Аппарат для культивирования клеток и вирусов

(23 иорите СССРелам изобретений и открытий 3) 53) УДК 663.038, А, Худяков и И, И, Фил есоюзный научно-исследовательск рныи институт аявктел 54) АППАРАТ Д КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КЛЕИ ВИРУСОВ роваазрез; Изобретение относится к биологической промышленности и может быть использовано для,получения клеточных культур и вирус в влрусологии и,вакцинном производстИзвестен аппарат для культивирования клеток, содержащий емкость и размещенный в ней абсорбер, укорепленный на валу вривода с возможностьювозвратно-,постулательного перемещения по вертикали 11). Этот акппарат является наиболее близким,к изобретению по техничеакой сущности.К недостаткам известного алпарата от - сносятся сложность конструкции, отсутств,:1 е герметичности и стерильности н нроцессе культивиреванин из-за тото, что вриводной механизм расположен в емкости с культу- ральной жидкостью, а также небо.чьшой объем питательной среды, заполняющей емкость.Целью, изобретения является упрошен 1 е конструкции и обеспечение стерильности вроцесса культивирования.Для дсстижения этой цели абсорбер выполнен в,виде перфорированного резервуара, заполненного абсорбизующим мгтс.,палом и снабженного центрально установленной на его днище перфорированной обечайкой и крышкой в форме усеченного кону:а, меньшее основание, которого обращено вниз и имеет отверстие для прохода ,культура ной жидкости внутрь обечайки, при э вал привода заключен в сильфон и жес о саязан с крышкой резервуара.5 На фиг. 1 - аппарат для юультивнния клеток и вирусов, вертикальный р на фиг. 2 - то же, вид сверху.Аппарат содержит цилиндр 11 чеакуо емкОсть 1 со зпецифически(м днсм заелюченную в термоизолирсванную рубашку 2.иапользуемую .для стерил 11 зации п термостатирования. На крыюке 3 аппарата установлены: привод, состоящий пз пнавмоцилиндра 4 и поршня с рабочим штоком б или рабочим органом, штуцеров б и 7 для подачи сжатого воздуха и 1 вглом 8; датчикк 9 рН, кислорода 10, температуры 11, контрольный термометр 12, уровнемер 13, которые вводятся в дространспво между тен ками емкости 1 и ПОрфортвровасного резерв ара 14. На 1:,ръшке 3 также,выполнены патрубкп 15 для питательной сре,:,ы, 1 б, 17 газовой амес:1 и смотровые окна 18. Дл глубинной подачи газовой смеси в емкость -ь 1 установлен барботер 19, а для слива питательной среды - патрубок 20.В рубгшке 2 имеются патрубки 21, 22 дляводачи пара пли термостатированной воды.Газовая смесь падается в емкость 1 и выво- зО дится из нее через стерплизующий 2-ка 751827мерный фильтр 2 д с набивкой из стекловаи пардВой рубп 1 нпкдй.Лбсорбор вьппоппнен в виде запоспненного дбсорбируюгцим материалОм 24 перфорирозанного резер(вуара 14 с центрально установленно 11 на его дсиище перфо)ирозачной обечайкой 25. ПерфорИрованНый резервуар 14 соединен съвмпо болтами 2 б с,ирышко 11 27, име 1 ощей центральное отверстие для прохода культуральной жидкости и закрепленной на нижнем ыо 1 пце Вала 8 привода, которыЙ зяпсл 1 очев з сильфон 28, закрепленный:пд,краям хомутами 29.ВклОение гнеьмО 1 пр 1 пвода осущостзл 51- ЕТСЯ З ЗДЗ 1 ГОИМОСТИ ОТ СИГНЯЛЯ С Да ЧИК 9 рН,Аппдрат работает следуОшим дбрдзсм.Пром 1 тый абсорбируюш 1 й материал 24 (стеклянные трубси, шаргпки, кольца и т, л.1 засыпается в тпрсостра)испво мв)кду стенка.;. перфорпрованного резервгдра 14 и и рфори 1 рсзакной обеЯ":ки 25. Затссм перфор 1:- рсВанный;резерВудр 14 слрикрелляог и крышечке 7 болтами 28, псслс чего:с)ьппдсд 8 аипарата в сборе с иНевмопр 11 водом., рзер 1 зуаром 14 и датчиками 9 - 12 уста 11 азлнваетс 51 н закрвп".яется з Омкссти 1, эдте ,з руоашп;у 2 подастся пдр через натрубск 22, и аппарат стерплпзуется 2 ч прн 130 С, После Охлаждения въпкость 1 зяполн 51 ется на 0,65 своего объема клеточной суспензией с оптимальной посевной концептрасцией л я данного Т 1 П 11 клеток, а в рубашку 2 через патрубки 2(, 22 подается от термостата зоддте 1 пСрдт 1 О 11 + 37 С,После свдгпментации клеток и сих адг:з 1 гп на поверхности абсорбру 1 ощего материала 24,начинается процесс пролиферацки клс то 1 с, который сопрово)кдается интенглпв.ым ,.)ясцеплением Глсокозы В 1 питятельп 10 й среде с ЯкоПленем ) Глекислоты и происхо. дит смещение .рН в,кислую стсЗону. В это время сигнал с дат пика 9,рН аВтоматичвоки включает подачу газовой смеси через 2-камерный фильтр 23 для коррегирования рН гп 1 тателькой сроды до оптжальндй гзедичн. ны, и одновременно подаемся в пнввмоц,1- линдр 4 через штуцер 7 сжатый воздух. Пврфорировднный резерВуар 14 лол:-1 мается из жидкостипри этом 1 Г 1 итательгЯя среда, наюдящаяся над ним, через центральное отверстие крышки 27 перетекает г. перфорированную обечайку 25 и затем через абсорбирующий материал 24 - з емкость 1. Тяппи 1 м образом создается дополнительное радиальное перемешивание питательной среды. Во время подъема перфорированного резервуара 14 и кратковременной экспозиции в течение 1 - 2 мин происходит насыщение питательной среды газовой смесью, а поверхность клеток также реагирует с газовой средой. Затем перфорированный резервуар 14 вновь погружается в питательную среду за счет подачи вжатого воздуха в штуцер б пневмоцилиндра 4. После, выходасистемы на ОГПТ 5 пмальную веспичину рН подача газовой смеси и движение перфорированного резервуара 14 прекращаются.5 Конпроль содер)кания кислорода осуществляется,датчиком 10 кислорода и втори Ньпм прибором. Регул 1 прсвание процессакусьтизировдния Гмосжет также осуществляться ло ссДержанию кислорода в лнтателькой среде,з зависимости от сиглала сдатчиком 10. В этом случае регулированиерН осущвстВляется за счет добавления расТВОРЯ К 1 ПСЛОТЫ Или Ще,"ци,После того, как клетки образуют монослой ги зыработаот литательный субсцрат(по накоплению молОчной кислоты,;Нровинозрадной, усменьшеиие глюпсозы, с пвигурН в кислуо стсрон за счет нслетуч 1 х продуктов). ростовая питательная среда слиздстс 5 через лятр 1 бок 20, и,в д,1 пдрат ззо,дятоя чцрез патрубок 15 поддср)кизд 1 огцаяпитательная среда и матр 1 вый П 1.:,-,ус.Режим культ 1 пзирозан)1 я вн 1)1 сд 111 ЯлоГнчен режимм кгльтиВи,)озд)н 11 я к.стсх, но26 учетом с)еобенностей условий дзрирсзан 115си ло 1 пдержаНия рН,Контролем окончания процесса культнз 1 прсзяп 11 я В 1 пр, са язл 51 е ся;10, зле)Бе,з с спензнн с)ущенных клеток, прекращение потреблсня гл 10 кдзы и с:виг рН в гцелдч:110стс 1)ону. Обычно этот срок страбатызаюг,кд дру:1 их системах и он,выра)115 ется вч Д . 11 Х .Перед еливом вируса перфориро 1 за 1 гный65 (резерзуар 14 поднимается и опускается зПитательную среду на повышенной скоростизд счет подачи з пнвзОцпли:51,дО 4 сжатоговоздуха под более выаким, Зм рдбо 1 с;.,даВлс;1 исм. При этом 1 слеткн, лдряжепные1 О вирусом, .интенсивно омываются и стряхигздюго с ловерхности абсс)бируОпего материала 24. СлИваОт зир 1 с через латрубок20, прн этосом дбсорбирующий материал 24остается в емкости 1 для дальнейшей те 46;,р:Л 1:з,)нпи. Затем перфорированный рс.з "р, др 14 с дбсорб 5 руОгц 1 м,мдтсридлом 24с)пппмдстся и отправляется на мойку, Емкость 1 промывается, на крышке 27 закрегЛяется заранее подготовленный пер 1)ср 5160 рованпый резервуар с промытыя абсорбируОшпм материалом 24 и цикл псвторяется. Выл длнение аппарата для культизировдния клеток и вирусов подобно 1:констдук ц 11 И 1 юзсвдлит:1) использовать промыш,енгпую алларатуру для суапензионного 1 сультвзир ода:1 я и для монослойного культизирогза;ия з тпроышленных объемах как перевиваемых, 60 тагк и первичных клеток и получения на лихвируса, что оугцествекно повысит производительность труда по сравнению с применяемой технологией культ 5 зирования,клеток В мятрасях, роллерах и ндгодисксвых ап спаратах;751827 777 2 2),деккаипировать сыворотсчную питательную среду, на которой культивируют клетки, без потерь клеток, н а блюда е, ы х при суапензионном культивиразании;,3) производить процесс культивирования в стерильных уславиях; 4) существеннло упростить конструкцию по сранению с аналопичнымп аппаратами, так как перемешивающее устройство:о: держит только абосрбер в виде перфорированнопо резервуара и пневмоцилиндэ; 5) упростить:репулирование режимов перемешлвания путем изменения давления и подачи сжатого воздуха в пневмоцилиндр; 6) упростить процесс отделения абсорбирующего материала от вирусной суспензии для дальнейшей его качественной мойки для повторного использования; 7) уменьшить простои аппарата за счет использования заранее подготовленного контейнера с абсорбирующим материалом. Формула изобретения Аппарат для 1 ллыивирования клеток и,вирусов, содержащий емкость и размещен ный,в ней абсорбер, укрепленный на валупривода с,возможностью возвратночпоступательного перемещения ло вертикали, о тл и ч а ю ш и й с я тем, что, с целью упрощения конструкцп и и обеспечения:териль ности, процесса культивиравания, абсорбер,выполнен в виде, перфорированного резервуара, заполненного абсорбпруюшим материалом и снабженного центрально установленной на его,днище перфорированной обе чайкой и крышкой в форме усеченного конуса, меньшее основание которого обращено вниз и имеет отверстие для прохода культуральной жидкостями внутрь обечаики, при зтом вал привода заключен в сильфон и 20 жестко связан с крышкой резервуара. Источник информации, принятый вовнимание,при экспертизе:1. Авторское свидетельство СССР 25 ;А 579302, кл. С 12 В 1/10, 1975.751827 Составитель И. Шабалинасдактор Н. Спиридонова Техред А. Камышникова Корректор С, фай ип. Харьк. фил. пред. Патент оказ 883,1008 Изд. М 399 Тираж НПО Поиск Государственного комитета СССР по дела113035, Москва, Ж, Раушская наб 22 Подписное изобретений и открытий д 4/5