количеагаровых пласти 1 данные пока. ая среда (КДА) ьной Хля разм агар "О". вариации Юедняя арифмеосших к олозывают, что предл является более оп вития менингококк Так, при коэффици 5 не превышающем 20тическая (Х) числ ф ний двух штаммовпредложенной сред ае тим е%, ср а выр менингококка нае составляет 1114Сыворотка лошадинаяили бычья 100,0-200,0Аммонийная соль5,5-дибром-о-крезолсульфафталеина 0,005-0,014Дистиллированнаявода Остальное(что дает кислотность рН - 7,2-7,4)Среда в чашках Петри и в пробир О ках используется для посева первичного материала, подозреваемого насодержание менингококка в спинно-мозговой жидкости от больных менин-,гитом и носоглоточной слизи носите З лей, или гонококка в отделяемом изуретры и шейки матки от больных сподозрением на гонорею, для культивирования и изучения чистых культур этих микроорганизмов. г 0 П р и м е р 1. О,1 мл взвесименингококка или гонококка, содержащей условно 10 микробных клеток ( покишечному стандарту ГИСК) наносятна поверхность 5 чашек 1 етри с сыу 5 вороточным агаром, приготовленномна предложенной среде. Для контроля делают посев на известную средудля менингококка или мясо-пептонныйагар с добавками для гонококка,Учет результатов производят через20-24 ч инкубации при 37 С.Сравнительное испытание сред дляменингококка приведено в табл. 1.5 907069 171 колоний, тогда как известная среда - агар "О" обеспечивает рост колоний в пределах 0-82. При сравнении полученных данных разница оказалась значимой,(й Р) в пользу 5 предлагаемой среды.Как видно из данных табл. 2, на предложенной среде средняя арифметическая выросших колоний превышает таковое на известной среде -4сывороточном мясо-пептонном агаре с добавками. При посевной дозе 1000 микробных клеток на предложенной среде вырастает, 112-276. колоний, известной - 107-185 колоний. Разница между средними показателями сравниваемых сред оказалась значимой в пользу предложенной среды (штамм Богомолов), для штамма 2 среды оказалась равнозначной. В табл.2 20 приведено сравнительное испытание сред для выделения гонококка. Таблица гомолов 50 ормула иэобрет еда для выделениярий, содержащая писыворотку крови, о т л н ч а юейс пато снову, воду,тательн агар-аг опытно П р и м е р 2. 220 проб носоглоточной слизи от лиц, бывших в контакте с больными менннгококковым менингитом, параллельно высевают в чашкиПетри на предложенную и известнуюсреды. При посеве чередовались. Всего выявлено 90 носителей. На предложенной выявлено 88 положительныхнаходок, а на известной всего 48,причем совпадений на обеих средахбыло 46. Предложенная среда дала47,77 дополнительно положительныхнаходок к известной среде.П р и м е р 335 образцов гнояиз уретры и шейки матки от больныхс подозрением на острую. гонорею параллельно засевают на предложеннуюи известную среды. Пробирки с засеянными средами помещают в эксикатор, содержащий 5-Х углекислогогаза,Из 3 а 5 посевов одновременно н и контрольной средах был получено 27 совпадающих положительных находок. Предложенная среда обеспечила дополнительно еще 4 положительных результата,П р и м е р 4. Штаммы менингококка, подлежащие серологическому группированию, параллельно культивируют в пробирках на предложенной иизвестной средах. 26 культур менингококка были испытаны на их способность агглютинироваться (РА) группоспецифическими антисывороткамии в реакции преципитации (РП) на со-держание группоспецифического полисахаридного антигена.В РП удалось определить серогруппу у 19 штаммов, причем у 14 из нихна обеих средах результаты группированиясовпали, у 4 штаммов серо-.группу определяют во взвеси культуры, выращенной на предложенной итолько у 1 - на известной, В РА удалось группировать 20 культур, в 11случаях совпали результаты на двухсредах, в 5 - с опытной среды и в4 - только с контрольной.Следовательно, культуркрованиештаммов менингококка на предложенной среде не снижает их способностьгруппироваться антисыворотками вРА и РП по сравнению с культурами,выращенными на известной средеП р и м е р 5. Сахаролитическиесвойства менингококка и гонококкана предложенной среде с добавлениемсыворотки, 0,97 углеводов (глюкоза,мальтоза, сахароза, левулеза), и фенолово-красного индикатора проявлялись более четко, чем на контрольныхсредах того же состава, но приготовленных на основе перевара Хоттингера или агара "О" для менингококка и мясо-пептонном агаре с добавителями для гонококка.Преложенный способ позволяет повысить ростовые свойства среды.Общая экономическая.эффективностьпри выпуске предлагаемой среды взамен сред, рекомендуемых практическилабораториям для выделения менингококка и гонококка составит 237250 руб907069 40,8-44,0 Составитель С.Малютина Редактор Г.Волкова Техред И. Рейвес Корректор Л.Бокшан, Заказ 519/34 Тираж 505 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5 Филиал 1 П 1 ППатент , г. Ужгород, ул. Проектная, 4 щ а я с я тем, что, с целью повышения ростовых свойств среды, она дополнительно содержит аммонийную соль 5;5 дибром-о-крезолсульфофталеина, в качестве питательной основы она содержит казеиново-дрожжевой гидролизат при следующем количественном соотношении компонентов, г/л воды;Казеиново-дрожжевойгидролизат Сыворотка крови 100,0-200,0Аммонийная соль5-5 дибром-о-крезолсульфофталеина 0,005-0,014Агар-агар 10,2-11,0Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Лабинская А,С. Микробиологияс техникой микробиологических исследований. М., "Медицина", 1972,с, 447, пр. 2 б,